本发明专利技术属于生物发酵领域，要解决的技术问题是抗菌肽生产成本高，效率低，本发明专利技术为解决上述问题，提供一种抗菌肽发酵生产方法，节约了成本，提高了生产效率。本发明专利技术采用牛骨蛋白胨作为原料，牛骨蛋白胨每吨一万多，大大降低了成本，并且培养周期短，提高了培养效率，发酵培养PH值范围放宽了，便于操作控制。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于生物发酵领域，要解决的技术问题是抗菌肽生产成本高，效率低，本专利技术为解决上述问题，提供，节约了成本，提高了生产效率。本专利技术采用牛骨蛋白胨作为原料，牛骨蛋白胨每吨一万多，大大降低了成本，并且培养周期短，提高了培养效率，发酵培养PH值范围放宽了，便于操作控制。【专利说明】
本专利技术属于生物发酵领域，具体涉及。
技术介绍
抗菌肽是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽，这类活性多肽多数具有强碱性、热稳定性以及广谱抗菌等特点，抗菌肽对细菌有很强的杀伤作用，尤其是其对某些耐药性病原菌的杀灭作用更引起了人们的重视。除此之外，人们还发现，某些抗菌肽对部分病毒、真菌、原虫和癌细胞等有杀灭作用，甚至能提高免疫力、加速伤口愈合过程，抗菌肽的广泛的生物学活性显示了其在医学上良好的应用前景，其应用价值很大。 目前发酵生产抗菌肽一般利用植物蛋白胨作为培养基原料，植物蛋白胨价格比较贵,每吨4万多，成本高，原来发酵温度为36-37°C恒温培养，发酵周期需要32小时，生产效率低，并且PH范围小，只能控制在5.4-5.6之间，不易操作。
技术实现思路
本专利技术针对上述抗菌肽生产成本高，效率低的问题，提供，节约了成本，提高了生产效率。 本专利技术采取的技术方案为:，包括以下步骤:(1)、摇瓶培养:按照配方配制IL培养基，平均分装与10个100ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:80?120，摇床培养，搅拌速度为180?220rpm/min，温度30?34°C，培养时间8?12小时；培养基配方:牛骨蛋白胨8?12g 酵母提取物3?7g 食盐3?7g用蒸馏水定容至1L，高压来菌制得枯草杆菌菌种；(2)、发酵罐发酵:按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至30-34°C，采用枯草杆菌菌种进行发酵，菌种与培养基比例为0.2:6?7，PH5.2?6.0，温度30_34°C，搅拌速度为180?220rpm/min，整体发酵时间为16?20小时，在发酵过程中，每2小时取样检测，12小时后补加第一步培养基，加入量为第2步的枯草杆菌菌种和第2步培养基总体积量的10?20%,显微镜下检测菌体数量较多，大小均匀，没有其他杂菌生长，合格后得到含有抗菌肽的发酵物，培养基配方为:玉米:2?4%豆栢:I?3% 牛骨蛋白胨:0.5?1.5% 硫酸铵:0.5?1.5% 葡萄糖:0.1?0.5% 磷酸二氢钾:0.2?0.4% 麦芽糖:0.5?1.5% 消泡剂:0.015 ?0.025%。 上述抗菌肽发酵生产方法，包括以下步骤:(1)、摇瓶培养:按照配方配制IL培养基，平均分装与10个100ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:100，摇床培养，搅拌速度为200rpm/min，温度30_34°C，培养时间10小时；培养基配方:牛骨蛋白胨1g 酵母提取物5g 食盐5g用蒸馏水定容至1L，高压来菌制得枯草杆菌菌种；(2)、发酵罐发酵:按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至30-34°C，采用枯草杆菌菌种进行发酵，菌种与培养基比例为0.2:7，PH5.2-6.0，温度30_34°C，搅拌速度为200rpm/min,整体发酵时间为16-20小时，在发酵过程中，每2小时取样检测，12小时后补加第一步培养基，加入量为第2步的枯草杆菌菌种和第2步培养基总体积量的10-20%，显微镜下检测菌体数量较多，大小均匀，没有其他杂菌生长，合格后得到含有抗菌肽的发酵物，培养基配方为:玉米:3%豆栢:2%牛骨蛋白胨:1%硫酸铵:1% 葡萄糖:0.3% 磷酸二氢钾:0.3%麦芽糖:1% 消泡剂:0.02%。 本专利技术采用牛骨蛋白胨作为原料，牛骨蛋白胨每吨一万多，大大降低了成本，并且培养周期短，提高了培养效率，发酵培养PH值范围放宽了，便于操作控制。 【具体实施方式】 实施例1一次1L发酵罐的抗菌肽发酵生产(1)、摇瓶培养:按照配方配制200mL培养基，平均分装与3个500ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:80，摇床培养，搅拌速度为200rpm/min，30°C培养10小时；培养基配方:牛骨蛋白胨2g 酵母提取物Ig 食盐Ig用蒸馏水定容至200ml，高压灭菌备用；(2)、发酵罐发酵:按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至32°C，移种量1:35，PH5.2-6.0，温度32°C，搅拌速度为200rpm/min，每2小时取样检测，接种后10时补料，整体发酵时间为16-24小时，显微镜检测菌体数量多，大小均已，没有其他杂菌生长，合格后放罐用，培养基配方为:玉米:3%豆栢:2%牛骨蛋白胨:1%硫酸铵:1% 葡萄糖:0.3% 磷酸二氢钾:0.3%麦芽糖:1% 消泡剂:0.02%。 实施例2一次Im3发酵罐的抗菌肽发酵生产(1)、摇瓶培养:按照配方配制3L培养基，平均分装与20个100ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用试管菌种接种，接种量1:500，摇床培养，搅拌速度为200rpm/min，34°C培养10小时，检测合格后得菌种，待用；培养基配方:牛骨蛋白胨30g 酵母提取物15g 食盐15g用蒸馏水定容至31，高压灭菌备用；(2)、发酵罐发酵:按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至33°C，移种量1:35，PH5.2-6.0，温度33°C，搅拌速度为200rpm/min，每2小时取样检测，接种后10小时补料，整体发酵时间为16-24小时，显微镜检测菌体数量多，大小均已，没有其他杂菌生长，合格后放罐用，培养基配方为:玉米:3%豆栢:2%牛骨蛋白胨:1%硫酸铵:1% 葡萄糖:0.3% 磷酸二氢钾:0.3%麦芽糖:1% 消泡剂:0.02%。 实施例3一次30m3发酵罐的抗菌肽发酵生产(I)、摇瓶培养:按照配方配制1.5L培养基，平均分装与20个100ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用试管菌种接种，接种量1:500，摇床培养，搅拌速度为200rpm/min，32°C培养10小时，检验合格后的菌种，待用；培养基配方:牛骨蛋白胨15g 酵母提取物7.5g 食盐7.5g用蒸馏水定容至1.51，高压灭菌备用；(2)、种子罐培养:按照配方配制300L培养基，高温灭菌降至31°C，然后接种，接种量1:200, PH5.2-6.0，温度31 °C，搅拌速度为35-40 rpm/min，每2小时取样检测一次，生长时间为12小时,显微镜检测菌体数量多,大小均一,没有其他杂菌生长,培养基配方为:玉米面:3%豆栢:2%牛骨蛋白胨:1%硫酸铵:1% 葡萄糖:0.3% 磷酸二氢钾:0.3% 消泡剂:0.02%。 (3)、发酵罐发酵:按照配方配制20m3培养基，高温灭菌冷却至31°C，移种量 I: 100，PH5.2-6.0，温度31 °C，补料前通气量0.6:1,补料后通气量0.8:1,搅拌速度为80-90rpm/min，每2小时取样检测，接种后10小时补料，整体发酵时间为16-24小时，检测合格后放罐，培养基配方为:玉米:3%豆栢:2%牛骨蛋白胨:1%硫酸铵:1% 葡萄糖:0.3% 磷酸二氢钾:0.3%实施例4:，包括以下步骤:(1)、摇瓶培养:按照配方配制IL培养基，平均分装与本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗菌肽发酵生产方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）、摇瓶培养：按照配方配制1L培养基，平均分装与10个1000ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:80～120，摇床培养，搅拌速度为180～220rpm/min，温度30～34℃，培养时间8～12小时；培养基配方：牛骨蛋白胨8～12g酵母提取物3～7g食盐3～7g用蒸馏水定容至1L，高压来菌制得枯草杆菌菌种；（2）、发酵罐发酵：按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至30‑34℃，采用枯草杆菌菌种进行发酵，菌种与培养基比例为0.2:6～7，PH5.2～6.0，温度30‑34℃，搅拌速度为180～220rpm/min，整体发酵时间为16～20小时，在发酵过程中，每2小时取样检测，12小时后补加第一步培养基，加入量为第2步的枯草杆菌菌种和第2步培养基总体积量的10～20%，显微镜下检测菌体数量较多，大小均匀，没有其他杂菌生长，合格后得到含有抗菌肽的发酵物，培养基配方为：玉米：2～4%豆粨：1～3%牛骨蛋白胨：0.5～1.5%硫酸铵：0.5～1.5%葡萄糖：0.1～0.5%磷酸二氢钾：0.2～0.4%麦芽糖：0.5～1.5%消泡剂：0.015～0.025%。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡国春，郭文江，赵福生，
申请(专利权)人：中农颖泰林州生物科园有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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