一种含易被氧化氨基酸的多肽的纯化方法技术

本发明专利技术涉及多肽纯化领域，特别涉及一种含易被氧化氨基酸的多肽的纯化方法。该纯化方法包括：获得粗肽，经前处理，得到第一粗肽溶液，经第一调节pH值至6.0～8.0，得到第二粗肽溶液；取第二粗肽溶液与还原剂混合，经第二调节pH值至4.0～7.0，经过滤、纯化，即得；还原剂选自含有巯基的有机酸，含有硫离子或硫氢离子的酸或无机盐，含有还原性金属离子的无机盐，含有亚硫酸根或亚硫酸氢根的无机盐，或二氧化硫；易被氧化氨基酸为易发生氧化反应的氨基酸。本发明专利技术提供的纯化方法可有效去除含有易被氧化氨基酸的多肽中的颜色，提高了药品的质量，且提高了精肽的收率，操作简单，成本低，适于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多肽纯化领域，特别涉及一种含易被氧化氨基酸的多肽的纯化方法。
技术介绍
乳腺癌是发生在乳腺上皮组织的恶性肿瘤。全球乳腺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局2012年公布的2009年乳腺癌发病数据显示：全国肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位，女性乳腺癌发病率全国合计约为42.55/10万，城市约为51.91/10万，农村约为23.12/10万。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。常见的治疗乳腺癌的药物包括醋酸甲羟孕酮片、甲睾酮片、希罗达、倍美力、戈舍瑞林等。其中，戈舍瑞林是一种合成的十肽化合物，属于促黄体生成素释放激素的类似物，长期使用可抑制垂体的促黄体生成激素的分泌，从而引起女性血清雌二醇的下降，达到治疗乳腺癌的作用。戈舍瑞林肽序中具有色氨酸残基，色氨酸极易被氧化而产生非常明显的颜色，一般为红色或紫红色。采用固相合成法、液相合成法合成戈舍瑞林粗肽时，由于合成过程较为复杂，会用到多种缩合剂和催化剂，因此肽序中的色氨酸残基易被氧化而使产品带有红色或紫红色，影响戈舍瑞林药物的质量。其它的含有色氨酸等易被氧化氨基酸的多肽类药物在合成时也会发生不同程度的氧化而使产品带有颜色，因此在合成含有易被氧化氨基酸的多肽类药物过程中，需要去除颜色以保证药品的质量。一般采用采用HPLC纯化法和活r>性炭吸附法将氧化杂质去除。在利用HPLC纯化法去除颜色时，由于氧化并没有使整个肽序列发生变化，其性质与被氧化前差别很小，因此需要多次HPLC纯化才能将颜色去除，导致产品的收率较低；在利用活性炭吸附法去除颜色时，由于活性炭的吸附作用不具备选择性，在吸附颜色的同时，还会吸附目标产物，一旦吸附上目标产物就很难解离下来，导致目标产物的收率偏低，这种情况对于分子量在2000以下的多肽尤为明显。因此，提供一种既能有效去除多肽产品中的颜色，又能保证产品的收率较高的多肽纯化方法具有重要的现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种含易被氧化氨基酸的多肽的纯化方法。该方法通过调整粗肽溶液的pH值至6.0～8.0，再加入还原剂，从而可去除粗肽溶液中的颜色，且提高了精肽的收率。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种含易被氧化氨基酸的多肽的纯化方法，包括如下步骤：获得粗肽，经前处理，得到第一粗肽溶液，经第一调节pH值至6.0～8.0，得到第二粗肽溶液；取第二粗肽溶液与还原剂混合，经第二调节pH值至4.0～7.0。还原剂选自含有巯基的有机酸，含有硫离子或硫氢离子的酸或无机盐，含有还原性金属离子的无机盐，含有亚硫酸根或亚硫酸氢根的无机盐，或二氧化硫；易被氧化氨基酸为易发生氧化反应的氨基酸。多肽作为药物，具有生理活性强、免疫原性低、疗效高等诸多优点，但多肽类物质自身固有的特点如口服利用率较低、酶降解性高以及半衰期极短等，使其作为药物的开发应用受到诸多的局限。而导致多肽药物不稳定的一个重要原因就是含有易被氧化氨基酸的多肽极易被氧化。含有易被氧化氨基酸的多肽在合成过程中被氧化后会致使多肽带有颜色，影响多肽产品的质量，因此需要去除被氧化的多肽。本专利技术提供了一种利用还原剂的还原性质去除被氧化的多肽的方法，并提供了还原剂的种类，还提供了被氧化的多肽与还原剂反应时适宜的pH值范围，本专利技术提供的纯化方法可避免多肽被过度的还原，不会破坏多肽的结构，保持了多肽原有的活性。为了避免多肽被过度的还原，多肽的结构不会被破坏，保持多肽原有的活性作用，作为优选，还原剂选自含有巯基的有机酸，含有硫离子或硫氢离子的酸或无机盐，含有还原性金属离子的无机盐，含有亚硫酸根或亚硫酸氢根的无机盐，或二氧化硫。不同种类的氨基酸稳定性有很大差别，有些氨基酸含有易被氧化的结构，在自然贮存条件下，容易发生氧化反应，这些易被氧化的氨基酸包括色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸等。在本专利技术提供的一些实施例中，含易被氧化氨基酸的多肽为含有色氨酸的多肽，但含易被氧化氨基酸的多肽并不局限于含有色氨酸的多肽，只要是本领域技术人员认可的含易被氧化氨基酸的多肽均在本专利技术的保护范围之内，本专利技术在此不做限定。在本专利技术提供的一些实施例中，含易被氧化氨基酸的多肽为戈舍瑞林。在本专利技术提供的一些实施例中，含有巯基的有机酸为半胱氨酸或还原型谷胱甘肽，但本领域技术人员认为可行的含有巯基的有机酸均在本专利技术的保护范围之内，含有巯基的有机酸种类并不局限于此，本专利技术在此不做限定。在本专利技术提供的一些实施例中，含有硫离子或硫氢离子的酸为氢硫酸，但本领域技术人员认为可行的含有硫离子或硫氢离子的酸均在本专利技术的保护范围之内，含有硫离子或硫氢离子的酸种类并不局限于此，本专利技术在此不做限定。在本专利技术提供的一些实施例中，含有硫离子的无机盐为硫化钠，但本领域技术人员认为可行的含有硫离子的无机盐均在本专利技术的保护范围之内，含有硫离子的无机盐种类并不局限于此，本专利技术在此不做限定。在本专利技术提供的一些实施例中，含有硫氢离子的无机盐为硫氢化钠，但本领域技术人员认为可行的含有硫氢离子的无机盐均在本专利技术的保护范围之内，含有硫氢离子的无机盐种类并不局限于此，本专利技术在此不做限定。在本专利技术提供的一些实施例中，含有还原性金属离子的无机盐为含亚铁离子的无机盐或含亚铜离子的无机盐，但本领域技术人员认为可行的含有还原性金属离子的无机盐均在本专利技术的保护范围之内，含有还原性金属离子的无机盐种类并不局限于此，本专利技术在此不做限定。在本专利技术提供的一些实施例中，含亚铁离子的无机盐为硫酸亚铁或氯化亚铁，但本领域技术人员认为可行的含亚铁离子的无机盐均在本专利技术的保护范围之内，含亚铁离子的无机盐种类并不局限于此，本专利技术在此不做限定。在本专利技术提供的一些实施例中，含亚铜离子的无机盐为硫酸亚铜或氯化亚铜，但本领域技术人员认为可行的含亚铜离子的无机盐均在本专利技术的保护范围之内，含亚铜离子的无机盐种类并不局限于此，本专利技术在此不做限定。在本专利技术提供的一些实施例中，含有亚硫酸根的无机盐为亚硫酸钠或亚硫酸钾，但本领域技术人员认为可行的含有亚硫酸根的无机盐均在本专利技术的保护范围之内，含有亚硫酸根的无机盐种类并不局限于此，本专利技术在此不做限定。在本专利技术提供的一些实施例中，含有亚硫酸氢根的无机盐为亚硫酸氢钠或亚硫酸氢钾，但本领域技术人员认为可行的含有亚硫酸氢根的无本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含易被氧化氨基酸的多肽的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：获得粗肽，经前处理，得到第一粗肽溶液，经第一调节pH值至6.0～8.0，得到第二粗肽溶液；取所述第二粗肽溶液与还原剂混合，经第二调节pH值至4.0～7.0，经过滤、纯化，即得；所述还原剂选自含有巯基的有机酸，含有硫离子或硫氢离子的酸或无机盐，含有还原性金属离子的无机盐，含有亚硫酸根或亚硫酸氢根的无机盐，或二氧化硫；所述易被氧化氨基酸为易发生氧化反应的氨基酸。

【技术特征摘要】
1.一种含易被氧化氨基酸的多肽的纯化方法，其特征在于，包括如下步
骤：
获得粗肽，经前处理，得到第一粗肽溶液，经第一调节pH值至6.0～8.0，
得到第二粗肽溶液；
取所述第二粗肽溶液与还原剂混合，经第二调节pH值至4.0～7.0，经过
滤、纯化，即得；
所述还原剂选自含有巯基的有机酸，含有硫离子或硫氢离子的酸或无机
盐，含有还原性金属离子的无机盐，含有亚硫酸根或亚硫酸氢根的无机盐，
或二氧化硫；
所述易被氧化氨基酸为易发生氧化反应的氨基酸。
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述易被氧化氨基酸
为色氨酸。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述多肽为戈舍瑞林。
4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述含有巯基的有机
酸为半胱氨酸或还原型谷胱甘肽。
5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述含有硫离子或硫
氢离子的酸为氢硫酸。
6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述含...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵忠卫，刘建，马亚平，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44