本发明专利技术公开了一种保藏编号为CCTCCN O：C2014172的杂交瘤细胞株，以及该杂交瘤细胞株分泌鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体。所述的鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体，可以识别天然鲤疱疹病毒3型，并具有很好的特异性，可广泛用于鲤疱疹病毒3型的病原学诊断、血清学检测、免疫学检测及防治、ORF132蛋白功能研究等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫学领域，具体涉及一种鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用。
技术介绍
鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)又称锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus，KHV)，属于疱疹病毒目(Herpesvirales)，异疱疹病毒科(Alloherpesviridae)，鲤疱疹病毒属(Cyprinivirus)，是一种双链线性DNA病毒，具有囊膜结构。该病毒严重威胁鲤(Cyprinus carpio)及其观赏品种：锦鲤，致死率高达80％-100％。鲤疱疹病毒3型基因组约295kb，编码156个不同的ORF，目前已经确定其中的14个ORF编码囊膜蛋白。囊膜蛋白位于病毒最外层，在病毒与宿主细胞的识别、互作以及入侵过程中发挥着重要作用，也是建立检测方法和防治手段的重要靶分子。ORF132是鲤疱疹病毒3型的一个高度保守并且特异的囊膜蛋白分子，也是病毒的一个结构蛋白(Michel B,Leroy B等，The genome of cyprinid herpesvirus3encodes 40proteins incorporated in mature virions,Journal of General Virology,2010,91:452–462；Yi Y,Zhang H等，Extracellular virion proteins of two Chinese CyHV-3/KHV isolates,and identification of two novel envelope proteins,Virus Research，2014,191:108–116)，对其核苷酸序列和氨基酸使用NCBI blast软件在蛋白质数据库和DNA数据库进行在线分析显示：ORF132是鲤疱疹病毒3型的特有基因，目前GenBank中已经登录了4个毒株的ORF132序列，包括GZ11株，美国株(U)、以色列株(I)、日本株(J)，其中GZ11株、U株、J株的ORF132基因序列完全一致，与上述3个毒株相比，I株的ORF132基因存在一个碱基的差异：第17位碱基由T变为A，对应的第6位氨基酸由异亮氨酸(Ile)变为天冬酰胺(Asn)。根据文献(刘振兴，柯浩等，锦鲤疱疹病毒囊膜蛋白ORF132的克隆及分析，广东农业科学，2011,6:134-136)报道，ORF132蛋白的97-170位氨基酸片段为主要B细胞表位区段，具有良好的免疫原性，并且该片段的氨基酸序列在已知的鲤疱疹病毒3型中完全一致，是一个理想的鲤疱疹病毒3型诊断靶位。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种分泌鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4E11。本专利技术还提供了由上述保藏编号为CCTCCNO：C2014172的杂交瘤细胞株制备的单克隆抗体。本专利技术还提供了上述单克隆抗体在检测鲤疱疹病毒3型上的应用。本专利技术所采用的技术方案是：一种分泌鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4E11，已于2014年10月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CHINA CENTER FOR TYPE CULTURE COLLECTION)，保藏编号为CCTCCNO：C2014172。一种鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC NO：C2014172的杂交瘤细胞株产生。所述单克隆抗体为IgG1亚类。一种检测鲤疱疹病毒3型的试剂盒，含有保藏编号为CCTCCNO：C2014172的杂交瘤细胞株产生的鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体。本专利技术所述的分泌鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4E11已于2014年10月23日保藏于国家知识产权局指定的保藏单位中国典型培养物保藏中心(CCTCC，地址：武汉大学)，保藏日期2014年10月23日，保藏编号CCTCCNO：C2014172。本专利技术主要具有如下有益效果：本专利技术通过专利技术人长期研究鲤疱疹病毒3型，选取了该病毒特有的，且具有较高的免疫原性的鲤疱疹病毒3型ORF132基因，通过大量的实验研究，筛选到能稳定分泌鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4E11。本专利技术制备得到的杂交瘤细胞株4E11能稳定、大量制备鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体，该抗体为IgG1亚类，可以识别天然鲤疱疹病毒3型，并且与同属于异疱疹病毒科的斑点叉尾鮰病毒(Channel catfish virus，CCV；又称为鮰疱疹病毒1型，Ictalurid herpesvirus 1，IcHV-1)无交叉反应，表现出很好的特异性，可广泛用于鲤疱疹病毒3型的病原学诊断、血清学检测、免疫学检测及防治等。本专利技术制备的单克隆抗体可以特异性识别鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132，可以与该蛋白特异性结合，应用于免疫共沉淀、抗体封闭等ORF132相关的蛋白功能研究。附图说明图1为重组CyHV-3ORF132的诱导表达，其中，1：未诱导的重组CyHV-3ORF132蛋白工程菌裂解液，2：IPTG诱导的重组CyHV-3ORF132蛋白工程菌裂解液，3：纯化的重组CyHV-3ORF132蛋白。图2为重组蛋白的Western Blot鉴定结果，其中，1：纯化的重组CyHV-3ORF132蛋白，2：诱导的重组CyHV-3ORF132蛋白工程菌裂解液。图3为CyHV-3感染的CCB细胞IFA检测结果；其中，A1：DAPI染色，示细胞核；A2：Cy3免疫染色A3：A1、A2叠加图。图4为未感染的CCB细胞IFA检测结果；其中，B1：DAPI染色，示细胞核；B2：Cy3免疫染色，B3：B1、B2叠加图。图5为CCV感染的CCO细胞IFA检测结果；其中，C1：DAPI染色，示细胞核；C2：Cy3免疫染色，C3：C1、C2叠加图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。主要实验材料和来源：按照水产动物诊断试验手册(OIE,2013)的方法分离鲤疱疹病毒3型，分离的毒株命名为：HZ419株。实施例1：杂交瘤本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分泌鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏编号为CCTCCNO：C2014172。
【技术特征摘要】
1.一种分泌鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体的杂交瘤细胞
株，其保藏编号为CCTCCNO：C2014172。
2.鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体，其特征在于，其由保藏
编号为CCTCCNO：C2014172的杂交瘤细胞株产生。
3.根据权利要求2所述的鲤疱疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的单克隆抗体，
其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘振兴，柯浩，马艳平，郝乐，马江耀，梁志凌，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物卫生研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44
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