一种提取细菌外排膜囊泡的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用超滤浓缩法得到大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌外膜囊泡的方法，包括：将大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌制成菌悬液，取适量菌悬液接种于含有培养基的试管中培养过夜，再取适量菌液接种于含有l培养基的摇瓶中培养OD值接近1.0，收集菌液，离心除去菌体，无菌滤头过滤除去残余菌体，收集滤液，用截留分子量为100KDa的超滤管离心浓缩至原体积的1/8，加生理盐水洗涤并重复2～3次，收集处于超滤管上层的细菌外膜囊泡，置-20℃环境分装冻存，提取的肺炎克雷伯杆菌外膜囊泡蛋白浓度为1.5mg/ml，大肠杆菌的外膜囊泡蛋白浓度2.1mg/ml，OMVs粒径为20～100nm左右。本方法操作方便、简单易行，为OMVs的提取、研究提供了新方法。

【技术实现步骤摘要】
一种提取细菌外排膜囊泡的方法
本专利技术涉及一种利用超滤浓缩法制备大肠杆菌(DH5α)和肺炎克雷伯杆菌(klebsiellapneumoniae，KP)外排膜囊泡(bacterialoutermembranevesicles，OMVs)的方法。
技术介绍
据报道，细菌外膜囊泡是从革兰氏阴性菌表面以出芽的形式连续释放的双层球形蛋白脂质体，直径一般为20-250nm，通常携带细菌外膜和周质组分，包括一些DNA、RNA、内毒素(LPS)，蛋白质，酶和肽聚糖等，其结构如图1所示；临床研究表明，OMVs能够引起机体的炎症和病理学反应，OMVs与很多传染性疾病相关，如牙周炎、胃炎、科隆氏病、输卵管炎、脑膜炎、脓毒症、心血管疾病以及肺部疾病等，OMVs越来越受到研究者们的关注。研究显示，OMVs本身具有一些固有的特性，如能够产生与母体类似的具有免疫原性的表面和膜相关组分，能够增强抗体和T细胞对抗原的应答，常被用来制作疫苗；实验已表明，它在不同的温度和处理条件下非常稳定，而且属于非复制型疫苗，有报道公开了经过基因工程修饰得到的OMVs能够选择性的表达相应的抗原，减少内毒性，被广泛应用。近年来，来源于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取细菌外排膜囊泡的方法，其特征在于，采用超滤浓缩法从大肠杆菌DH5α和肺炎克雷伯杆菌菌液中提取细菌外膜囊泡(OMVs)，其包括：将大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌制成菌悬液，取适量菌悬液接种于含培养基的试管中培养过夜，再取适量菌液接种于含培养基的摇瓶中培养OD值接近1.0，收集菌液，离心除去菌体，无菌滤头过滤除去残余菌体，收集滤液，用截留分子量为100KDa的超滤管离心浓缩至原体积的1/8，加生理盐水洗涤并重复此步骤重复2～3次，收集处于超滤管上层的细菌外膜囊泡，置‑20℃环境分装冻存。

【技术特征摘要】
1.一种提取细菌外排膜囊泡的方法，其特征在于，采用超滤浓缩法从大肠杆菌DH5α和肺炎克雷伯杆菌菌液中提取细菌外膜囊泡(OMVs)，其包括：将大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌制成菌悬液，取适量菌悬液接种于含培养基的试管中培养过夜，再取适量菌液接种于含培养基的摇瓶中培养OD值接近1.0，收集菌液，离心除去菌体，无菌滤头过滤除去残余菌体，收集滤液，用截留分子量为100KDa的超滤管离心浓缩至原体积的1/8，加生理盐水洗涤并重复此步骤重复2～3次，收集处于超滤管上层的细菌外膜囊泡，置-20℃环境分装冻存。2.如权利要求1所述的提取细菌外排膜囊泡的方法，其特征在于，所述的大肠杆菌DH5α来源于美国菌种保藏中心，肺炎克雷伯杆菌来源于中国农业微生物菌种保藏中心。3.如权利要求1所述的提取细菌外排膜囊泡的方法，其特征在于，所述的OMVs是大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌表面以出芽的形式连续释放的双层球星蛋白脂质体，携带细菌外膜和周质成分。4.如权利要求1所述的提取细菌外排膜囊泡的方法，其特征在于，所述的菌液，是指将大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌制成菌悬液，先取10μL菌悬液于3ml培养基中，其中，大肠杆菌在...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶丽，姜珊珊，王乾，冯美卿，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31