靶向抗特定流行性菌株的ＯＭＶ对于控制疾病地方性爆发高度有效。联用大规模并可再现的制备技术可在疾病爆发后迅速制备疫苗。本发明专利技术提供了制备脑膜炎球菌外膜囊泡（ＯＭＶ）疫苗的方法，该方法包括以下步骤：（ｉ）鉴定与脑膜炎球菌性脑膜炎爆发有关的脑膜炎球菌菌株的血清亚型；（ｉｉ）从具有步骤（ｉ）所鉴定的血清亚型的脑膜炎球菌菌株制备ＯＭＶ以用于制备疫苗。该方法可包括以下一个或两个额外步骤：（ｉｉｉ）将所述ＯＭＶ配制成疫苗；和（ｉｖ）在被或者可能被所述疾病爆发影响的地理区域分销所述疫苗。所述脑膜炎球菌菌株通常为血清群Ｂ，但也可以是血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于免疫目的的脑膜炎球菌外膜囊泡领域。
技术介绍
赋予抗脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)(脑膜炎球菌)感染的免 疫力的各种方法之一是使用外膜囊泡(OMV)。挪威国立公众健康研究所(Norwegian NationalInstitute of Public Health)已经制造了抗血清群B的有效OMV疫苗 ，尽管这种疫苗是安全的并能预防MenB疾病，但其功效仅 限于用来制备疫苗的同源血清型。‘RIVM’疫苗基于含有六种不同PorA亚型的0MV。它已在II期临床试验中在儿童 中显示出免疫原性。参考文献3公开了抗血清群B脑膜炎球菌不同致病血清型的疫苗，该疫苗基于保 留了 65kDa蛋白复合体的0MV。参考文献4公开了含有遗传工程改造的脑膜炎球菌菌株OMV 的疫苗，所述OMV包含至少一种1类外膜蛋白(OMP)但不含2/3类OMP。参考文献5公开了 含有在其表面环中有突变的OMP的OMV以及含有脑膜炎球菌脂多糖(LPS)衍生物的0MV。 参考文献6公开了制备基于OMV的血清群A脑膜炎球菌疫苗的方法。已有多种提高OMV功效的建议。参考文献7公开了添加有运铁蛋白结合蛋白(例 如，TbpA和TbpB)和/或Cu，Zn-超氧化物歧化酶的含有OMV的组合物。参考文献8公开 了添加有各种蛋白质的含有OMV的组合物。参考文献9公开了从具有修饰的fur基因的脑 膜炎奈瑟球菌(N. meningitidis)获得的膜囊泡制品。参考文献26称，同时敲除porA和 cps可上调nspA的表达。为制备OMV的脑膜炎奈瑟球菌的其它敲除突变体公开于参考文献 26-28。与这些通过改变表达模式而改进OMV的尝试不同，参考文献29将注意力集中在改变 OMV的制备方法，并称，通过避免使用诸如脱氧胆酸盐之类的去污剂可以在提取囊泡时保留 诸如NspA的抗原。脑膜炎球菌OMV不能引起抗非同源血清型的交叉保护限制了它们作为通用 疫苗的用途，但它们对于已经基本上克隆出致病菌株的流行性疾病非常有效。因此， FinlayInstitute的疫苗(VA-MENG0C-BC )已经被用于拉丁美洲，该处的血清群B疾病主要 是Pl. 19，15血清型，但这种疫苗在其它地方无效。类似地，Chiron的MeNZB 疫苗的 靶标是自1991年以来在新西兰流行的流行性菌株(PL 7b，4，最新的命名法又称为Pl. 7-2, 4)。参考文献11公开了含有多价脑膜炎球菌细胞泡(bleb)组合物的疫苗，包括衍生自脑膜炎球菌菌株的第一细胞泡，该菌株具有在使用国流行的血清亚型和衍生自脑膜炎球 菌菌株的第二细胞泡，该菌株无需具有在使用国流行的血清亚型。本专利技术的目的是提供其它和改进的脑膜炎球菌OMV制品
技术实现思路
使用MeNZB 的经验显示，抗特定流行性菌株的OMV对于控制疾病地方性爆发非 常有效。联用大规模并可再现的制备技术可在疾病爆发后迅速制备疫苗。因此，本专利技术提 供了制造脑膜炎球菌外膜囊泡(OMV)疫苗的方法，该方法包括以下步骤(i)鉴定与脑膜炎 球菌性脑膜炎爆发有关的脑膜炎球菌菌株的血清亚型；(ii)从具有步骤(i)中鉴定的血清 亚型的脑膜炎球菌菌株制备OMV用于制备疫苗。该方法可包括以下一个或两个额外步骤 (iii)将所述OMV配制成疫苗；和(iv)在被或者可能被所述疾病爆发影响的地理区域分销 所述疫苗。就已经鉴定出相关血清亚型的情况而言，本专利技术还提供了相同但省略了步骤(i) 的方法。所述脑膜炎球菌菌株将通常为血清群B，当也可以是血清群A、C、W135、Y等。使用MeNZB 的经验还提示专利技术人，OMV可单独或组合用于赋予抗脑膜炎球菌血清 群A、C、W135和Y的免疫力，因此其制备成本可能低于目前的缀合(conjugate)疫苗。因 此，本专利技术提供了 (a)含有脑膜炎球菌血清群C菌株的外膜囊泡的组合物；(b)含有脑膜 炎球菌血清群W135菌株的外膜囊泡的组合物；(c)含有脑膜炎球菌血清群Y菌株的外膜囊 泡的组合物；和(d)含有脑膜炎球菌血清群A、B、C、W135和Y中两种或多种的外膜囊泡的 组合物。在⑷中，优选的组合物包含以下血清群的混合物A+B ；A+C ；A+W135 ；A+Y ；B+C ； B+W135 ；B+Y ；C+W135 ；C+Y ；W135+Y ；A+B+C ；A+B+W135 ；A+B+Y ；A+C+W135 ；A+C+Y ；A+W135+Y ； B+C+W135 ；B+C+Y ；C+W135+Y ；A+B+C+W135 ；A+B+C+Y ；B+C+W135+Y ；和 A+B+C+W135+Y。由于血清群间共有亚荚膜(sub-capsular)抗原，因此OMV (和OMV混合物)能保护 抵抗除制备它们的血清群之外的血清群。例如，在萨哈拉沙漠以南非洲发现的血清群A和 W135菌株与在世界其它地方发现的血清群C和Y菌株共有亚荚膜抗原。因此，本专利技术提供 了第一血清群脑膜炎球菌菌株的OMV在保护抵抗一种或多种第二血清群脑膜炎球菌菌株 中的应用，其中所述第一和第二血清群不同。即便所述菌株具有不同血清型，但它们可能共 有亚荚膜抗原，并且可能具有相同亚型、血清亚型和/或免疫型。优选血清群A和W135的 OMV混合物，也优选血清群C和Y的OMV混合物。使用MeNZB 的经验还提示专利技术人，新西兰0MV、挪威OMV和古巴OMV所用菌株的 OMV混合物有效。因此，本专利技术提供了含有以下两种或三种外膜囊泡的组合物(i)血清亚 型PL 7b，4脑膜炎球菌；(ii)血清亚型Pl. 7，16脑膜炎球菌；和(iii)血清亚型Pl. 9，15 脑膜炎球菌。优选掺合不同的0MV，但也可以装在试剂盒内的不同容器内。专利技术人发现通过混合不同血清亚型的OMV可降低各种血清亚型的剂量而不会降 低功效。以总蛋白质计，VA-MENG0C-B 含有50 μ g OMV (0. 5ml体积)、HexaMen 含有约Img OMV (0. 3ml体积)，而MenBVac 和MeNZB 含有25 μ g OMV (0. 5ml体积)，因此专利技术人发现 使用混合物可以降低各OMV的剂量而不会降低各自的功效。因此，本专利技术提供了含有第一 脑膜炎球菌血清亚型和第二脑膜炎球菌血清亚型的外膜囊泡的组合物，其中，第一血清亚 型的OMV的浓度小于45 μ g/ml，第二血清亚型的OMV的浓度小于45 μ g/ml。本专利技术还提供 了含有至少两种脑膜炎球菌血清亚型的外膜囊泡的组合物，其中所述OMV的组合浓度小于90μ g/ml。本专利技术还提供了含有η种不同脑膜炎球菌血清亚型的外膜囊泡的组合物，其中，η种血清亚型中各自的OMV浓度小于45 μ g/ml (即OMV的总剂量小于45η μ g/ml)。η的值 可以是1、2、3、4、5、6等。本专利技术还提供了含有从η种不同血清亚型制备的OMV的试剂盒。所述囊泡可单独 保存或储存在试剂盒中直到需要同时使用，例如作为掺合物，或者以供同时单独或依次使 用。类似地，本专利技术提供了一种方法，该方法包括制备η组0MV，每一组来自η种不同血清 亚型的每一种；和混合所述η组囊泡。所述不同的组可混合入试剂盒中或为掺合物。本专利技术还提供了含有从具有PI. 7b，4本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种组合物，含有血清亚型Ｐ１．７ｂ，４脑膜炎球菌外膜囊泡（ＯＭＶ）和血清亚型Ｐ１．７，１６脑膜炎球菌外膜囊泡的混合物。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：P奥斯特，M皮扎，R拉普奥里，
申请(专利权)人：诺华疫苗和诊断有限公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]
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