本发明专利技术公开了编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列、所编码己糖激酶-Ⅱ及其应用，涉及基因工程技术领域，本发明专利技术的主要技术方案为：一种编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列，所述核苷酸序列是序列表中SEQ ID NO:1第21-1861位。或者，所述核苷酸序列为在高严谨条件下与序列表中SEQ ID NO:1第21-1861位的核苷酸序列杂交且编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ；或者，所述核苷酸序列与序列表中SEQ ID NO:1第21-1861位的核苷酸序列具有90％以上同源性且编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ。另一方面，本发明专利技术实施例还提供一种双峰驼己糖激酶-Ⅱ，由如上所述核苷酸序列编码。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列、所编码己糖激酶-Ⅱ，以及己糖激酶-Ⅱ的应用。
技术介绍
己糖激酶(Hexokinase，HK)是调控细胞糖酵解的关键酶，能将葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖，为肿瘤细胞提供能量以及物质合成所必需的重要碳源，从而促进恶性肿瘤的生长和增殖。在HK的4种同工酶中，己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)在肿瘤细胞中高表达，在多种常见恶性肿瘤组织内呈高表达状态并且活性增强。HK-Ⅱ主要存在于骨骼肌和脂肪组织中,在胰岛素介导的葡萄糖磷酸化过程中起着重要的作用。Giacchetti S等(2000)研究发现HK-II属胰岛素敏感型，正常情况下，仅在心脏、骨髂肌和脂肪组织中微量表达。Geschwind JH等(2002)研究发现，HK-II除具有催化糖酵解活性的作用，还有拮抗细胞凋亡的功能。HK-II蛋白分子与VDAC、Bcl-2家族成员等构建线粒体PTP，调控线粒体膜通透性，拮抗线粒体途径的细胞凋亡发生。因此，HK-II是恶性肿瘤细胞生存和防御机制之一。Mathupala SP等(2009)研究表明肿瘤细胞高表达HK-II受多因素调控，在基因水平上，肿瘤细胞HK-II基因拷贝数增多。通过Southern blot及荧光原位杂交分析，发现大鼠肝癌细胞比正常肝细胞的HK-II基因扩增了至少5倍。Pedersen PL等(2002)研究发现在转录水平上，HK-II基因启动子可被葡萄糖、低氧条件、双丁酰环磷腺苷、佛波酯、突变的p53以及胰岛素等信号激活，使HK-II基因转录显著提高。Ahn KJ，Hwang HS等(2009)研究发现，高表达且与线粒体连接型的HK-II促进了肿瘤高糖酵解，准备了充足的能量和前体物质供细胞合成代谢，为肿瘤生存和增殖提供了十分有利的条件。Ves ergaard H等(1995)还研究了2型糖尿病个体中骨骼肌HK-II酶的活性下降以及HK-II基因表达下降，因而推测2型糖尿病患者存在HK-II基因的遗传缺陷。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术实施例提供一种编码双峰驼双峰驼己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列，即提供双峰驼中双峰驼己糖激酶-Ⅱ基因的cDNA序列，以及由该序列编码的双峰驼己糖激酶-Ⅱ。为了解决上述技术问题，本专利技术采用了如下技术方案：一方面，本专利技术实施例提供了一种编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列，所述核苷酸序列是序列表中SEQ ID NO:1第21-1861位。或者，所述核苷酸序列为在高严谨条件下与序列表中SEQ ID NO:1第21-1861位的核苷酸序列杂交且编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ。或者，所述核苷酸序列与序列表中SEQ ID NO:1第21-1861位的核苷酸序列具有90％以上同源性且编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ。另一方面，本专利技术实施例还提供一种双峰驼己糖激酶-Ⅱ，由如上所述核苷酸序列编码。优选的双峰驼己糖激酶-Ⅱ由序列表中SEQ ID NO:2所示的氨基酸组成；可将葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖。或者，双峰驼己糖激酶-Ⅱ为序列表中SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有将葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖功能的衍生蛋白质。另一方面，本专利技术实施例还提供一种重组表达载体，包含如上所述核苷酸序列，或编码如上所述蛋白质。另一方面，本专利技术实施例还提供一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如上所述的重组表达载体。另一方面，本专利技术实施例还提供一种如上双峰驼己糖激酶-Ⅱ在将葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖中的应用。另一方面，本专利技术实施例还提供一种获取编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列的方法，该方法中：PCR的正向引物为：SEQ ID NO:3:5’-ACTGCCACGGTACCTTAAAC-3’；反向引物为：SEQ ID NO:4:5’-GGAGTGGGTGTCGCTGTTGA-3’。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：骆驼同其他动物相比有强健的骨骼肌和特殊的驼峰的脂类代谢，使骆驼在恶劣的沙漠环境中具有持久的耐力，可以适应沙漠中食物的匮乏及水源的奇缺，HK-Ⅱ是主要存在于骨骼肌和脂肪组织中,在胰岛素介导的葡萄糖磷酸化过程中起着重要作用的酶。本
技术实现思路
为今后研究双峰驼HK-Ⅱ提供基础资料。本专利技术研究双峰驼的HK-II序列及进化树可以直观的表现出双峰驼HK-II序列与其他物种此蛋白序列的差异，为以后研究双峰驼及其他物种的糖酵解研究提供实验数据，对研究双峰驼及其他物种以及人类的恶性肿瘤的生长和增殖提供一定的理论依据并对胰岛素介导的葡萄糖磷酸化过程的研究起到了很重要的作用。附图说明图1为实施例1中双峰驼己糖激酶-Ⅱ基因RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳图；图2a、2b、2c为构建系统发生树所用己糖激酶-Ⅱ氨基酸同源性比较；图3为不同物种己糖激酶-Ⅱ氨基酸序列系统进化树。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步详细描述，但不作为对本专利技术的限定。以下实施例中，所用百分比浓度如未特定指明，均为体积百分比浓度。实施例1：双峰驼HK-Ⅱ基因cDNA序列的克隆1、组织分离(Isolation)从内蒙古阿拉善盟采得双峰驼，快速屠宰并取肝脏样，将组织样迅速放入液氮中冷冻后于-70℃保存，拿回实验室准备提取组织总RNA。2、总RNA的分离(Total RNA isolation)(1)提取RNA的准备工作玻璃制品用0.1M的NaOH浸泡过夜，用自来水反复冲洗，再用蒸馏水冲洗2遍，180℃烘烤4小时。匀浆器、电泳槽用3％的双氧水浸泡20-30分钟，再用0.1％的DEPC(焦碳酸二乙酯)水冲洗，由于未灭活的DEPC对PCR反应有影响，可用0.5％的SDS(十二烷基硫酸钠)处理。Tip头、EP管用0.1％的DEPC水浸泡过夜,高压灭菌使DEPC失活。双蒸水和溶液用DEPC处理，即每100ml水或溶液加0.1mlDEPC液，室温放置过夜，高压灭菌30分钟DEPC失活。(2)组织总RNA提取取100mg在液氮中冻存的组织样放入有1ml Trizol(trizal reagent,invitrogen BRL,USA)的匀浆器管中匀浆。4℃12000g离心10分钟，吸取上清液，15-30℃温育5分钟，加0.2ml氯仿，盖上盖子，用手剧烈震本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种编码双峰驼己糖激酶‑Ⅱ的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列是序列表中SEQ ID NO:1第21‑1861位。
【技术特征摘要】
1.一种编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列，其特征在于，所述
核苷酸序列是序列表中SEQ ID NO:1第21-1861位。
2.一种编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列，其特征在于，所述
核苷酸序列在高严谨条件下与权利要求1所述的核苷酸序列杂交且编
码双峰驼己糖激酶-Ⅱ。
3.一种编码双峰驼己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列，其特征在于，所述
核苷酸序列与权利要求1所述的核苷酸序列具有90％以上同源性且编
码双峰驼己糖激酶-Ⅱ。
4.一种双峰驼己糖激酶-Ⅱ，由权利要求1-3任一项所述核苷酸序
列编码。
5.根据权利要求4所述的双峰驼己糖激酶-Ⅱ，其特征在于，由序
列表中SEQ ID NO:2所示的氨基酸组成；可将葡萄糖转化为6-磷酸葡
萄糖。
6.一种双峰驼己糖激酶-Ⅱ，其特征在于，为序列表中SEQ ...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈钢粮，吉日木图，
申请(专利权)人：新疆旺源驼奶实业有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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