猪繁殖与呼吸综合征病毒株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒株，该病毒株具有序列表SEQ NO.2所示的GP5蛋白，或进一步具有序列表SEQ NO.3所示核苷酸序列编码的GP2蛋白和序列表SEQ NO.4所示核苷酸序列编码的Nsp2蛋白。本发明专利技术还提供了该病毒株制备的疫苗组合物，本发明专利技术制备的疫苗组合物能有效预防新的流行PRRV病毒的感染，能够刺激机体快速地产生免疫力，有效地保护猪群。

Porcine reproductive and respiratory syndrome virus strain and its use

The invention provides a porcine reproductive and respiratory syndrome virus, the virus strains with SEQ sequence table NO.2 shows the GP5 protein, or further sequence table SEQ NO.3 shows a nucleotide sequence encoding GP2 protein and SEQ sequence table NO.4 shows a nucleotide sequence encoding Nsp2 protein. The invention also provides a vaccine composition of the virus preparation, vaccine compositions prepared by the invention can effectively prevent the new pandemic PRRV virus infection, can stimulate the body to quickly generate immunity, effectively protect pigs.

【技术实现步骤摘要】
猪繁殖与呼吸综合征病毒株及其应用
本专利技术属于兽用疫苗领域，具体涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒株、其制备的疫苗组合物、制备方法和应用。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)引起的以母猪发热、流产，断奶前、后的仔猪死亡率升高，不同年龄猪呼吸障碍等为临床特征的疾病。该病最早发现于美国的北卡罗来纳州(1987年)，此后相继在加拿大(1998年)、德国(1990年)、英国(1991年)发现此病。1992年国际兽医局(OIE)将此病命名为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)。我国于1996年也报道了此病的流行，2006年更是爆发了变异的PRRSV引起的高致病性猪繁殖与呼吸综合征，给养猪业造成了巨大的经济损失。近一年来，多地区流行病学调查发现，有新的PRRSV流行，与以往的流行株相比，其基因序列发生较大改变。而现有的减毒活疫苗在临床上的预防效果不甚理想，灭活疫苗虽然也较早研制出来，其不存在散毒和毒力返强的危险，但对于新的PRRSV预防效果不是很理想，而且，PRRSV经常与其他病原混合感染，造成临床上病情的复杂性，因此，需要研发出针对我国最新流行的毒株的疫苗组合物，以有效防止我国PRRSV相关疾病的流行。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒株，该猪繁殖与呼吸综合征病毒株制得的疫苗组合物可以对流行野毒株提供有效的免疫保护，显示出显著的免疫特性。本专利技术的一个方面在于提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒株，所述病毒株具有序列表SEQNO.2所示的GP5蛋白。本专利技术的一个方面在于提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒株，所述病毒株具有序列表SEQNO.2所示的GP5蛋白，序列表SEQNO.3所示核苷酸序列编码的GP2蛋白和序列表SEQNO.4所示核苷酸序列编码的Nsp2蛋白。本专利技术的一个方面在于提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒株，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株，保藏号为CCTCCNo.V201540。本专利技术的一个方面在于提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的本专利技术所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒株的减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、合成肽疫苗。本专利技术的一个方面是提供一种制备所述疫苗组合物的方法，所述制备方法包括增殖培养所述猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株，灭活，加入佐剂，搅拌均匀。本专利技术的一个方面在于提供所述的疫苗组合物在制备预防和治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒相关的药物中的应用。本专利技术采用目前新的猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株，制备混合疫苗或联合疫苗，具有良好的免疫原性，接种猪只后，能够刺激机体快速地产生免疫力，产生较高的中和抗体水平。本专利技术的混合疫苗或联合疫苗能够有效地保护流行毒株引起的单感染或混合感染的现象，可以有效地保护猪群抵抗猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株引起的相关疾病，提高猪群的生产力。序列表中：序列1为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株GP5蛋白核苷酸序列；序列2为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株GP5蛋白氨基酸序列；序列3为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株GP2蛋白核苷酸序列；序列4为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株Nsp2基因核苷酸序列。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式进行说明。本专利技术的一个方面在于提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒株，所述病毒株具有序列表SEQNO.2所示的GP5蛋白。本专利技术的一个方面在于提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒株，所述病毒株具有序列表SEQNO.2所示的GP5蛋白，序列表SEQNO.3所示核苷酸序列编码的GP2蛋白和序列表SEQNO.4所示核苷酸序列编码的Nsp2蛋白。本专利技术的一个方面在于提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒株，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株，保藏号为CCTCCNo.V201540。猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株(PorcinereproductiveandrespiratorySyndromevirus,strainHNjz15)，所述HNjz15株生物保藏号为：CCTCCNO.V201540，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏时间为2015年9月21日。本专利技术的一个方面在于提供一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的本专利技术所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株或其培养物的灭活全病毒抗原、减毒全病毒抗原、亚单位抗原或合成肽抗原以及药学上可接受的载体。“培养物”是病毒的不同代次传代培养物，本领域技术人员知晓不同代次之间其基因序列仅可能会发生微小的变异。“疫苗组合物”系指含有猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫原性的药物组合物。该药物组合物可诱发、刺激或增强猪只针对猪繁殖与呼吸综合征病毒的免疫反应。“减毒全病毒抗原”指的是以毒力已经减弱但仍可在宿主体内或细胞上复制的病毒。本专利技术所用的术语“减毒”用于指以使病原丧失致病性、但保持免疫原性的方式对基因进行突变来人工降低病原体毒性。通常，通过UV辐射、化学处理或体外连续高阶继代培养实现减毒。人工的基因改变，例如将已知序列中的特定核苷酸缺失以使毒力减弱。“灭活全病毒抗原”，也称作灭活疫苗，失活疫苗，指的是用作抗原以产生免疫力的灭活病毒的混悬液。灭活疫苗的例子包括全病毒疫苗和裂解型疫苗。使用已知方法可以很容易地产生灭活疫苗。例如，通过用甲醛溶液处理病毒可获得全病毒灭活疫苗。裂解型疫苗可在用醚处理后由病毒包膜制备得到。“亚单位抗原”指的是利用基因工程方法将病原体的保护性抗原基因克隆到原核或真核表达系统中，使其高效表达而制成的抗原。它比全病毒抗原引起副反应的可能性小。“合成肽抗原”指的是一种仅含免疫决定簇组分的小肽,即用人工方法按天然蛋白质的氨基酸顺序合成保护性短肽,与载体连接后加佐剂所制成的抗原。本专利技术的组合物的成分或组分的量优选地是治疗有效量。所述治疗有效量是指在组合物施用的宿主中发挥它们的免疫学作用而不导致过度副作用所必需量。所用的成分和待施用的组合物的精确的量将根据因素如治疗的疾病的类型，待治疗的动物的类型和年龄，施用的方式，以及组合物中的其它成分而变化。作为本专利技术的一种实施方式，所述疫苗组合物包括猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株或其培养物的灭活全病毒抗原，所述HNjz15株或其培养物的灭活全病毒抗原含量为灭活前≥106.0TCID50/ml。作为本专利技术的一种优选实施方式；所述HNjz15株或其培养物的灭活全病毒抗原含量为灭活前106.0～108.0TCID50/ml。作为本专利技术的一种更优选实施方式，所述HNjz15株或其培养物的灭活全病毒抗原含量为灭活前107.0TCID50/ml。当猪繁殖与呼吸综合征病毒以少于106.0TCID50的量使用时，疫苗不能有效刺激抗体产生。另一方面，超过的量可能是不经济的。本专利技术的一个方面是提供一种包含猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株或其培养物的灭活抗原的混合疫苗或组合疫苗。作为本专利技术的一种实施方式，所述疫苗组合物还包括免疫量的选自下列的抗原或其组合：猪瘟病毒抗原、猪伪狂犬本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪繁殖与呼吸综合征病毒株，所述病毒株具有序列表SEQ NO.2所示的GP5蛋白；优选地，所述病毒株进一步具有序列表SEQ NO.3所示核苷酸序列编码的GP2蛋白和序列表SEQ NO.4所示核苷酸序列编码的Nsp2蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒株，所述病毒株具有序列表SEQNO.2所示的GP5蛋白；优选地，所述病毒株进一步具有序列表SEQNO.3所示核苷酸序列编码的GP2蛋白和序列表SEQNO.4所示核苷酸序列编码的Nsp2蛋白。2.根据权利要求1所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒株，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株，保藏号为CCTCCNo.V201540。3.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的权利要求2所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株或其培养物的灭活全病毒抗原、减毒全病毒抗原、亚单位抗原或合成肽抗原以及药学上可接受的载体。4.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株或其培养物的灭活全病毒抗原，所述HNjz15株或其培养物的灭活全病毒抗原含量为灭活前≥106.0TCID50/ml；优选地，所述HNjz15株或其培养物的灭活全病毒抗原含量为灭活前106.0～108.0TCID50/ml；更优选地，所述HNjz15株或其培养物的灭活全病毒抗原含量为灭活前107.0TCID50/ml。5.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物还包括免疫量的选自下列的抗原或其组合：猪瘟病毒抗原、猪伪狂犬病毒抗原、猪圆环病毒抗原、副猪嗜血杆菌抗原、猪肺炎支原体抗原、猪流感抗原。6.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其中，所述猪瘟病毒抗原为猪瘟兔化弱毒株；所述猪伪狂犬病毒抗原选自猪伪狂犬病病毒JS-2012株抗原、猪伪狂犬病病毒HeN1株抗原、NVDC-PRV-BJ株抗原、NVDC-PRV-HEB株抗原、NVDC-PRV-SD株抗原、PRVTJ株抗原、猪伪狂犬病病毒变异株PRV-ZJ01抗原、猪伪狂犬病病毒变异株HN1201株抗原、猪伪狂犬病病毒变异株HN1201-R株抗原、猪伪狂犬病病毒变异株HN1202株抗原；所述猪圆环病毒抗原选自猪圆环病毒2型ZJ/H株抗原、猪圆环病毒Ⅱ型DBN-SX07株抗原、猪圆环病毒2型SD株抗原、猪圆环病毒2型ZJ/C株抗原、猪圆环病毒2型毒株PCV2SD株抗原、猪圆环病毒2型SH株抗原、猪圆环病毒Ⅱ型PCV2/HZ09株抗原；所述副猪嗜血杆菌抗原选自血清13型副猪嗜血杆菌GX0905株抗原、血清5型副猪嗜血杆菌JX1002株抗原、血清4型副猪嗜血杆菌HN1009株抗原、血清4型副猪嗜血杆菌YBH04株抗原、血清5型副猪嗜血杆菌YBH05株抗原、血清13型副猪嗜血杆菌YBH13株抗原、血清1型副猪嗜血杆菌LC株抗原、血清12型副猪嗜血杆菌SHCM10株抗原、血清5型副猪嗜血杆菌JSYZ10株抗原、血清13型副猪嗜血杆菌FJMH10株抗原、血清4型副猪嗜血杆菌FS0307株抗原、血清5型副猪嗜血杆菌XX0306株抗原、血清5...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，李英英，孙进忠，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41