一种草莓成花促进基因FaLFY5、表达载体、构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种草莓成花促进基因FaLFY5和含有该基因的表达载体，所述草莓成花促进基因FaLFY5的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述表达载体是将如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列插入植物表达载体pCAMBIA1304中得到的。草莓成花促进基因FaLFY5在植物成花过程中起正向促进调控作用，为深入揭示草莓成花分子调控机制和通过基因工程手段获得早成花草莓品种奠定了基础。所述表达载体可直接用于农杆菌介导的遗传转化，创制早花新品种，提早成花结实能力，应用于植物的遗传改良，促进植物提早成花、完善植物成花通路调控途径中具有良好的应用前景。

Strawberry flowering promoting gene FaLFY5, expression vector, construction method and Application

The invention discloses an expression vector of strawberry flower promoting gene FaLFY5 and containing the gene, the nucleotide sequence of strawberry flower promoting gene FaLFY5 such as SEQ ID NO.1 shown. The expression vector is the nucleotide sequence of SEQ ID NO.1 insert plant expression vector pCAMBIA1304 to get in. Strawberry FLOWER FLOWER promoting gene FaLFY5 plays a positive role in the regulation of plant, in order to further reveal the molecular mechanism of strawberry flower and by means of genetic engineering for early flower varieties of strawberry laid the foundation. The expression vector can be used for Agrobacterium mediated genetic transformation, creating new varieties of early flowering, early flowering and fruiting ability, applied to genetic improvement of plants, and promote plant early flowering, flowering pathway perfect way has a good application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种草莓成花促进基因FaLFY5、表达载体、构建方法及应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种草莓成花促进基因FaLFY5、表达载体、构建方法及应用。
技术介绍
成花是高等植物生长发育过程中的重要环节，成花代表了生殖生长的启动，能否适时成花对以收获花、果器官作为商品的农作物生产来讲意义重大；因此，植物成花机理方面的有关研究是生命科学领域研究的热点问题。草莓(Fragaria×ananassaDuch.)是蔷薇科草莓属植物，果实柔软多汁，营养丰富，经济价值较高，在世界范围内广泛栽培，目前中国的草莓栽培面积和产量均居世界第一。我国草莓生产中促成和半促成栽培方式约占八成，在草莓设施栽培生产过程中，常存在因管理措施不到位而造成植株不能适时、正常花芽分化，从而影响其产量、产期和质量的现象；如何促进植株进行高质量的花芽分化是使其提早上市并提高产量和质量，以最终增加经济效益的关键技术环节。LFY及其同源基因编码转录因子的激活蛋白，是花形成的最早标记基因之一，它的表达是花形成的充分且必要条件，起基因开关的作用，在从营养生长转入生殖生长的转变过程中发挥重要作用，并且正向调节随后的花器官特征基因如AP1等的启动。因此，开发新的LFY类基因对于研究草莓等植物花形发育具有良好的应用前景。我们在草莓的花芽分化研究中分离获得了草莓中的一个新LFY类基因FaLFY5，目前未见其序列信息、载体构建及其基因功能报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种草莓成花促进基因FaLFY5、表达载体、构建方法及应用，提供一个新的草莓成花促进基因FaLFY5，促进植物提早成花、完善植物成花通路调控途径中具有良好的应用前景。本专利技术提供了一种草莓成花促进基因FaLFY5，所述草莓成花促进基因FaLFY5的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了一种含有所述的草莓成花促进基因FaLFY5的表达载体，所述表达载体是将如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列插入植物表达载体pCAMBIA1304中得到的。本专利技术还提供了上述草莓成花促进基因FaLFY5的克隆方法，具体包括以下步骤：步骤1，提取草莓花芽总RNA，然后反转录获得cDNA第一链；步骤2，设计扩增引物，所述扩增引物为：上游引物F1：5'-ATGGATCCAAACGCGTTCACT-3'下游引物R1：5'-TCAGTAGGGAAGCGGATCAGT-3'；然后以反转录获得cDNA第一链为模板，进行PCR扩增，得到草莓成花促进基因FaLFY5，并将草莓成花促进基因FaLFY5连接到pGM-T载体保存。本专利技术还提供了上述表达载体的构建方法，具体包括以下步骤：S1，提取草莓花芽总RNA，然后反转录获得cDNA链S2，根据植物表达载体pCAMBIA1304的多克隆微点序列特点，设计一对引入NcoⅠ和BglII酶切位点的引物序列，所述引物序列为：上游引物F2：5'-CATGCCATGGATGGATCCAAACGCGTTCACT-3'下游引物R2：5'-GAAGATCTTCAGTAGGGAAGCGGATCAGT-3'；再以步骤S1中的cDNA链为模板，进行PCR扩增，得到的扩增产物连接到pGM-T载体，得到重组质粒pGM-T-FaLFY5；S3，利用NcoⅠ和BglII双酶切重组质粒pGM-T-FaLFY5，回收长序列片段的pGM-T-FaLFY5酶切产物；和利用NcoⅠ和BglII双酶切植物表达载体pCAMBIA1304，回收长序列片段的pCAMBIA1304酶切产物；S4，将pGM-T-FaLFY5酶切产物和pCAMBIA1304酶切产物经T4DNA连接酶连接，得到表达载体，并将所述表达载体命名为植物表达载体pCAMBIA1304-FaLFY5。本专利技术还提供了一种上述草莓成花促进基因FaLFY5在促进植物提早成花的分子育种中的应用。本专利技术还提供了一种上述表达载体在促进植物提早成花的分子育种中的应用。与现有技术相比，本专利技术提供的一种草莓成花促进基因FaLFY5、表达载体、构建方法及应用，具有以下有益效果：1、本专利技术通过草莓成花促进基因FaLFY5的表达载体构建与遗传转化，证明其草莓成花促进基因FaLFY5在植物成花过程中起正向促进调控作用，为深入揭示草莓成花分子调控机制和通过基因工程手段获得早成花草莓品种奠定了基础。2、本专利技术构建的植物表达载体pCAMBIA1304-FaLFY5，可直接用于农杆菌介导的遗传转化，创制早花新品种，提早成花结实能力，应用于植物的遗传改良，促进植物提早成花、完善草莓等植物成花通路调控途径中具有良好的应用前景。附图说明图1是草莓成花促进基因FaLFY5的PCR扩增琼脂糖凝胶电泳；其中，M：Marker；1：草莓成花促进基因FaLFY5的cDNA全长；图2是植物表达载体pCAMBIA1304-FaLFY5构建过程示意图；图3是重组质粒pGM-T-FaLFY5经NcoⅠ和BglII双酶切后的凝胶电泳图；M：Marker；1：重组质粒pGM-T-FaLFY5；图4是植物表达载体pCAMBIA1304-FaLFY5经NcoⅠ和BglII双酶切后的凝胶电泳图；M：Marker；1：植物表达载体pCAMBIA1304-FaLFY5；图5是转草莓成花促进基因FaLFY5拟南芥植株PCR检测；M：Marker；1：植物表达载体pCAMBIA1304-FaLFY5阳性对照；2：清水阴性对照；3：非转化株对照；4-6：转化株；图6是转草莓成花促进基因FaLFY5拟南芥植株与对照株比较；图6A：转草莓成花促进基因FaLFY5拟南芥植株；图6B：对照株。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术进行详细说明，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件操作，未注明的实验材料来源均为市售，由于不涉及专利技术点，故不对其步骤进行详细描述。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。大肠杆菌TOP10感受态细胞、pGM-T克隆载体购自天根公司(TIANGEN)，限制性内切酶、PrimeScriptTMTMRTreagentKitwithgDNAEraser(PerfectRealTime)试剂盒购自宝生物公司(TAKARA)，AxyPrepDNA凝胶回收试剂盒购自Axygen公司。本专利技术提供了一种草莓成花促进基因FaLFY5，所述草莓成花促进基因FaLFY5的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了一种含有所述的草莓成花促进基因FaLFY5的表达载体，所述表达载体是将如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列插入植物表达载体pCAMBIA1304中得到的。SEQIDNO.1所示的核苷酸序列即为草莓成花促进基因FaLFY5的开放阅读框序列。所述草莓成花促进基因FaLFY5的克隆方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种草莓成花促进基因FaLFY5，其特征在于，所述草莓成花促进基因FaLFY5的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种草莓成花促进基因FaLFY5，其特征在于，所述草莓成花促进基因FaLFY5的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种含有权利要求1所述的草莓成花促进基因FaLFY5的表达载体，其特征在于，所述表达载体是将如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列插入植物表达载体pCAMBIA1304中得到的。3.根据权利要求1所述的草莓成花促进基因FaLFY5的克隆方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤1，提取草莓花芽总RNA，然后反转录获得cDNA第一链；步骤2，设计扩增引物，所述扩增引物为：上游引物F1：5'-ATGGATCCAAACGCGTTCACT-3'下游引物R1：5'-TCAGTAGGGAAGCGGATCAGT-3'；然后以反转录获得cDNA第一链为模板，进行PCR扩增，得到草莓成花促进基因FaLFY5，并将草莓成花促进基因FaLFY5连接到pGM-T载体保存。4.根据权利要求2所述的表达载体的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：S1，提取草莓花芽总RNA，然后反转录获得cDNA链；S2，根据植物表达载体pCAMBIA1304的多克隆微点序列特点，设...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘月学，邹冬梅，张志宏，马跃，张丽杰，李贺，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21