基于在线SPE的快速测定尿液中轭合态β-受体激动剂的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于在线SPE的快速测定尿液中轭合态β-受体激动剂的方法，包括双三元液相色谱系统，双三元液相色谱系统包括净化柱、分析柱、左泵、右泵、多个管路接口，相邻的管路接口之间设有切换阀门；首先通过双三元液相色谱系统对净化柱正向加载样品、对所述分析柱进行冲洗，然后通过所述双三元液相色谱系统对所述净化柱反冲洗脱目标化合物、对所述分析柱进样。可实现样品的在线净化，无需再经过复杂的人工前处理过程，解决了传统仪器分析方法前处理过程耗时耗力的问题，并避免了人工操作带来的实验误差。

【技术实现步骤摘要】
基于在线SPE的快速测定尿液中辆合态P-受体激动剂的 方法
本专利技术涉及一种0 -受体激动剂检测技术，尤其涉及一种基于在线SPE的快速测 定尿液中轭合态受体激动剂的方法。
技术介绍
在线SPE技术是一种新型样品快速前处理技术。它可以通过净化柱对样品在线净 化处理，无需经过复杂的前处理过程即可获得良好的净化效果。并且，将在线SPE技术与双 三元高效液相色谱和串联质谱（HPLC-MS/MS)结合，可以在15分钟内实现样品的在线净化、 富集、化合物分离和最终分析，获得稳定可靠、重现性好的确证分析结果（法律判定标准）。 该方法兼具快速检测技术方便便捷和确证分析技术准确的优点，目前，已经被用于对尿液、 人体/动物血清等生物液体以及水等介质中污染物的快速检测。 现有技术一： 对0 -受体激动剂常用的检测方法是：样品提取一样品浓缩一净化小柱活 化一样品加载一样品洗脱一溶液置换一上机分析，通过整个流程实现样品分析。 该方法的缺点是前处理复杂，需要消耗大量的人力，同时实验结果受到实验人员操作的影 响。 现有技术一的缺点： 实验周期长，需要经过复杂的前处理净化过程；结果的平行性受前处理操作的影 响。 现有技术二： -些快速检测技术，如酶联免疫法、胶体金试纸条法等，可实现对3 _受体激动剂 高通量、快速检测。其原理是利用某些与受体激动剂具有特异性结合的抗体、受体、酶， 借助其对目标化合物的识别能力，通过测定生物分子活化程度，从而间接确定目标化合物 含量。 现有技术二的缺点： 快速分析方法是半定量方法，不能作为确证分析方法；快速分析方法灵敏度远远 低于我们使用的仪器分析方法（即HPLC/MS/MS方法），有时候因为其检测限较高，不能满足 一些大规模监控工作的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种即快速又准确的基于在线SPE的快速测定尿液中轭合 态受体激动剂的方法。 本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的： 本专利技术的基于在线SPE的快速测定尿液中轭合态e-受体激动剂的方法，包括双 三元液相色谱系统，所述双三元液相色谱系统包括净化柱、分析柱、左泵、右泵、第一管路接 口、第二管路接口、第三管路接口、第四管路接口、第五管路接口、第六管路接口，相邻的管 路接口之间设有切换阀门； 首先，在样品经过酶解预处理后，通过所述双三元液相色谱系统对所述净化柱正 向加载样品、对所述分析柱进行冲洗，该过程中，所述右泵依次通过第二管路接口、第一管 路接口、净化柱、第四管路接口、第三管路接口与废液池连接，所述左泵依次通过第五管路 接口、第六管路接口与分析柱连接； 然后，通过所述双三元液相色谱系统对所述净化柱反冲洗脱目标化合物、对所述 分析柱进样，该过程中，所述右泵依次通过第二管路接口、第三管路接口与废液池连接，所 述右泵依次通过第五管路接口、第四管路接口、净化柱、第一管路接口、第六管路接口与分 析柱连接。 由上述本专利技术提供的技术方案可以看出，本专利技术实施例提供的基于在线SPE的快 速测定尿液中轭合态3 _受体激动剂的方法，可实现样品的在线净化，无需再经过复杂的 人工前处理过程；解决了传统仪器分析方法前处理过程耗时耗力的问题，将原来需要1天 左右的分析时间减少到在15分钟内即可获得分析结果；解决了 受体激动剂的快速检测 方法无法准确定性定量的问题，该方法得到的结果可以作为确证方法使用；无需人工处理， 因此重现性良好，避免了人工操作带来的实验误差。 【附图说明】 图1为本专利技术实施例中净化柱正向加载样品、分析柱进行冲洗的状态示意图； 图2为本专利技术实施例中净化柱反冲洗脱目标化合物、分析柱进样的状态示意图。 图中：1至6分别指示六个管路接口。 【具体实施方式】 下面将对本专利技术实施例作进一步地详细描述。 本专利技术的基于在线SPE的快速测定尿液中轭合态受体激动剂的方法，其较佳 的【具体实施方式】是： 包括双三元液相色谱系统，所述双三元液相色谱系统包括净化柱、分析柱、左泵、 右泵、第一管路接口、第二管路接口、第三管路接口、第四管路接口、第五管路接口、第六管 路接口，相邻的管路接口之间设有切换阀门； 首先，在样品经过酶解预处理后，通过所述双三元液相色谱系统对所述净化柱正 向加载样品、对所述分析柱进行冲洗，该过程中，所述右泵依次通过第二管路接口、第一管 路接口、净化柱、第四管路接口、第三管路接口与废液池连接，所述左泵依次通过第五管路 接口、第六管路接口与分析柱连接； 然后，通过所述双三元液相色谱系统对所述净化柱反冲洗脱目标化合物、对所述 分析柱进样，该过程中，所述右泵依次通过第二管路接口、第三管路接口与废液池连接，所 述右泵依次通过第五管路接口、第四管路接口、净化柱、第一管路接口、第六管路接口与分 析柱连接。 所述净化柱采用美国的TurboflowC18-P柱，所述分析柱采用美国的Eclipse XDB-C18 柱。 采用以下方法配置标准溶液系列： 准确称取沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗标准品，分别用甲醇溶解配置成 1000 li g/mL单标储备液； 用甲醇稀释储备液，混合配制成10 U g/mL混合标准工作液； 将所述单标储备液和混合标准工作液用0. 1%甲酸水逐级稀释，配制成 0?l-100ng/mL包括 0? 1、0. 5、1，5、10、50、100ng/mL的 7 点标准系列； 标准曲线每日进行分析。测定实际样品时，每隔10次进样，重复测定10ng/mL标 准溶液。 采用以下方法配置溶剂： 0. 1 %甲酸水：取lmL甲酸，与999mL纯水混合均匀后制成； lOmmolpH= 8的醋酸铵溶液：取0? 77g醋酸铵，与990mL纯水混合，加冰醋酸调 解pH到8,再加水稀释至lOOOmL后混匀； 2molpH= 5. 2的醋酸铵溶液：取7. 7g醋酸铵，与40mL纯水混合，加冰醋酸调解 pH到5. 2,再加水稀释至50mL后混匀。 采用以下方法进行样品前处理： 酶解样品前处理方法：取lmL尿液样品，加入1. 95mL2MpH= 5. 2的醋酸铵溶 液，加入50yL0 -葡萄糖醛苷酶或芳基硫酸酯酶，在37°C±0. 3°C下酶解16小时后，过 0. 45ym滤膜转移至进样小瓶中待测。 样品首先应经过酶解预处理过程，使尿液中所以轭合态化合物转变成游离态以便 进一步分析，借助酶解方法对样品进行预处理可准确测定轭合态目标化合物。 本专利技术的基于在线SPE的快速测定尿液中轭合态受体激动剂的方法，用 Turboflow柱代替传统的SPE柱（净化柱），使杂质和目标化合物在SPE柱得到分离，杂质 直接进入废液，目标化合物组分在柱内保留。因此，该方法可实现样品的在线净化，无需再 经过复杂的人工前处理过程；解决了传统仪器分析方法前处理过程耗时耗力的问题，将原 来需要2天左右的分析时间减少到在15分钟内即可获得分析结果；解决了 0 -受体激动剂 的快速检测方法无法准确定性定量的问题，该方法得到的结果可以作为确证方法使用；无 需人工处理，因此重现性良好，避免了人工操作带来的实验误差。 本申请中，净化柱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于在线SPE的快速测定尿液中轭合态β‑受体激动剂的方法，其特征在于，包括双三元液相色谱系统，所述双三元液相色谱系统包括净化柱、分析柱、左泵、右泵、第一管路接口、第二管路接口、第三管路接口、第四管路接口、第五管路接口、第六管路接口，相邻的管路接口之间设有切换阀门；首先，在样品经过酶解预处理后，通过所述双三元液相色谱系统对所述净化柱正向加载样品、对所述分析柱进行冲洗，该过程中，所述右泵依次通过第二管路接口、第一管路接口、净化柱、第四管路接口、第三管路接口与废液池连接，所述左泵依次通过第五管路接口、第六管路接口与分析柱连接；然后，通过所述双三元液相色谱系统对所述净化柱反冲洗脱目标化合物、对所述分析柱进样，该过程中，所述右泵依次通过第二管路接口、第三管路接口与废液池连接，所述右泵依次通过第五管路接口、第四管路接口、净化柱、第一管路接口、第六管路接口与分析柱连接。

【技术特征摘要】
1. 一种基于在线SPE的快速测定尿液中轭合态￠-受体激动剂的方法，其特征在于，包 括双三元液相色谱系统，所述双三元液相色谱系统包括净化柱、分析柱、左泵、右泵、第一管 路接口、第二管路接口、第三管路接口、第四管路接口、第五管路接口、第六管路接口，相邻 的管路接口之间设有切换阀门； 首先，在样品经过酶解预处理后，通过所述双三元液相色谱系统对所述净化柱正向加 载样品、对所述分析柱进行冲洗，该过程中，所述右泵依次通过第二管路接口、第一管路接 口、净化柱、第四管路接口、第三管路接口与废液池连接，所述左泵依次通过第五管路接口、 第六管路接口与分析柱连接； 然后，通过所述双三元液相色谱系统对所述净化柱反冲洗脱目标化合物、对所述分析 柱进样，该过程中，所述右泵依次通过第二管路接口、第三管路接口与废液池连接，所述右 泵依次通过第五管路接口、第四管路接口、净化柱、第一管路接口、第六管路接口与分析柱 连接。2. 根据权利要求1所述的基于在线SPE的快速测定尿液中轭合态0 -受体激动剂的 方法，其特征在于，所述净化柱采用美国的Turboflow C18-P柱，所述分析柱采用美国的 Eclipse XDB-C18 柱。3. 根据权利要求2所述的基于在线SPE的快速测定尿液中轭合态￠-受体激动剂的方 法，其特征在于，采用以下方法配置标准溶液系列： 准确称取沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗标准品，分别用甲醇溶解配置...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓敏，苏晓鸥，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11