一种制备灵芝三萜类化合物的方法技术

本发明专利技术属于天然产物提取技术领域，特别公开了一种制备灵芝三萜类化合物的方法。本发明专利技术采用超高压联合固相萃取技术制备灵芝三萜类化合物，主要包括烘干粉碎、超高压处理、过滤收集、固相萃取、旋蒸、真空冷冻干燥等步骤。本发明专利技术相比传统浸提方法，节省90%以上的时间，且三萜提取率有所增加，提高了经济效益；溶剂回收利用，节省了溶剂用量，环保无污染；采用固相萃取，灵敏度高，节省大量的溶剂，可实现自动化批量处理。

【技术实现步骤摘要】
一种制备灵芝三萜类化合物的方法（一）
本专利技术属于天然产物提取
，特别涉及一种制备灵芝三萜类化合物的方法。（二）
技术介绍
灵芝是一种担子菌纲多孔菌科灵芝属的真菌，其又有仙草、瑞草之称，自古就作为一种滋补强壮、扶正固本的名贵中药在亚洲国家被广泛使用。随着灵芝人工培育的成功，以及批量化生产的实现，灵芝的可食用性已被普遍接受。在2000年版的《中国药典》中首次承认了灵芝的药用价值。经科学证明，灵芝中含有多种有效成分，主要包括多糖类、三萜类、生物碱类、核苷类、呋喃类衍生物、多肽氨基酸类、甾醇类、油脂类、有机锗和无机离子等，其中，三萜类作为灵芝中的重要成分，也是鉴定灵芝相关商品质量及品质的重要指标和保证，其活性越来越受到人们的关注。灵芝三萜类化合物属于高度氧化的羊毛甾烷衍生物，有较高的脂溶性，且存在于灵芝的中性组分和酸性组分中。在灵芝三萜类化合物中，主要以四环三萜和五环三萜为主，分子量一般为400-600，结构中一般有羟基，且在紫外光谱中呈现多个波长的特征吸收。药理研究证明灵芝三萜具有抗肿瘤、增强免疫力、抗HIV-1型病毒、解毒、降血脂、降血糖、降低胆固醇、护肝和改善记忆力等功能。随着灵芝三萜的开发研究，其提取方法亦越来越多，传统的方法主要有溶剂浸提法和回流提取。灵芝三萜类化合物结构特性，决定了其难溶于水、易溶于有机溶剂、性质不稳定的特点，因此一般常选用乙醇、氯仿等有机溶剂在常温或高温下进行粗提。但传统提取方法存在溶剂浪费、耗能耗时等缺点，已逐渐被新兴的超声波、微波等提取技术所代替。其中以超声波循环处理作为辅助手段，有效减少了各种溶剂的用量及提取时间，使灵芝三萜类物质的提取率有所提高。但这些方法都存在着周期长、提取率不高、有效成分破坏大等不足之处。超高压技术是近年来发展较快的一种新型的加工技术，起源于美国，且在食品灭菌、蛋白质改性等方面都得到了很好的应用。部分产品，如果酱、果汁已经得到上市，预示了超高压目前已经实现产业化。利用超高压技术提取灵芝中三萜，方法新颖简便，极大缩短了提取的时间，减小了有效成分的损失，在当今高速经济发展的社会是非常有必要的。另外固相萃取作为一种新型处理技术，既节省溶剂用量，又能快速将样品进行纯化富集，有着广泛的应用前景。灵芝三萜作为灵芝中的活性成分，有着不菲的药用研究价值，但其含量非常低，提取耗时，原料需求量大，尚未投入到实际工业生产中。因此，合理利用有效资源，节省提取时间，实现灵芝三萜的工业化生产，具有十分重要的意义。（三）
技术实现思路
本专利技术为了弥补现有技术的不足，提供了一种提取步骤简单、提取时间短，生产能耗低的制备灵芝三萜类化合物的方法。本专利技术是通过如下技术方案实现的：一种制备灵芝三萜类化合物的方法，以灵芝子实体为原料，包括如下步骤：（1）将灵芝子实体置于烘箱中烘干后粉碎，与水和乙酸乙酯混合，并装入塑料袋中真空封口；（2）将塑料袋放入超高压设备中，调节压力为100-500MPa，在25-55℃下处理5-25min，卸压后收集乙酸乙酯层，得到灵芝浸提液；（3）将灵芝浸提液过固相萃取柱，以乙腈-5%甲醇溶液作为洗脱剂进行纯化、富集，得到灵芝三萜；（4）将灵芝三萜通过旋转蒸发仪挥干并回收溶剂，真空冷冻干燥处理，得到产品灵芝三萜提取物。本专利技术采用超高压联合固相萃取技术制备灵芝三萜类化合物，主要包括烘干粉碎、超高压处理、过滤收集、固相萃取、旋蒸、真空冷冻干燥等步骤。对比专利CN1560072中提取灵芝三萜需2-4小时，本专利技术有效地解决了所存在的严重耗时问题，时间缩短到5min；对比专利CN102772448A、CN10530436，本专利技术有效地简化了提取分离步骤，一次性将灵芝三萜和多糖分离提取；采用固相萃取技术，灵敏度高，节省了溶剂用量，减少了生产能耗，且得率显著提高，大约在3.2%左右。最终制得的灵芝三萜含量的测定方法为：利用高氯酸-香草醛冰乙酸显色法。回收后的溶剂可循环用于灵芝三萜的提取，节省溶剂的用量。步骤（2）中将初次过滤后乙酸乙酯层为三萜提取液，而水层为灵芝多糖，一次将灵芝三萜和多糖提取，简化了步骤。本专利技术的更优方案为：步骤（1）中，将灵芝子实体置于烘干箱中，在40℃下烘干8小时，经中药粉碎机粉碎，过10目筛与水和乙酸乙酯混合，使灵芝粉与水和乙酸乙酯的料液比为1g：20mL：10mL。步骤（2）中，超高压设备的压力为300MPa，在45℃下处理5min，得到灵芝浸提液。步骤（3）中，灵芝浸提液通过固相萃取柱时，调节其pH为4，控制其流速为12mL/min先以体积比为1:9的乙腈-5%甲醇洗脱除杂，再以体积比为9:2的乙腈-5%甲醇进行洗脱，纯化富集灵芝三萜。本专利技术的有益效果：（1）使用超高压设备处理时，可同时将灵芝三萜和灵芝多糖提取，且时间仅用5min，相比传统浸提方法，节省90%以上的时间，且三萜提取率有所增加，提高了经济效益；（2）溶剂回收利用，节省了溶剂用量，环保无污染；（3）采用固相萃取，灵敏度高，节省大量的溶剂，可实现自动化批量处理。（四）具体实施方式下面结合实施例对本专利技术的方法作进一步说明，但不限于此。实施例中使用的灵芝子实体由山东广义灵芝养殖专业合作社提供，水分含量为10.3%，超高压处理设备由天津市华森淼淼生物工程技术有限公司购入。实施例1：（1）超高压处理前准备将灵芝子实体置于烘干箱中40℃烘干8小时，经中药粉粹机粉碎过10目筛。取2g灵芝粉末，以加入水和乙酸乙酯，并装入塑封袋中真空封口。（2）料液比的确定分别按料液比1:10:10、1:20:10、1:10:20将灵芝粉末与水、乙酸乙酯混合于塑封袋中，放入超高压设备中，调节压力为300MPa,在室温下处理5min，分别测定灵芝浸提液中三萜的含量，得率分别为1.98%、2.12%、1.72%，多糖的得率分别为1.79%、1.97%、1.82%。实验结果表明，当料液比为1:20:10（原料：水：乙酸乙酯）时，灵芝三萜和多糖的得率最高。（3）最佳压力的选择将塑封袋放入超高压设备中，调节压力分别为100、200、300、400、500MPa,在室温下处理5min，分别测定灵芝浸提液中三萜的含量，得率分别为1.99%、2.09%、2.15%、2.08%、2.00%，实验结果表明，当压力为300MPa时，灵芝三萜的得率最高。（4）最佳保压时间的选择将样品放于超高压设备中，设定压力为300MPa,室温下分别处理样品5、10、15、20、25min，结果显示灵芝三萜得率分别为2.22%、2.20%、2.21%、2.19%、2.20%，因此选择保压时间为5min即可。（5）最适提取温度的选择将样品放于超高压设备中，设定压力为300MPa,分别在温度25、35、45、55℃下保压5min，测得灵芝三萜的得率分别为2.19%、2.23%、2.25%、2.21%，因此选择45℃为最优提取温度。（6）固相萃取条件的选择将超高压处理后的样品过滤，收集乙酸乙酯层三萜过固相C18柱，分别以乙腈-5%甲醇9:2、4:1、7:3、1:9比例分别进行洗脱。测得灵芝三萜相对含量依次为85%、80%、65%、8%。因此，先用乙腈-5%甲醇以1:9洗脱除杂，再以乙腈-5%甲醇9:2进行洗脱，纯化富集灵芝三萜。同时，调节pH分别为2、4、6本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备灵芝三萜类化合物的方法，以灵芝子实体为原料，其特征为，包括如下步骤：（1）将灵芝子实体置于烘箱中烘干后粉碎，与水和乙酸乙酯混合，并装入塑料袋中真空封口；（2）将塑料袋放入超高压设备中，调节压力为100‑500MPa，在25‑55℃下处理5‑25min，卸压后收集乙酸乙酯层，得到灵芝浸提液；（3）将灵芝浸提液通过固相萃取柱，以乙腈‑5%甲醇溶液作为洗脱剂进行纯化、富集，得到灵芝三萜；（4）将灵芝三萜通过旋转蒸发仪挥干并回收溶剂，真空冷冻干燥处理，得到产品灵芝三萜提取物。

【技术特征摘要】
1.一种制备灵芝三萜类化合物的方法，以灵芝子实体为原料，其特征为，包括如下步骤：（1）将灵芝子实体置于烘箱中烘干后粉碎，与水和乙酸乙酯混合，并装入塑料袋中真空封口；（2）将塑料袋放入超高压设备中，调节压力为100-500MPa，在25-55℃下处理5-25min，卸压后收集乙酸乙酯层，得到灵芝浸提液；（3）将灵芝浸提液通过固相萃取柱，以乙腈-5%甲醇溶液作为洗脱剂进行纯化、富集，得到灵芝三萜；（4）将灵芝三萜通过旋转蒸发仪挥干并回收溶剂，真空冷冻干燥处理，得到产品灵芝三萜提取物。2.根据权利要求1所述的制备灵芝三萜类化合物的方法，其特征在于：步骤（1）中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王成忠，袁亚光，赵晓红，周晓，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37