一种灵芝总三萜含量的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种灵芝总三萜含量的检测方法，主要步骤为标准溶液的制备、标准曲线的绘制、供试品溶液的制备、总三萜含量的测定等。利用饱和碳酸钾溶液萃取、提取灵芝三萜类化合物的工艺，用高效液相色谱仪进行检测，省去了传统技术中后面的酸化、氯仿萃取等步骤，使得测定时间大大缩短、成本降低、检测效率和精密度更高，可广泛应用于检测样品尤其是保健品中灵芝中总三萜的含量。

Method for detecting total terpene content of Ganoderma lucidum three

The invention relates to a method for detecting the total terpene content of Ganoderma lucidum. The main steps of the method are the preparation of standard solution, the drawing of the standard curve, the preparation of the sample solution, the determination of the total three terpene content, and the like. The process of saturated solution of potassium carbonate extraction, extraction of Ganoderma lucidum three terpenoids, detected by HPLC, acidification, back in the traditional technology such as chloroform extraction step is omitted, the testing time is greatly shortened, cost reduction, detection efficiency and higher precision, and can be widely used in the detection of samples especially content health care products in the total three triterpenoids in Ganoderma lucidum.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种总三萜含量的检测方法，尤其涉及一种灵芝总三萜含量的检测方法。
技术介绍
灵芝中的总三萜可以分为灵芝三萜、灵芝醛等多种多环三萜。《现代科学论灵芝》中详细记载160种灵芝三萜，其中只有20余种是抗癌的，其他三萜也主要是抗艾滋病、保肝、抗高血压等作用。目前国内市场上很多初级灵芝孢子粉、灵芝孢子油，大多只萃取总三萜，他们的产品也大多是以总三萜计含量，由于对总三萜含量还没有更加简单实用的检测方法，导致无法对其质量进行快速有效的检测和定量测定。为此，需要建立一种经济简便、适用范围广、易普及的方法，用于检测样品尤其是保健品中灵芝中总三萜的含量，为灵芝中总三萜检测的日常工作提供参考方法。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了克服现有技术中灵芝总三萜含量检测方法适用范围小、效率和精确度低以及成本较高的技术问题，提供一种适用范围广、易普及、效率和精密度高以及成本较低的灵芝总三萜含量的检测方法。本专利技术解决技术问题所采用的技术方案是：提供一种灵芝总三萜含量的检测方法，采用高效液相色谱法测定灵芝总三萜的含量，包括以下步骤：(1)标准溶液的制备：吸取0.1mg/ml齐墩果酸储备液，用饱和碳酸钾溶液配成浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的标准溶液，作为对照品溶液备用；(2)标准曲线的绘制：避光条件下，取步骤(1)浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的标准溶液各5μl进行高效液相色谱法测定，绘制标准曲线，记录主峰面积，做浓度与峰面积的标准曲线方程；(3)供试品溶液的制备：称取1.0g灵芝提取物样品，置于洁净的离心管中，加入正丁醇25ml并称重，经涡旋处理1～3min、超声处理20～30min，冷却至室温后再称重，用正丁醇补足损失的质量，得到含有灵芝提取物样品的正丁醇溶液；将含有灵芝提取物样品的正丁醇溶液放入离心机中，以3000r/min离心20～30min，用移液枪准确吸取上清液10ml于分液漏斗中，用30ml饱和碳酸钾溶液分3次进行萃取，收集萃取的碳酸钾层，得到供试品溶液；(4)总三萜含量的测定：将步骤(3)制得的供试品溶液在水浴上蒸至近干，以超纯水定容至5ml，经0.45μm滤头过滤后进行高效液相色谱法测定，记录主峰面积，根据步骤(2)标准溶液的标准曲线方程，按灵芝提取物样品1.0g，最后定容至5ml计算，得出灵芝提取物样品中总三萜的含量。进一步，上述的一种灵芝总三萜含量的检测方法，步骤(3)供试品溶液的制备：称取1.0g灵芝提取物样品，置于洁净的离心管中，加入正丁醇25ml并称重，经涡旋处理1min、超声处理30min，冷却至室温后再称重，用正丁醇补足损失的质量，得到含有灵芝提取物样品的正丁醇溶液；将含有灵芝提取物样品的正丁醇溶液放入离心机中，以3000r/min离心30min，用移液枪准确吸取上清液10ml于分液漏斗中，用30ml饱和碳酸钾溶液分3次进行萃取，收集萃取的碳酸钾层，得到供试品溶液。进一步，上述的一种灵芝总三萜含量的检测方法，步骤(2)和步骤(4)的高效液相色谱法具体条件为：色谱柱规格为XDB-C18，5um，250mm×4.6mm；流动相：5％柠檬酸∶乙睛＝60∶40；流速：1.2ml/min；柱温：30℃；紫外检测器(DAD)检测波长：257nm；进样量为5μL。本专利技术有益效果在于：利用高效液相色谱法在提取灵芝三萜类化合物工艺的中间过程，用饱和碳酸钾萃取进行检测，省去了传统技术中后面的酸化、氯仿萃取等步骤，使得测定时间大大缩短、成本降低、检测效率和精密度更高，可广泛应用于检测样品尤其是保健品中灵芝中总三萜的含量。附图说明图1为供试品溶液色谱图。具体实施方式下面通过附图和具体实施例对本专利技术作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本专利技术的保护范围。本专利技术中所使用的方法如无特殊规定，均为常规的生产方法；所使用的试剂，如无特殊规定，均为常规的市售产品。1、主要仪器来源说明：Agilent HPLC 1260高效液相色谱仪：美国Agilent公司；紫外检测器(DAD)：美国Agilent公司；电子天平：瑞士梅特勒公司；超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。2、主要试剂来源说明：正丁醇：高效液相色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20151013；碳酸钾：作为分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号：20160102；超纯水由Milli-Q超纯水机制得(美国Millipore公司)。3、实施例1：采用高效液相色谱法测定灵芝总三萜的含量，包括以下步骤：(1)标准溶液的制备：吸取0.1mg/ml齐墩果酸储备液，用饱和碳酸钾溶液配成浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的标准溶液，作为对照品溶液备用；(2)标准曲线的绘制：避光条件下，取步骤(1)浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的标准溶液各5μl进行高效液相色谱法测定，在257nm波长下进行表样的定量测定，记录色谱图和主峰面积，计算线性回归方程为y＝46152x-1735.1，相关系数为0.9996，表明标准溶液的浓度与吸光度呈显著性线性相关。(3)供试品溶液的制备：称取1.0g灵芝提取物样品，置于洁净的离心管中，加入正丁醇25ml并称重，经涡旋处理1min、超声处理30min，冷却至室温后再称重，用正丁醇补足损失的质量，得到含有灵芝提取物样品的正丁醇溶液；将含有灵芝提取物样品的正丁醇溶液放入离心机中，以3000r/min离心30min，用移液枪准确吸取上清液10ml于分液漏斗中，用30ml饱和碳酸钾溶液分3次进行萃取，收集萃取的碳酸钾层，得到供试品溶液；(4)总三萜含量的测定：将步骤(3)制得的供试品溶液在水浴上蒸至近干，以超纯水定容至5ml，经0.45μm滤头过滤后进行高效液相色谱法测定，记录主峰面积，供试品溶液色谱图请见图1。灵芝提取物样品总三萜含量按下式计算： W = c × V × F × 1000 m × 1000 ]]>式中：W---试样中目标化合物含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；c---样液中灵芝提取物中总三萜的含量，单位为微克每毫升(μg/ml)；F---稀释因子；m---试样质量，gV---最终样液定容体积，ml；根据步骤(2)标准溶液的标准曲线方程，按取样1.0g，最后定容至5ml计算，方法检出限为1.0μg/100g，即100g灵芝提取物样品中总三萜的含量为1.0μg。上述步骤(2)和步骤(4)的高效液相色谱法具体条件为：色谱柱规格为XDB-C18，5um，250mm×4.6mm；流动相：5％柠檬酸∶乙睛＝60∶40；流速：1.2ml/min；柱温：30℃；紫外检测器(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灵芝总三萜含量的检测方法，采用高效液相色谱法测定灵芝总三萜的含量，其特征在于：包括以下步骤：(1)标准溶液的制备：吸取0.1mg/ml齐墩果酸储备液，用饱和碳酸钾溶液配成浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的标准溶液，作为对照品溶液备用；(2)标准曲线的绘制：避光条件下，取步骤(1)浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的标准溶液各5μl进行高效液相色谱法测定，绘制标准曲线，记录主峰面积，做浓度与峰面积的标准曲线方程；(3)供试品溶液的制备：称取1.0g灵芝提取物样品，置于洁净的离心管中，加入正丁醇25ml并称重，经涡旋处理1～3min、超声处理20～30min，冷却至室温后再称重，用正丁醇补足损失的质量，得到含有灵芝提取物样品的正丁醇溶液；将含有灵芝提取物样品的正丁醇溶液放入离心机中，以3000r/min离心20～30min，用移液枪准确吸取上清液10ml于分液漏斗中，用30ml饱和碳酸钾溶液分3次进行萃取，收集萃取的碳酸钾层，得到供试品溶液；(4)总三萜含量的测定：将步骤(3)制得的供试品溶液在水浴上蒸至近干，以超纯水定容至5ml，经0.45μm滤头过滤后进行高效液相色谱法测定，记录主峰面积，根据步骤(2)标准溶液的标准曲线方程，按灵芝提取物样品1.0g，最后定容至5ml计算，得出灵芝提取物样品中总三萜的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种灵芝总三萜含量的检测方法，采用高效液相色谱法测定灵芝总三萜的含量，其特征在于：包括以下步骤：(1)标准溶液的制备：吸取0.1mg/ml齐墩果酸储备液，用饱和碳酸钾溶液配成浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的标准溶液，作为对照品溶液备用；(2)标准曲线的绘制：避光条件下，取步骤(1)浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的标准溶液各5μl进行高效液相色谱法测定，绘制标准曲线，记录主峰面积，做浓度与峰面积的标准曲线方程；(3)供试品溶液的制备：称取1.0g灵芝提取物样品，置于洁净的离心管中，加入正丁醇25ml并称重，经涡旋处理1～3min、超声处理20～30min，冷却至室温后再称重，用正丁醇补足损失的质量，得到含有灵芝提取物样品的正丁醇溶液；将含有灵芝提取物样品的正丁醇溶液放入离心机中，以3000r/min离心20～30min，用移液枪准确吸取上清液10ml于分液漏斗中，用30ml饱和碳酸钾溶液分3次进行萃取，收集萃取的碳酸钾层，得到供试品溶液；(4)总三萜含量的测定：将步骤(3)制得的供试品溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽娜，王申开，张绍刚，张伟，刘禄增，
申请(专利权)人：威海百合生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37