一种灵芝成分的提取方法、生物饲料及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种灵芝成分的提取方法、生物饲料及其制备方法，属于天然产物加工领域。该提取方法包括：粉碎灵芝子实体，回流提取脂溶性成分，得灵芝脂肪，余第一残渣；用纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶解第一残渣，加入乙醇‑水溶液回流处理，得回流液和第二残渣，用D101大孔吸附树脂层析柱洗脱回流液，收集洗脱后的液体，得灵芝三萜；超声提取第二残渣，得提取液和第三残渣，DEAE‑纤维素纯化提取液得灵芝多糖。制备方法包括：将上述第三残渣与麦麸混合，灭菌，接种侧耳液体菌种和出芽短梗霉液体菌种，发酵。上述提取和制备方法简单、条件温和、易操作且得率高。由上述制备方法制备而得的生物饲料，毒副作用小，营养价值高。

Method for extracting ganoderma lucidum composition, biological feed and preparation method thereof

The invention relates to a method for extracting ganoderma lucidum components, a biological feed and a preparation method thereof, which belongs to the field of natural product processing. Including the extraction method: crushed Ganoderma lucidum, extracting liposoluble constituents of Ganoderma lucidum, fat, more than the first residue; by cellulase, hemicellulase and papain solution of the first residue, adding ethanol aqueous solution reflux treatment, the reflux liquid and second residue adsorption resin chromatography column reflux liquid with D101 macroporous. After collecting the eluting liquid of Ganoderma lucidum three terpene; ultrasonic extraction to extract second residues, and third residues, DEAE cellulose purified extract of Ganoderma lucidum polysaccharide. The preparation method comprises the following steps of: mixing the third residues and the wheat bran, sterilizing, inoculating the liquid spawn of the Pleurotus ostreatus and the liquid fungus of the budding short stem, fermentation. The extraction and preparation method is simple, mild, easy to operate and high yield. The biological feed prepared by the preparation method has the advantages of small toxic side effect and high nutritive value.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及天然产物加工领域，且特别涉及一种灵芝成分的提取方法、生物饲料及其制备方法。
技术介绍
灵芝(Ganodermalucidum)是担子菌纲、多孔菌科、灵芝属(Ganoderma)真菌，常用其子实体，是我国传统的名贵中药材和药用真菌。药理研究表明，灵芝具有调节免疫、抗肿瘤、抗衰老、提高机体耐缺氧能力等活性，其主要功效成分为灵芝三萜和灵芝多糖。灵芝三萜是其中一种主要的成分，具有明显的护肝排毒、抗氧化、抗菌抗炎、抗HIV病毒、抗肿瘤、镇痛、抑制血管紧张素转化酶、抑制胆固醇合成、降低血小板聚集、抑制组胺释放和调节免疫等作用，可以广泛应用于医药和保健品中。由于灵芝三萜存在于灵芝的细胞壁中，灵芝子实体细胞壁成分主要是几丁质，结构复杂及坚硬，且耐酸碱，造成细胞内有效物质的充分吸收受到很大程度上的阻碍。目前，通常采用有机溶剂法提取灵芝三萜，通常需要较长的提取时间并消耗大量的提取溶剂，同时大量有机溶剂的使用会给人体和环境带来不利的影响。另外，由于灵芝子实体结构紧密，活性成分附着在细胞内侧，传统的热水浸提法时间长、耗能高，活性成分提取物得率低。而单纯的使用超声辅助提取或者乙醇回流提取等方法提取的三萜得率也较低；采用超临界CO2萃取所需的设备投入较大、操作难度和生产成本也较高。目前，灵芝开发利用面对两个瓶颈，(1)灵芝原料综合利用低，提取后有大量残渣剩余。(2)灵芝子实体细胞壁成分主要是几丁质，结构复杂、坚硬，且耐酸碱，造成细胞内有效物质的充分吸收受到很大程度上的阻碍。由于灵芝生物活性成分含量较低，提取后残渣剩余量较大，资源浪费较严重。传统的残渣通常作为垃圾，采取堆放、填埋、焚烧处理，这既造成了资源的浪费，又对自然环境存在潜在的破坏。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种灵芝成分的提取方法，此提取方法操作简单，易于实现，且灵芝成分的提取率较高。本专利技术的第二目的在于提供一种生物饲料的制备方法，该制备方法所需的原料来源广，过程简单，易操作，易控制且耗时短。本专利技术的第三目的在于提供一种由上述生物饲料的制备方法制备而得的生物饲料，该生物饲料的原料为天然产物，毒副作用小，营养价值高。本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的：本专利技术提出一种灵芝成分的提取方法，其包括以下步骤：粉碎灵芝子实体，用提取剂回流提取脂溶性成分，得灵芝脂肪，余第一残渣。用纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶混合酶解第一残渣，加入乙醇-水溶液，于75-85℃的条件下回流处理1-3h，得回流液和第二残渣，用D101大孔吸附树脂层析柱洗脱回流液，收集洗脱后的液体，去除有机相，得灵芝三萜。超声提取第二残渣，得提取液和第三残渣，除去提取液中的色素和蛋白质，经DEAE-纤维素纯化得灵芝多糖。本专利技术还提出一种生物饲料的制备方法，其包括以下步骤：将上述的第三残渣与麦麸混合，灭菌，按重量比100:10-20接种侧耳液体菌种，于25-30℃条件下培养5-9天后接种与侧耳液体菌种重量比为10-20:8-13的出芽短梗霉液体菌种，发酵，得生物饲料。本专利技术还提出一种生物饲料，其由上述生物饲料的制备方法制备而得。本专利技术较佳实施例的灵芝成分的提取方法的有益效果是：通过对灵芝子实体进行粉碎，增加了原料与酶和提取剂之间的接触面积，提高酶解和提取速度。以纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶共同作为酶解过程中的酶，不仅利于细胞壁输送、破裂，使细胞内的化合物游离出来，还能水解植物中的蛋白，促使细胞释放更多的三萜物质。以乙醇-水溶液为提取剂，既能保证浸出速度快、浸出物的纯度高、杂质少，而且还能降低成本。回流温度和回流时间分别为75-85℃和1-3h，不仅可避免因回流时间过短或温度过低造成有效物质溶出率低，回流时间过长或温度过高又会使得植物细胞中的油脂、鞣质等杂质过多的溶出，增大分离纯化的难度等缺陷，还可进一步提高三萜物质的提取率并保持三萜物质的活性最佳。过滤后用D101大孔吸附树脂层析柱对回流液进行脱盐和洗脱，该类型层析柱吸附量高、填料颗粒均匀、机械强度好、不易破碎且残留物少，对有机物选择性好，分离、纯化、除杂的效果佳，故可提高灵芝三萜的纯度。将第二残渣进行超声提取得灵芝多糖，提高了原料的利用率；采用DEAE-纤维素纯化多糖，去除了提取液中的色素、蛋白质等杂质，提高了所得多糖的纯度。此外本专利技术还将第三残渣与麦麸混合，并接种侧耳液体菌种和出芽短梗霉液体菌种，通过微生物的代谢作用制备生物饲料，不仅进一步提高了灵芝原料的利用率，且该制备方法简单、条件温和、易操作、成本低、耗时短且得率高。由此制备方法制备而得的生物饲料毒副作用小，营养价值高，绿色环保，极具开发价值和应用前景。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的灵芝成分的提取方法、生物饲料及其制备方法进行具体说明。本专利技术实施例提供的灵芝成分的提取方法，以灵芝子实体为原料，提取过程中可先对原料进行前处理，即灵芝子实体粉碎，以增加原料与酶和提取剂之间的接触面积，提高酶解和提取速度。粉碎粒度例如可以为30-50目，该粒度范围内原料中的有效成分溶出率较大。原料优选采自新鲜灵芝的子实体，此条件下的灵芝子实体中的有效成分含量最高，有利于提高后续提取物中有效成分的含量。作为优选的，在粉碎步骤之前，还可以对灵芝子实体进行除杂、清洗和干燥等工序。其中除杂和清洗可避免其它杂质对提取效果的干扰，干燥可部分破坏原料的细胞膜和细胞壁，利于提取。其中，干燥的温度例如可以选择为20-45℃，优选为37℃。在此优选条件下，原料中的活性成分可最大程度的保留并不被高温破坏。由于灵芝中含有部分脂肪类物质，且脂肪类物质的提取方法较为简单，因此，可先对原料进行脂肪提取。例如可以在粉碎后的灵芝子实体中加入提取剂，为了保证提取效果，较佳的，于70-80℃的条件下回流提取脂溶性成分5-15h，该脂溶性成分即为灵芝脂肪，提取后剩余第一残渣。其中提取剂例如可以选用乙醚或石油醚，提取剂与灵芝子实体的比例可以为150-250mL:1g，此比例条件下，乙醚或石油醚对灵芝子实体中脂肪类物质的提取效果最佳。由于第一残渣中还含有较多三萜类物质，本专利技术实施例优选采用酶解法对第一残渣进行酶解，即利用活性酶的特异性来水解酶所对应的特定物质。因灵芝三萜存在于灵芝的细胞壁中，灵芝子实体细胞壁成分主要是几丁质，结构复杂及坚硬，且耐酸碱，造成细胞内有效物质的充分吸收受到很大程度上的阻碍。近年来，酶工程技术在中草药活性成分的提取中得到显著应用，选用适当的酶作用于中药材料，可以通过酶反应温和地分解细胞壁及细胞间质中的纤维素、半纤维素、果胶质等成分，破坏细胞壁的致密构造，引起细胞壁及细胞间质结构产生局部疏松、膨胀、崩溃等变化，减小细胞壁及细胞间质等传质屏障对有效成分从胞内向提取介质扩散的传质阻力，从而有利于有效成分的溶出。又因纤维素和半纤维素是细胞壁的主要成分，用纤维素酶和半纤维素酶处理，能使其细胞壁疏松、破裂，有利于细胞内的化合物游离出来。此外，蛋白酶能水解植物中的蛋白，促使细胞释放更多的三萜，故本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灵芝成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：粉碎灵芝子实体，用提取剂回流提取脂溶性成分，得灵芝脂肪，余第一残渣；用纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶混合酶解所述第一残渣，加入乙醇‑水溶液，于75‑85℃的条件下回流处理1‑3h，得回流液和第二残渣，用D101大孔吸附树脂层析柱洗脱所述回流液，收集洗脱后的液体，去除有机相，得灵芝三萜；超声提取所述第二残渣，得提取液和第三残渣，除去所述提取液中的色素和蛋白质，经DEAE‑纤维素纯化得灵芝多糖。

【技术特征摘要】
1.一种灵芝成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：粉碎灵芝子实体，用提取剂回流提取脂溶性成分，得灵芝脂肪，余第一残渣；用纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶混合酶解所述第一残渣，加入乙醇-水溶液，于75-85℃的条件下回流处理1-3h，得回流液和第二残渣，用D101大孔吸附树脂层析柱洗脱所述回流液，收集洗脱后的液体，去除有机相，得灵芝三萜；超声提取所述第二残渣，得提取液和第三残渣，除去所述提取液中的色素和蛋白质，经DEAE-纤维素纯化得灵芝多糖。2.根据权利要求1所述的灵芝成分的提取方法，其特征在于，所述提取剂为乙醚或石油醚，粉碎后的所述灵芝子实体与所述提取剂的比例为1g:150-250mL。3.根据权利要求1所述的灵芝成分的提取方法，其特征在于，提取所述脂溶性成分是在温度为70-80℃的条件下回流5-15h。4.根据权利要求1所述的灵芝成分的提取方法，其特征在于，所述纤维素酶的酶活为45000-55000u/g，所述纤维素酶与所述灵芝子实体的重量比为2-4:100。5.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：余晓红，李凤伟，李锋，薛锋，李雨珊，王胜，刘冠骥，
申请(专利权)人：盐城工学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32