一种新型龙眼检测试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术公开了龙眼的两种新的核苷酸序列，还公开了检测前述序列的试剂在制备龙眼检测试剂中的用途，以及龙眼的检测试剂盒和检测方法。本发明专利技术检测试剂盒和检测方法可以准确、有效的检测龙眼，特异性强，耗时短，应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
一种龙眼检测试剂盒和检测方法本申请是申请日：2013年5月17日、申请号：201310184812.1、专利技术名称：龙眼的检测试剂盒和检测方法的专利申请的分案申请。
本专利技术涉及龙眼的检测试剂盒和检测方法。
技术介绍
龙眼(DimocarpuslonganLour·)，俗称“桂圆”，属于无患子科龙眼属,是传统的药食兼用植物，主要分布在热带、南亚热带地区。中国作为龙眼的发源地，已经有近千年的栽培历史，历史上南“桂圆”北“人参”之称。中国是世界上龙眼基因资源最丰富、栽培品种最多的国家。疯人果又叫龙荔，有毒，其形态特征与龙眼极为近似，容易混淆，导致消费者中毒，存在极大的安全隐患，急需提供一种方法来解决该问题。
技术实现思路
为了解决龙眼与龙荔易混淆的问题，本专利技术提供了4种龙眼特异的核苷酸序列及其用途，还提供龙眼的检测试剂盒和检测方法。本专利技术4种核苷酸序列如SEQIDNO.1～4所示。本专利技术检测SEQIDNO.1～4任意一项所示核苷酸序列的试剂在制备龙眼检测试剂中的用途。所述检测SEQIDNO.1～4任意一项所述核苷酸序列的试剂包括扩增SEQIDNO.1～4任意一项所示核苷酸序列的试剂。所述扩增SEQIDNO.1～4任意一项所述核苷酸序列的试剂包括SEQIDNO.5～6、SEQIDNO.7～8、SEQIDNO.11～12、SEQIDNO.13～14、SEQIDNO.15～16、SEQIDNO.17～18或SEQIDNO.19～20所示的核苷酸序列。本专利技术检测龙眼的试剂盒，包括任选的用于检测SEQIDNO.1～4任意一项所述核苷酸序列的试剂。所述试剂包括扩增SEQIDNO.1～4任意一项所示核苷酸序列的试剂。所述扩增试剂包括SEQIDNO.5～6、SEQIDNO.7～8、SEQIDNO.11～12、SEQIDNO.13～14、SEQIDNO.15～16、SEQIDNO.17～18或SEQIDNO.19～20所示的核苷酸序列。本专利技术龙眼的检测方法，包括如下步骤：a，提取样本DNA：提取待检样本中的DNA；b，检测：用前述的试剂盒检测待检样本，即可。本专利技术SEQIDNO.1～4所示核苷酸序列为龙眼特异性序列，通过检测这些序列可以有效鉴定待检样本是否为龙眼，准确区别龙眼和龙荔，保证食品安全，操作简便，具有良好的应用前景。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本专利技术权利要求书记载的内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1用改良的RAPD技术扩增桂圆的DNA。I4、Q12和Q19分别为不同的RAPD引物，M:为DL2000的DNA分子大小标记，大小为bp，下同；图2RAPD产物切胶回收纯化后电泳检测，2号：从GY的I4的第4条带来的；4号：从GY的Q19第2、3、4条带来的；5号：从GY的Q12的倒数第2条带；图3PCR扩增鉴定克隆2-1阳性。设计合成位于载体上序列的T7/SP6引物直接扩增蓝白筛选的白色细菌菌落。克隆2-1,2-2,2-3,2-4,2-6分别是PCR阳性；其中克隆2-1(红色)为强阳性，提取克隆2-1质粒DNA，进行DNA序列分析，获得新的DNA序列(SCAR)；图4PCR扩增鉴定4-7/4-8阳性克隆。设计合成位于载体上序列的T7/SP6引物直接扩增蓝白筛选的白色细菌菌落。克隆4-1,4-2,4-3,4-7,4-8分别是PCR阳性；其中4-7,4-8(红色)，提取质粒DNA，进行DNA序列分析，各获得新的DNA序列(SCAR)；图5用EcoRI酶切鉴定5号RAPD产物的阳性克隆。克隆5-2和5-2均为阳性克隆，含有一个约500bp的插入片段。取克隆5-2(红色)，提取质粒DNA，进行DNA序列分析，获得新的DNA序列(SCAR)；图6引物对LY2-1在不同桂圆样本中的特异性扩增与检测。样本1、2、3、4、5、6、8、9和14为采自位于长江上游四川合江的不同的青果；样本LZ、GD、GX、HN、FJ分别为采自四川泸州、广东、广西、海南和福建来源的桂圆品种，均获得特异性DNA扩增片段；DD为紫花地丁；JGT为沟景天；GHC为采自四川古蔺的赶黄草；JYH为金银花；TM为采自四川凉山的天麻。M:为天根公司的DL600的DNA分子大小标记，大小为bp；图7引物对LY4-7在不同桂圆样本中的特异性PCR扩增与检测。样本1、2、3、4、5、6、8、9和14为采自位于长江上游四川合江的不同的青果；样本LZ、GD、GX、HN、FJ分别为采自四川泸州、广东、广西、海南和福建来源的桂圆品种，均获得特异性DNA扩增片段；DD为紫花地丁；JGT为沟景天；GHC为采自四川古蔺的赶黄草；JYH为金银花；TM为采自四川凉山的天麻。M:为天根公司的DL600的DNA分子大小标记，大小为bp；图8引物对LY4-8在不同桂圆样本中的特异性PCR扩增与检测。样本1、2、3、4、5、6、8、9和14为采自位于长江上游四川合江的不同的青果；样本LZ、GD、GX、HN、FJ分别为采自四川泸州、广东、广西、海南和福建来源的桂圆品种，均获得特异性DNA扩增片段；DD为紫花地丁；JGT为沟景天；GHC为采自四川古蔺的赶黄草；JYH为金银花；TM为采自四川凉山的天麻。M:为天根公司的DL600的DNA分子大小标记，大小为bp。箭头所指位置为特异性DNA条带；图9引物对LY5-2在不同桂圆样本中的特异性PCR扩增与检测。样本1、2、3、4、5、6、8、9和14为采自位于长江上游四川合江的不同的青果；样本LZ、GD、GX、HN、FJ分别为采自四川泸州、广东、广西、海南和福建来源的桂圆品种，均获得特异性DNA扩增片段；DD为紫花地丁；JGT为沟景天；GHC为采自四川古蔺的赶黄草；JYH为金银花；TM为采自四川凉山的天麻。M:为天根公司的DL600的DNA分子大小标记，大小为bp。箭头所指位置为特异性DNA条带；图10引物对LY2-1-full在不同桂圆样本中的特异性PCR全长扩增。样本1、2、3、4、5、6、8、9和14为采自位于长江上游四川合江的不同的青果；样本LZ、GD、GX、HN、FJ分别为采自四川泸州、广东、广西、海南和福建来源的桂圆品种，均获得特异性DNA扩增片段；DD为紫花地丁；JGT为沟景天；GHC为采自四川古蔺的赶黄草；JYH为金银花；TM为采自四川凉山的天麻。M:为天根公司的DL600的DNA分子大小标记，大小为bp；图11引物对LY4-7-full在不同桂圆样本中的特异性PCR全长扩增。样本1、2、3、4、5、6、8、9和14为采自位于长江上游四川合江的不同的青果；样本LZ、GD、GX、HN、FJ分别为采自四川泸州、广东、广西、海南和福建来源的桂圆品种，均获得特异性DNA扩增片段；DD为紫花地丁；JGT为沟景天；GHC为采自四川古蔺的赶黄草；JYH为金银花；TM为采自四川凉山的天麻。M:为天根公司的DL600的DNA分子大小标记，大小为bp；图12引物对LY4-8-full在不同桂圆样本中的特异性PCR全长扩增。样本1、2、3、4、5、6、8、9和14为采自位于长江上游四川合江的不同的青果；样本LZ、GD、GX、HN、FJ分别为采自四本文档来自技高网...

【技术保护点】
SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4所示的2种核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.SEQIDNO.4所示的核苷酸序列。2.检测SEQIDNO.4所示核苷酸序列的试剂在制备龙眼检测试剂中的用途；所述检测SEQIDNO.4所述核苷酸序列的试剂包括扩增SEQIDNO.4所示核苷酸序列的试剂；所述扩增的试剂包括SEQIDNO.11～12或SEQIDNO.19～20所示的核苷酸序列。3.一种检测龙眼的试剂盒，其特征在于：包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅俊江，杨璐全，
申请(专利权)人：傅俊江，
类型：发明
国别省市：湖南;43