一种人胚胎干细胞体外分化为功能性心肌细胞的新型培养方法技术

本发明专利技术公开了一种人胚胎干细胞体外分化为功能性心肌细胞的新型有效培养方法，不同于传统的经典的悬滴培养方法，以一种简化的悬浮分化培养方法形成类胚体，采用无血清培养液并进行改良，其中添加了多种诱导和营养强化物质，增加心肌细胞的分化率和存活时间。本发明专利技术进一步有效地更新和完善了胚胎干细胞分化为功能性心肌细胞的方法，极大地提高拟胚体分化的心肌细胞的比例，可为干细胞临床移植治疗技术和药物筛选等提供更多的功能强大的心肌细胞来源。本发明专利技术方法操作简单易行；缩短了培养时间；增强了体外分化成心肌细胞的功能；包括搏动时间、心肌细胞跳动的自律性和节律性；可重复性强。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种人胚胎干细胞体外分化为功能性心肌细胞的新型培养方法，包括以下步骤：步骤1）拟胚体的形成：以浓度为(2~4)×105个/ml接种人胚胎干细胞至明胶包被的培养皿中，每天添加培养基并吹打，避免细胞贴壁，所用培养基为无血清拟胚体形成培养基，培养条件是37˚C、5%CO2和95%饱和湿度，第3天可形成拟胚体并悬浮在培养液中，第5‑7天形成大量的拟胚体；步骤2）心肌细胞分化培养：收集拟胚体以1个/孔接种在12孔培养皿中，所用的心肌细胞分化培养基是以80%DMEM培养基为基础培养基，添加20%血清替代品，并添加了多种诱导物质；每天更换一次分化培养基，并添加强化营养物质，培养条件为37˚C、5%CO2和95%饱和湿度的条件下静态培养；跳动心肌细胞在培养的第3天出现，大量的心肌细胞在培养的第5天出现跳动，当大面积观察到节律性搏动细胞团的出现即完成了心肌细胞的分化。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周萱，
申请(专利权)人：奥思达干细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32