一种对虾胚胎细胞的分离与培养方法技术

本发明专利技术建立一种有效的对虾胚胎细胞解离与培养技术，并将其应用于对虾胚胎细胞建系研究。本发明专利技术优化了对虾胚胎的无菌消毒处理技术，可直接从对虾育苗厂收集虾卵，运回实验室后处理，尤其是碘伏的处理浓度的优化，既保证有效控制微生物和原生动物的污染，又最大程度降低碘伏对胚胎的毒性；优化了对虾完全培养基的配方，为对虾胚胎细胞的贴壁和生长提供了更合适的营养条件，贴壁更快，生长更好，同时简化了培养基的配方，降低了培养基的成本；采用由适当孔径不锈钢滤网制作的胚胎细胞收集器，捣碎对虾胚胎的方法，可在短时间内获得大量活的胚胎细胞和细胞团，操作简便快速，仅用数秒，不易污染，效果远超已报道的其它解离方法。

【技术实现步骤摘要】
201610322759

【技术保护点】
一种对虾胚胎的清洗方法，其特征在于，所述的方法是用吸管收集对虾胚胎至离心管中，无菌海水洗涤5‑6次，再将胚胎转移到70目不锈钢滤网中，淘洗数次后，流水连续冲洗1‑2h，然后用10％碘伏处理5‑10分钟，再用75％酒精漂洗20‑30秒去除碘伏；然后依次用添加有2000IU/mL青霉素和链霉素的无菌海水和PBS漂洗去除酒精；最后暂存于对虾基础培养基中。

【技术特征摘要】
1.一种对虾胚胎的清洗方法，其特征在于，所述的方法是用吸管收集对虾
胚胎至离心管中，无菌海水洗涤5-6次，再将胚胎转移到70目不锈钢滤网中，
淘洗数次后，流水连续冲洗1-2h，然后用10％碘伏处理5-10分钟，再用75％酒
精漂洗20-30秒去除碘伏；然后依次用添加有2000IU/mL青霉素和链霉素的无
菌海水和PBS漂洗去除酒精；最后暂存于对虾基础培养基中。
2.如权利要求1所述的清洗方法，其特征在于，所述的无菌海水是将天然
海水依次经过16-20层纱布和0.22μm滤膜过滤后，高压蒸汽灭菌制成的。
3.如权利要求1所述的清洗方法，其特征在于，所述的PBS溶液的配制方
法如下：分别称取8.0gNaCl，0.2gKCl，3.0gNa2HPO4·12H2O和0.2g的KH2PO4溶于1L纯水中，溶解，用3MNaOH调节pH值至7.2～7.4，121℃高压灭菌20
分钟，分装后4℃保存备用。
4.如权利要求1所述的清洗方法，其特征在于，所述的对虾基础培养基的
制备方法如下：在1升超纯水中溶解20.55gL-15培养基、5gNaCl、2g葡萄糖、
1gNaHCO3、0.01g牛磺酸、0.01g脯氨酸、1.0×105IU青霉素钠和100mg硫
酸链霉素,调节pH值至7.2-7.4，用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，-20℃保存。
5.一种分离对虾胚胎细胞的方法，其特征在于，所述的方法是将权利要求1
所述的清洗方法保存的对虾胚胎转移到已灭菌的研钵内，弃除多余培养基；用

【专利技术属性】
技术研发人员：郭华荣，张晓娟，陈月如，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东;37