一种提高延胡索酸产量的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高延胡索酸产量的方法，属于遗传工程和发酵工程领域。本发明专利技术将米根霉的丙酮酸羧化酶基因RoPYC进行密码子优化得到基因RoPYC*，然后将RoPYC*的R485位点突变成了脯氨酸。较密码子优化前的野生型丙酮酸羧化酶的表达提高了24.6％，表达突变体的基因工程菌在7L发酵罐条件下，在发酵进行到36h时额外通入10％的二氧化碳，延胡索酸产量达到453.6mg/L，较对照提高了20％。该发明专利技术有效强化了碳代谢流由丙酮酸进入延胡索酸的合成途径，为构建工程酵母高效生产延胡索酸及其它二元羧酸创造了条件，具有很好的工业应用价值和前景。

【技术实现步骤摘要】
201610332689

【技术保护点】
一种丙酮酸羧化酶突变体，其特征在于，所述突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的丙酮酸羧化酶的基础上，将第485位的精氨酸突变成为脯氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种丙酮酸羧化酶突变体，其特征在于，所述突变体是在氨基酸序列如SEQIDNO.1
所示的丙酮酸羧化酶的基础上，将第485位的精氨酸突变成为脯氨酸。
2.编码权利要求1所述的一种丙酮酸羧化酶突变体的基因，其特征在于，在SEQIDNO.2
所示序列基础上将编码第485位的精氨酸的密码子修改为编码脯氨酸的密码子CCA。
3.一种表达权利要求1所述突变体的基因工程菌，其特征在于，以同时缺失了编码丙酮
酸脱羧酶PDC1、乙醇脱氢酶ADH1、延胡索酸酶FUM1的基因的酿酒酵母为宿主。
4.根据权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，以pY15TEF1为表达载体，表达权
利要求2所述的基因。
5.一种利用权利要求3或4所述的基因工程菌发酵生产二元羧酸的方法，其特征在于，
是在发酵过程中通入二氧化碳。
6.根据权利要求5所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐国强，蒋伶活，刘洋，李佳雨，刘维瑾，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32