过量共表达磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶提高钝齿棒杆菌精氨酸产量制造技术

钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5是通过传统诱变育种手段获得的高产精氨酸菌株，该菌株具有独立知识产权。本专利以SYPA5-5基因组DNA为模板，扩增得到编码磷酸果糖激酶的基因pfk和丙酮酸激酶的基因pyk，将两者串联到表达载体pDXW-10上，电击转化到C.crenatum SYPA5-5中，构建得到基因工程菌SYPA5-5/pDXW-10-pfk-pyk。该工程菌中磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶同时得到加强表达，提高了EMP途径代谢强度，增加了葡萄糖消耗，工程菌在5L发酵罐发酵96h精氨酸产量为48.7g·L-1，比原始菌提高了27.5％。这是首次在钝齿棒杆菌中通过串联加强表达磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶提高精氨酸的发酵产量。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种重组质粒pDXW‑10‑pfk‑pyk，其特征是以Corynebacterium crenatum SYPA5‑5基因组DNA为模板，扩增得到编码磷酸果糖激酶的基因(SEQ ID NO：1所示序列)和丙酮酸激酶的基因(SEQ ID NO：2所示序列)，将其串联到表达载体pDXW‑10上，获得重组质粒pDXW‑10‑pfk‑pyk。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：饶志明，徐美娟，许正宏，张显，杨套伟，耿燕，卢妍，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32