半胱氨酸蛋白酶抑制剂S的应用制造技术

本发明专利技术公开了半胱氨酸蛋白酶抑制剂S（CystatinS）的新用途，具体为CystatinS在制备诊断和预示肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌标志物中的应用；本发明专利技术还公开了诊断和预示肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌标志物的捕获剂，并将捕获剂用于制备诊断和预示肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌的试剂盒，制得的试剂盒具有特异性好、灵敏度高等优点，能够用于肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌的早期诊断、治疗过程中的疗效评估以及治疗后的转移复发监控。

【技术实现步骤摘要】
半胱氨酸蛋白酶抑制剂S的应用
本专利技术属于医学检测领域，涉及半胱氨酸蛋白酶抑制剂S的应用。
技术介绍
随着对肿瘤发病机理研究的不断深入，发现Cystatin家族作为组织蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶的内源性抑制剂，在肿瘤的发生、发展、浸润和转移过程中起着非常重要的作用。研究结果显示，Cystatin家族成员在不同肿瘤中的表达水平有所上升,例如CystatinC在卵巢癌和头颈部癌症中的表达有不同水平的上升，stefin A在非小细胞肺癌中的表达水平有所增加，Cystatin F在多种肿瘤中的表达水平都有显著增加，很可能是由于在肿瘤发生、发展过程中需要组织蛋白酶的参与，先诱导其表达量增加，再激活机体本身的应激机制，导致Cystatin的表达量上升以抑制过里量的组织蛋白酶活性。但Cystatin的表达量并不与肿瘤的发展呈正相关，例如在胶质瘤中，Cystatin C的低表达意味着疾病的晚期，患者的生存期较短，且易于复发，这可能是到了肿瘤的后期阶段，会有一些其他的机制对Cystatin的水平进行调控，以促进肿瘤的进一步恶化。半胱氨酸蛋白酶抑制剂S (Cystatin S)是人类Cystatin家族成员，由CST4基因编码的含141个氨基酸的蛋白质，分子量为16.4Kda。Cystatin S分子中含有两个二硫键，为典型的分泌蛋白，分布于体液和分泌物中，如眼泪、唾液、血清、血浆等。据文献报道，CST4在胃癌组织中的表达量高于正常胃粘膜组织，在胃癌细胞系中的表达部位与胃癌组织较一致，且表达率随细胞系的分化程度降低而降低。临床资料分析表明，CST4的表达与浸润深度、远处转移以及肿瘤分期(!TM分析)相关；生存分析表明，CST4表达阳性患者的5年生存率显著高于无表达组；Cox回归分析表明，CST4是一个独立预后因子；从而提示CST4可能在胃癌的发生、发展过程中发挥类似肿瘤抑制因子的作用。但迄今为止，CST4可用于胃癌的疗效评估、转移复发监控未见报道，同时也未见CST4与其他疾病如胰腺癌、食管癌、肝癌和胃肠间质瘤等相关的报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供CST4基因、CST4基因的mRNA、CST4基因的cDNA、CST4基因截短片段、CST4基因编码的Cystatin S蛋白或Cystatin S多肽在制备诊断和预示肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌标志物中的应用；本专利技术的目的之二在于提供肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌标志物的捕获剂；本专利技术的目的之三在于提供含有上述捕获剂的试剂盒。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案: 1.CST4基因、CST4基因的mRNA、CST4基因的cDNA、CST4基因截短片段、CST4基因编码的Cystatin S蛋白或Cystatin S多肽在制备诊断和预示肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌标志物中的应用，所述CST4基因的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。 优选的，所述CST4基因截短片段是以SEQ ID N 0.2、5所示核苷酸序列为上游引物，SEQ ID N 0.3、6所示核苷酸序列为下游引物扩增所得的核苷酸序列，所述SEQ ID N0.2与 SEQ ID N0.3 配对，所述 SEQ ID N0.5 与 SEQ ID N0.6 配对。优选的，所述CST4基因编码的Cystatin S蛋白的氨基酸序列如SEQ ID N0.8所/Jn ο优选的，所述诊断和预示为诊断、疗效评估或转移复发监控。2.肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌标志物的捕获剂，所述标志物为CST4基因、CST4基因的mRNA、CST4基因的cDNA、CST4基因截短片段、CST4基因编码的CystatinS蛋白或Cystatin S多肽，所述CST4基因的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。优选的,所述捕获剂为识别Cystatin S蛋白或Cystatin S多肽的特异性抗体。优选的，所述捕获剂为检测CST4基因、CST4基因的mRNA、CST4基因的cDNA或CST4基因的截短片段的特异引物和探针。优选的，所述特异引物如SEQ ID N0.5和SEQ ID N0.6所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID N0.7所示。3.含有所述捕获剂的试剂或试剂盒。优选的，所述试剂盒为CST4基因、CST4基因的mRNA、CST4基因的cDNA或CST4基因截短片段实时定量检测试剂盒，其上游引物如SEQ ID N0.5，下游引物SEQ ID N0.6所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID N0.7所示；或， 所述试剂盒为Cystatin S酶联免疫检测检测试剂盒,包括包被有单克隆抗体的固相载体、生物素标记的多克隆抗体和显色底物。更优选的，所述单克隆抗体为鼠抗人Cystatin S单克隆抗体，所述多克隆抗体为兔抗人Cystatin S多克隆抗体，所述显色底物为四甲基联苯胺。本专利技术的有益效果在于:本专利技术公开了 CST4基因、CST4基因的mRNA、CST4基因的cDNA、CST4基因截短片段、CST4基因编码的Cystatin S蛋白或Cystatin S多肽作为检测肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌的标志物，并公开了检测上述标志物的捕获剂，将捕获剂与常规试剂组成检测试剂盒，获得的试剂盒具有灵敏度高、特异性好等优点，能够用于肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌的早期诊断，利用试剂盒的诊断结果可早于临床症状，同时还可以用于治疗过程的疗效评估和治疗后的转移复发监控。【附图说明】为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图: 图1为重组质粒结构图。图2为CST4基因的mRNA绝对定量检测试剂盒检测胰腺癌ROC曲线。图3为CST4基因的mRNA绝对定量检测试剂盒检测食管癌ROC曲线。图4为CST4基因的mRNA绝对定量检测试剂盒检测肝癌ROC曲线。图5为CST4基因的mRNA绝对定量检测试剂盒检测胃肠间质瘤ROC曲线。图6为CST4基因的mRNA绝对定量检测试剂盒检测胃癌ROC曲线。图7为Cystatin S酶联免疫检测试剂盒检测Cystatin S蛋白的标准曲线。图8为Cystatin S酶联免疫检测试剂盒检测胰腺癌ROC曲线。图9为Cystatin S酶联免疫检测试剂盒检测食管癌ROC曲线。图10为Cystatin S酶联免疫检测试剂盒检测肝癌ROC曲线。图11为Cystatin S酶联免疫检测试剂盒检测胃肠间质瘤ROC曲线。图12为Cystatin S酶联免疫检测试剂盒检测胃癌ROC曲线。【具体实施方式】下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。本专利技术使用的试剂如下:Taq DNA聚合酶购自罗氏公司(货号为:12032953001)；尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)购自NEB公司；dNTPs购自TAKARA公司；引物和探针由上海英潍捷基生物技术有限公司合成；Cystatin S单克隆抗体购自美国R&D公司(货号为:MAB1296);兔抗人Cystatin S多克隆抗体(货号为:11542_RP02)、Cystatin S蛋白标准品(货号11542-H08H)购自北京义翘神州生物技术有限公司。实施例1制备重组质粒标准品 本文档来自技高网...

【技术保护点】
CST4基因、CST4基因的mRNA、CST4基因的cDNA、CST4基因截短片段、CST4基因编码的Cystatin S蛋白或Cystatin S多肽在制备诊断和预示肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌标志物中的应用，所述CST4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.CST4基因、CST4基因的mRNA、CST4基因的cDNA、CST4基因截短片段、CST4基因编码的Cystatin S蛋白或Cystatin S多肽在制备诊断和预示肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌标志物中的应用，所述CST4基因的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述CST4基因截短片段是以SEQIDN0.2、5所示核苷酸序列为上游引物，SEQ ID N0.3、6所示核苷酸序列为下游引物扩增所得的核苷酸序列，所述SEQ ID N0.2与SEQ ID N0.3配对，所述SEQ ID N0.5与SEQ ID N0.6配对。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述CST4基因编码的CystatinS蛋白的氨基酸序列如SEQ ID N0.11所示。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述诊断和预示为诊断、疗效评估或转移复发监控。5.肝癌、胃肠间质瘤、胰腺癌、食管癌或胃癌标志物的捕获剂，其特征在于:所述标志物为CST4基因、CST4基因的mRNA、CST4基因的cDNA、CST4基因截短片段、CST4基因编码的Cystatin S蛋白或Cystatin S多肽,所述CST4基因的核苷酸序列如SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：王弢，秦勇，渠香云，
申请(专利权)人：上海良润生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31