一种鉴别藜芦药材的方法技术

本发明专利技术提供一种鉴别藜芦药材的方法，包括：对藜芦药材进行提取，得到含有活性成分组的藜芦药材特征提取物；对特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式测定出各活性成分相应的标准参照品的特征峰峰强度；通过定量分析手段测定得到藜芦药材中标准参照品的绝对含量；利用特征峰峰强度的比值和所述标准参照品的绝对含量，计算出藜芦药材中各活性成分的含量及活性成分组含量。本发明专利技术利用IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术，反映藜芦药材中含有的化合物及其间比例，完成对藜芦药材品种和质量的鉴定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然药用植物的鉴别领域，具体地，涉及一种鉴别藜芦药材的方法。
技术介绍
藜芦（Veratrum nigrum）亦叫黑藜芦、山葱等，系百合科藜芦属多年生草本植物，始载于本草纲目，产于东北、河北、山东、河南、山西、陕西、内蒙古、甘肃等省。中医用天目黎芦、毛叶黎芦、蒙自黎芦、狭叶黎芦、大理黎芦、毛穗黎芦、兴安黎芦、黑紫黎芦等的根、根茎入药，藜芦因其分布范围广为药用主要品种。藜芦归胃、肺、肝经，性寒，味辛、苦，用于治疗中风痰壅、癫痫、淋巴管炎、虐疾、乳腺炎、骨折、跌打损伤、头癣、疥疮等症，还可用于灭蛆、蝇等[①中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志.科学出版社，2004,45(1):21.②中华本草.科学出版社，1999.]。研究证明藜芦根、根茎中所含的主要活性成分为异胆甾烷型和胆甾烷型生物碱。藜芦的活性成分具有多样性、复杂性等特点，而且因产地、气候、光照等自然条件差异或提取溶剂的不同，活性成分的含量会有所变化。因此，在鉴别和评价藜芦药材及其产品过程中，仅仅采用某种单一分析检测手段[如高效液相色谱法(HPLC）]测定其中某一种主要活性成分[①丛悦,等.河南大学学报(医学版)2008年,第04期;②张盛，等.色谱2008,26(1):56.]，这种模式不能全面、综合地反映藜芦药材及其产品之间的质量差异，当然也不能全面评价藜芦药材及其产品的好坏。指纹图谱技术己成为国际公认的区别评价植物天然产物及其原料的最有效的手段[周玉新.中药指纹图谱研究技术.北京：化学工业出版社，2002]。IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术，也叫反门控去偶核磁共振碳谱（IGD13C NMR）偶联（coupling）指纹图谱技术，是在已研究多年的核磁共振氢谱（1H NMR）指纹图谱技术[赵天增，等.1HNMR指纹法鉴定植物中药.中草药2000，31(11)：868-870]的基础上联合其他技术（例如目前应用最广泛的高效液相（HPLC）指纹图谱技术[谢培山等.中药色谱指纹图谱.人民卫生出版社，2005]）提出的一种新的非单一手段综合指纹图谱技术。目前为止，并未见在鉴别藜芦药材方面运用IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术的报道。因此，若能对藜芦药材进行IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术研究与应用，不仅可以解决我国藜芦药材鉴别和评价的难题，也为加强藜芦药材内在成分研究的系统化与标准化提供了科学的保证。随着该技术在其他中药材及其提取物、植物源农药中的推广应用，该技术的重大科学价值必将日趋突出。
技术实现思路
为了解决现有技术的问题，本专利技术的目的在于提供一种鉴别藜芦药材的方法，该方法利用了IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术。为了实现上述目的，本专利技术提供的鉴别藜芦药材的方法，包括以下步骤：1）对藜芦药材进行提取，得到含有活性成分组的藜芦药材特征提取物；2）对所述藜芦药材特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到所述藜芦药材特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式（IGD核磁共振碳谱指纹图谱）测定出所述各活性成分相应的标准参照品的特征峰峰强度；3）通过定量分析手段测定得到藜芦药材中所述标准参照品的绝对含量；4）利用所述特征峰峰强度（各活性成分特征峰峰强度及相应标准参照品的特征峰峰强度）的比值和所述标准参照品的绝对含量，计算出藜芦药材中各活性成分的含量及该类活性成分的总含量，即活性成分组的含量。其中，采用具有获得清晰IGD核磁共振碳谱指纹图谱的提取工艺作为所述藜芦药材特征提取物的提取方式。其中，步骤1）中，藜芦药材特征提取物的制备方法，包括：称取藜芦药材，进行粉碎，用90～95%的乙醇回流提取2～3次，滤液合并后减压浓缩，回收溶剂至无醇味，即得藜芦药材特征提取物。进一步地，用乙醇回流提取，每次提取1～2小时。进一步地，所述藜芦药材与90～95%乙醇的质量体积比（g：mL）为1：（6～10）。进一步地，藜芦药材粉碎后过10～24目筛。其中，步骤2）中，在对藜芦药材特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测前，可以进行适当处理，具体方式包括：取藜芦药材特征提取物，分散到pH为1.0～3.5的酸水中，过滤后，用氯仿萃取，酸化层用氨水调pH至9～11，用氯仿萃取后，氯仿层回收溶剂至干。溶于CDCl3（氘代氯仿）中，之后即可以做IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测。其中，步骤2）中，藜芦药材特征提取物的特征峰为δC66.0～72.0的脂环连氧碳、δC168.0～176.0的酯羰基碳、δC206.0～208.0的酮羰基碳。其中，步骤2）中，根据特征峰峰强度的大小和位置，对藜芦药材特征提取物中若干个活性成分进行排序。进一步地，步骤2）中，根据特征峰峰强度的大小和位置，对藜芦药材特征提取物中的活性成分：Veratramine、epi-rubijervine、Jervine、SOLANIDINE、Veramarine、deacetylprotoveratrine B、cevadine、Isoverazine、Clyclopamine、Germidine、Isojurubidine、Dihydroleptinidine、germerine、zygacine、Pesudojervine、3-epi-Jervine、veramanine、etioline进行排序。其中，步骤2）中所述峰强度，可以采用峰高法、面积积分法或重量法计算。其中，步骤3）中所述标准参照品的绝对含量是指：用定量分析手段测定的藜芦药材中标准参照品的质量百分含量。其中，步骤3）中，所述定量分析手段为：高效液相（HPLC法）。进一步地，所述高效液相法的条件包括：流动相为乙腈/水。其中，所述标准参照品为Veratramine（藜芦胺碱）。本专利技术主要测定的是藜芦药材中生物碱类化合物的含量。其中，步骤4）中，计算各活性成分的含量的偶联公式为：Wn=W1MnhnM1h1;]]>其中：W1为步骤3）用定量分析手段测定的藜芦药材中某一活性成分对应的标准参照品的绝对含量；M1为所述某一活性成分对应的标准参照品的分子量/定量峰对应的碳个数；h1为由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的藜芦药材特征提取物中所述某一活性成分对应的标准参照品的特征峰峰强度；Wn为藜芦药材中某一活性成分的质量百分含量；Mn为某一活本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
2013.01.30 CN 201310036490.61.一种鉴别藜芦药材的方法，包括以下步骤：
1）对藜芦药材进行提取，得到含有活性成分组的藜芦药材特征
提取物；
2）对所述藜芦药材特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱
检测，根据指纹图谱得到所述藜芦药材特征提取物中若干个活性成分
特征峰峰强度；并用相同方式测定出所述各活性成分相应的标准参照
品的特征峰峰强度；
3）通过定量分析手段测定得到藜芦药材中所述标准参照品的绝
对含量；
4）利用各活性成分特征峰峰强度及相应标准参照品的特征峰峰
强度的比值和所述绝对含量，计算出藜芦药材中各活性成分的含量及
活性成分组的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用具有获得清
晰IGD核磁共振碳谱指纹图谱的提取工艺作为所述藜芦药材特征提
取物的提取方式。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）中，藜芦
药材特征提取物的制备方法，包括：称取藜芦药材，进行粉碎，用
90～95%的乙醇回流提取2～3次，滤液合并后减压浓缩，回收溶剂至无
醇味，即得藜芦药材特征提取物；
用乙醇回流提取，每次提取1～2小时；
所述藜芦药材与90～95%乙醇的质量体积比为1：（6～10）。
4.根据权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，步骤2）
中，在对藜芦药材特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测
前，进行处理的方式包括：取藜芦药材特征提取物，分散到pH为
1.0～3.5的酸水中，过滤后，用氯仿萃取，酸化层用氨水调pH至9～11，
用氯仿萃取后，氯仿层回收溶剂至干。
5.根据权利要求1～4任意一项所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵天增，张海艳，董建军，常霞，陈飞，陈玲，范毅，郭唯，魏悦，于立芹，景炳年，刘雨晴，
申请(专利权)人：河南省科高植物天然产物开发工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：