一种鉴别金银花药材或衍生品的方法技术

本发明专利技术涉及一种鉴别金银花药材或衍生品的方法，包括：对金银花药材或衍生品进行提取，得到含有活性成分组的金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物；对特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式测定出各活性成分相应标准参照品特征峰峰强度；通过定量分析手段测定得到标准参照品的绝对含量；利用特征峰峰强度的比值和标准参照品的绝对含量，计算出金银花药材或衍生品中各活性成分的含量及活性成分组的含量。本发明专利技术可以反映金银花中含有哪些金银花有机酸或/和环烯醚萜苷类化合物以及它们之间的比例，达到对金银花药材品种和质量鉴定的目的。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及，包括：对金银花药材或衍生品进行提取，得到含有活性成分组的金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物；对特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式测定出各活性成分相应标准参照品特征峰峰强度；通过定量分析手段测定得到标准参照品的绝对含量；利用特征峰峰强度的比值和标准参照品的绝对含量，计算出金银花药材或衍生品中各活性成分的含量及活性成分组的含量。本专利技术可以反映金银花中含有哪些金银花有机酸或/和环烯醚萜苷类化合物以及它们之间的比例，达到对金银花药材品种和质量鉴定的目的。【专利说明】
本专利技术属于天然药用植物的鉴别领域，具体地，涉及。
技术介绍
金银花(Loniceraejaponicae flos)是忍冬科植物忍冬(looonicera japonicaThunb.)的干燥花蕾或带初开的花，为我国著名的中药材。金银花归肺、心、胃经，药性寒，味甘，具有清热解毒、疏散风热的功效。其活性成分主要为有机酸、环烯醚萜苷和黄酮类化合物，具有抑菌抗病毒、解热消炎、保肝利胆、降血脂、止血、抗氧化作用等作用。定性鉴别上述某类活性成分或定量测定某种活性成分含量，已成为评价金银花及其制剂质量的重要方法。但这种针对单一成分进行定性、定量分析的质量检测模式不能有效控制中药材的内在质量，无法满足当前对于客观有效地评价和控制金银花及其制剂质量的迫切要求。指纹图谱技术是目前国际公认的控制中药或天然药物质量最有效的方法。人们凭借实用的指纹图谱不仅可确认该产品的真伪，同时能评价其质量。目前，金银花药材及其制剂的指纹图谱研究工作，集中在HPLC指纹图谱、毛细管电泳指纹图谱(HPCE法)、高效液相色谱_质谱联用法(LC-MS)等。其中主流方法HPLC指纹图谱由于受非色谱条件(如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等)影响较大和多组分定量需用多个标准品等等原因，重复性和可行性均存在许多局限性；HPCE法虽以其高效、快速、简便且柱不易受污染而优于HPLC法，但仍存在重现性较差、线性范围窄和灵敏度较低等不足；单一 LC-MS分析方法由于中药复方的复杂性和缺乏标准品的现状，MS还有离子化程度和基质干扰等问题，通常不足以对多种成分进行准确的结构定性。I⑶核磁共振碳谱偶联(I⑶13C NMR coupling)指纹图谱技术，也叫反门控去偶核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术，该技术是在已研究多年的核磁共振氢谱(1H NMR)指纹图谱技术的基础上联合其他技术(例如目前应用最广泛的高效液相(HPLC)指纹图谱技术)提出的一种新的非单一手段综合指纹图谱技术。目前为止，鉴别金银花药材或衍生品，利用IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术并未见相关报道和
技术实现思路
的披露。金银花的品质不在于某个单一成分，其疗效是多个成分协同配比的结果。因此，建立不仅能控制金银花活性成分，而且能控制这些活性成分之比例的IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱势在必行。金银花药材或衍生品核磁共振碳谱偶联指纹图谱的研究与应用，不仅可以解决我国金银花药材或衍生品鉴别和评价的难题，也为加强金银花药材或衍生品内在成分研究的系统化与标准化，实现与国际接轨提供了科学的保证。随着该技术在其他中药材或衍生品中的推广应用，该技术的重大科学价值必将日趋突出。
技术实现思路
为了解决现有技术的问题，本专利技术的目的在于提供，该方法利用了 IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术。为了实现上述目的，本专利技术提供的鉴别金银花药材或衍生品的方法，包括以下步骤:I)对金银花药材或衍生品进行提取，得到含有活性成分组(有机酸或/和环烯醚萜苷)的金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物；2)对所述金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到所述金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式(IGD核磁共振碳谱指纹图谱)测定出所述各活性成分相应标准参照品的特征峰峰强度；3)通过定量分析手段测定得到所述标准参照品的绝对含量；4)利用所述特征峰峰强度(各活性成分特征峰峰强度及相应标准参照品的特征峰峰强度)的比值和所述标准参照品的绝对含量，计算出金银花药材或衍生品中各有机酸或/和环烯醚萜苷类活性成分的含量及主要活性成分的总含量，即活性成分组的含量。其中，采用具有获得清晰IGD核磁共振碳谱指纹图谱的提取工艺作为所述金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物的提取方式。其中，步骤I)中，金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物的制备方法，包括:称取金银花药材或饮片进行粉碎，加入20?25%乙醇回流提取或超声提取2?3次，每次提取I?2小时，过滤后合并滤液，减压浓缩；取浓缩后的滤液，用大孔吸附树脂装柱，以水-乙醇体系冲柱，收集不同洗脱部分，减压蒸干，即得金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物。进一步地，所述金银花药材或饮片与20?25%乙醇的质量体积比为1:出?10)(g:mL)。进一步地，大孔吸附树脂的重量为浓缩后的滤液重量的I?2倍。进一步地，所述回流提取的温度为90?95°C，超声提取的温度为50?60°C。进一步地，金银花药材或饮片粉碎后过24?65目筛。进一步地，所述大孔吸附树脂的型号为HP-20、D-101、D-201、SP-825或SP-70。进一步地，所述大孔吸附树脂的径高比为8?15:1，优选10?12:1。其中，步骤2)中，对金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，溶解金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物的溶剂为氘代氯仿(⑶Cl3)、氘代甲醇(⑶3C(X:D3)或氘代二甲基亚砜(DMS0-d6)，优选氘代甲醇。金银花有机酸或/和环烯醚職苷特征提取物与相应溶剂的质量体积比为55:1?65:1 (mg:mL),优选60:1。除金银花饮片外，其他金银花衍生品，如金银花有机酸或/和环烯醚萜苷提取物可直接作为金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物，用上述方法进行鉴别。其中，步骤2)中，金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物中的活性成分特征峰为酯羰基吸收峰，其化学位移为S c164.0~167.0 (用氘代DMS0-d6溶解金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物时)或δ^68.0~170.0 (用氘代甲醇溶解金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物时)。其中，步骤2)中，根据特征峰峰强度的大小和位置，对所述金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物中若干个活性成分进行排序。进一步地，步骤2)中，根据特征峰峰强度的大小和位置，对所述金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物中的活性成分:绿原酸、绿原酸丁酯、Vanillicacid7-0- β -D- (6-0-benzoyl glucopyranoside)、绿原酸丁酯 +3,4-0-双咖啡酸基奎宁酸乙酯、阿魏酸、咖啡酸乙酯、α -莫诺苷+Secologanin dimethyl acetal、β_莫诺苷、猜牙菜苷、金吉苷进行排序。其中，步骤2)中，所述峰强度可以采用峰高法、面积积分法或重量法计算。其中，步骤3)中，所述定量分析手本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴别金银花药材或衍生品的方法，包括以下步骤：1）对金银花药材或衍生品进行提取，得到含有活性成分组的金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物；2）对所述金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物分别进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到所述金银花有机酸或/和环烯醚萜苷特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式测定出所述各活性成分相应标准参照品的特征峰峰强度；3）通过定量分析手段测定得到所述标准参照品的绝对含量；4）利用各活性成分特征峰峰强度及相应标准参照品的特征峰峰强度的比值和所述标准参照品的绝对含量，计算出金银花药材或衍生品中各有机酸或/和环烯醚萜苷类活性成分的含量及该两类活性成分组的含量。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：张海艳，赵天增，李坤威，张剑，董建军，陈玲，于立芹，范毅，郭唯，李晓，
申请(专利权)人：河南省科高植物天然产物开发工程技术有限公司，中国标准化研究院，
类型：发明
国别省市：河南;41