白藜芦醇评价抗氧自由基代谢的方法及其检测技术

本发明专利技术涉及白藜芦醇评价抗氧自由基代谢的方法及其检测。具体地说，本发明专利技术涉及白藜芦醇在制备评价抗氧自由基代谢的试剂中的用途；本发明专利技术还涉及白藜芦醇评价抗氧自由基代谢的方法；本发明专利技术还涉及对白藜芦醇进行质量控制的方法，该方法包括使用高效液相色谱法测定白藜芦醇供试品中白藜芦醇的含量，以及对供试品中作为杂质的白藜芦醇苷进行含量测定。本发明专利技术各个方面呈现本发明专利技术说明书所述有益的技术效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种可用于白藜芦醇抗氧化机制作用的评价方法。
技术介绍
衰老的自由基理论认为物质在人体内代谢和产生能量都需要氧参与，但是氧气在代谢过程中会产生各种自由基。氧自由基是由氧气分子衍生的一系列自由基。自由基是含有一个不成对电子的分子或原子团，如一氧化氮自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基和脂类自由基。由于自由基外层有一个不成对的电子，能量高，非常活跃，容易与其他物质发生反应。低浓度的氧自由基在体内具有重要的生物功能，但伴随氧自由基逐步积累，细胞膜则容易受到其攻击，甚至可能损伤细胞成分导致疾病的发生。由此，无论从心脑血管疾病到癌症，自由基和几种主要疾病特别是衰老和老年退行性疾病(如老年痴呆症和帕金森氏症等)都有密切关系。白藜芦醇，其英文名：Resveratrol，化学名：E-3,5,4’-三羟基二苯乙烯，其化学结构式是：白藜芦醇是一种非黄酮类的多酚化合物，其化学结构存在顺式和反式两种异构体，自然界中白藜芦醇主要以反式形式存在，研究表明反式异构体的生理活性强于顺式异构体。白藜芦醇含有三个酚羟基，特别是其中的4-对位羟基是其抗氧化能力的主要来源，其邻二羟基和乙烯基的存在则有助于形成共轭体系，稳定自由基。这样的分子结构使得其具有很强的还原性。白藜芦醇可以通过与自由基反应，来降低自由基活性，阻止自由基进一步链式反应，达到清除自由基的效果；同时，白藜芦醇能够保持谷胱甘肽的还原状态，从而抑制氧化自由基的生产，最终达到抗氧化的功能。因此，白藜芦醇能保护细胞和器官免受氧化侵害，阻止胆固醇在血管内的沉淀，免于斑点、皱纹、肌肤松弛的困扰，具有预防肿瘤，心血管疾病，抗衰老和抗菌的生理活性。尽管白藜芦醇具有抗氧自由基代谢的功能，然而本领域仍然期待有新的有效的抗氧自由基代谢的评价方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的有效的抗氧自由基代谢的评价方法。本专利技术的另一目的是提供一种对白藜芦醇进行质量检测的方法。已经出人意料地发现，通过本专利技术，可以使用白藜芦醇有效地评价抗氧自由基代谢。本专利技术基于此发现而得以完成。本专利技术第一方面提供了白藜芦醇在制备评价抗氧自由基代谢的试剂中的用途。本专利技术第二方面提供了白藜芦醇评价抗氧自由基代谢的方法。根据本专利技术第二方面的方法，该方法包括以下试验项目以评价白藜芦醇抗氧自由基代谢的效果：过氧化氢对大肠杆菌生长的影响、白藜芦醇对大肠杆菌生长的保护作用、发酵罐中的规范实验、氧自由基对大肠杆菌代谢流的影响、高浓度白藜芦醇对大肠杆菌生长的抑制。进一步的，本专利技术第三方面提供了一种对白藜芦醇进行质量控制的方法，该方法包括使用高效液相色谱法测定白藜芦醇供试品中白藜芦醇的含量，该方法包括如下操作：(1)中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进行测定；(2)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.05％酒石酸水溶液以体积比30：70为流动相，检测波长为306nm；取系统适用性试验溶液测定，理论板数按白藜芦醇峰计应不低于3000，白藜芦醇与其最接近的杂质峰之间的分离度应大于1.5，白藜芦醇与白藜芦醇苷峰之间的分离度应大于3.0；(3)溶液制备：取白藜芦醇供试品适量，加流动相溶解并稀释，制成每1ml溶液中含有白藜芦醇0.2mg的溶液，过滤，作为供试品溶液(即，200μg/ml)；精密量取供试品溶液1ml置于100ml量瓶中，用流动相稀释刻度，摇匀，制成含白藜芦醇浓度为2μg/ml的溶液，作为对照溶液(即，2μg/ml)；精密称取白藜芦醇对照品、白藜芦醇苷对照品适量，用流动相溶解并制成两种物质浓度均为分别为200μg/ml和2μg/ml的溶液，作为系统适用性试验溶液(即，200μg/ml+2μg/ml)；精密称取白藜芦醇对照品适量，用流动相溶解并制成每1ml溶液中含有白藜芦醇0.2mg的溶液，过滤，作为对照品溶液；(4)测定：精密量取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，确定白藜芦醇主成分的保留时间，并读取白藜芦醇峰的峰面积；精密量取系统适用性试验溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算理论板数和各峰之间的分离度；精密量取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至白藜芦醇苷保留时间的2倍，读取供试品溶液色谱图中主成峰峰面积和各杂质的峰面积；(5)结果计算：根据供试品溶液色谱图中主成分峰面积以及对照品溶液色谱图中主成分峰面积和对照品溶液主成分浓度，计算供试品中白藜芦醇的百分含量。根据本专利技术第三方面的方法，其中还包括使用所述高效液相色谱法测定白藜芦醇供试品中杂质白藜芦醇苷的含量。具体地说，根据记录的各色谱图，当供试品中检测到存在白藜芦醇苷时，以对照溶液色谱图中主成份峰面积为1.0％，计算供试品溶液色谱图中白藜芦醇苷相对于白藜芦醇的百分含量，即得到供试品中的白藜芦醇苷的含量(即，如果对照溶液主峰面积为100，供试品溶液色谱图中杂质白藜芦醇苷的峰面积为115％，则白藜芦醇苷相对于白藜芦醇的百分含量，简称白藜芦醇苷含量为1.15％；供试品溶液色谱图中杂质白藜芦醇苷的峰面积为87％，则白藜芦醇苷含量为0.87％)。根据本专利技术第三方面的方法，其中所述色谱柱的规格是：柱长15～30cm、柱内径4.6mm、填料粒径5μm。根据本专利技术第三方面的方法，其中所述色谱柱的规格是：柱长20～30cm、柱内径4.6mm、填料粒径5μm。根据本专利技术第三方面的方法，其中所述色谱柱的规格是：柱长25cm、柱内径4.6mm、填料粒径5μm。在本专利技术上述方法的步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的实例例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本专利技术全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。本专利技术的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本专利技术任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本专利技术作进一步的描述。本专利技术所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本专利技术不一致时，以本专利技术的表述为准。此外，本专利技术使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本专利技术仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本专利技术所表述的含义为准。红葡萄酒含有多种活性生物分子，具有抗衰老，抗氧化，防肿瘤和抑菌的生理作用。这些分子中，白黎芦醇由于具有最为显著的抗氧化作用而受到人们的关注。已有美国部分厂家将其作为保健品进行销售。然而要想白黎芦醇真正有效，安全地，广泛地在药品，食品领域发挥作用，必须清楚地了解其抗氧化的体内过程和分子机制。为此，我们查阅相关资料，了解衰老的氧自由基理论，认识了白藜芦醇的分子结构与抗氧化能力。然后设计实验重现了氧自由基对大肠杆菌的生长抑制，以及白藜芦醇对这种抑制的缓解与保护。通过一种崭新的实验检测方法，我们观察到大肠杆菌的生长抑制与恢复都是由其碳中心代谢系统状态改变导致的。表明白藜芦醇对大肠杆菌的保护作用是通过维持代谢系统流量稳定这一机制来实现的。本文档来自技高网...

【技术保护点】
白藜芦醇在制备评价抗氧自由基代谢的试剂中的用途。

【技术特征摘要】
1.白藜芦醇在制备评价抗氧自由基代谢的试剂中的用途。2.白藜芦醇评价抗氧自由基代谢的方法。3.根据权利要求2的方法，该方法包括以下试验项目以评价白藜芦醇抗氧自由基代谢的效果：过氧化氢对大肠杆菌生长的影响、白藜芦醇对大肠杆菌生长的保护作用、发酵罐中的规范实验、氧自由基对大肠杆菌代谢流的影响、高浓度白藜芦醇对大肠杆菌生长的抑制。4.对白藜芦醇进行质量控制的方法，该方法包括使用高效液相色谱法测定白藜芦醇供试品中白藜芦醇的含量，该方法包括如下操作：(1)中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进行测定；(2)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.05％酒石酸水溶液以体积比30：70为流动相，检测波长为306nm；取系统适用性试验溶液测定，理论板数按白藜芦醇峰计应不低于3000，白藜芦醇与其最接近的杂质峰之间的分离度应大于1.5，白藜芦醇与白藜芦醇苷峰之间的分离度应大于3.0；(3)溶液制备：取白藜芦醇供试品适量，加流动相溶解并稀释，制成每1ml溶液中含有白藜芦醇0.2mg的溶液，过滤，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml置于100ml量瓶中，用流动相稀释刻度，摇匀，制成含白藜芦醇浓度为2μg/ml的溶液，作为对照溶液；精密称取白藜芦醇对照品、白藜芦醇苷对照品适量，用流动相溶解并制成两种物质浓度均为分别为200μg/ml和2μg/ml的溶液，作为系统适用性试验溶液；精密称取白藜芦醇对...

【专利技术属性】
技术研发人员：林悦安，鄂芳，申铁，
申请(专利权)人：林悦安，鄂芳，申铁，
类型：发明
国别省市：贵州;52