一种白藜芦醇‑二十碳五烯酸酯的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种白藜芦醇‑二十碳五烯酸酯的制备方法，包括步骤：向白藜芦醇中加入甲基叔丁基醚，加入二十碳五烯酸，取脂肪酶加入到醇酸混合溶液中，充氮气、密封，振荡反应，冰水冷却，过滤除脂肪酶，旋转蒸发除甲基叔丁基醚，得到粗产物；粗产物溶解于乙醇中，加入碳酸钠、水，氮气保护，回流皂化，所得的皂化溶液用正己烷萃取，然后旋转蒸发，得到羟基酪醇‑二十二碳六烯酸酯。本发明专利技术方法合成白藜芦醇衍生物，在酶的催化下，将白藜芦醇与二十碳五烯酸反应制备白藜芦醇酯，可以减弱白藜芦醇在机体内的生物转化和氧化降解速率，进而增强生物利用度。

【技术实现步骤摘要】
一种白藜芦醇-二十碳五烯酸酯的制备方法
本专利技术涉及白藜芦醇衍生物的制备领域，更具体地说，涉及一种白藜芦醇-二十碳五烯酸酯的制备方法。
技术介绍
白藜芦醇(3,5,4’-三羟基二苯乙烯)是一种天然非黄酮类多酚化合物，主要来源于虎杖和葡萄。相关研究表明，白藜芦醇是一种重要的生物活性物质，具有抗氧化损伤、抗肿瘤、保护心脑血管、抗衰老、免疫调节等广泛的生理作用和药理活性，因此受到世界各地科学家们的深入关注，被大量应用于医药和保健品等各个行业领域。尽管白藜芦醇对人体有许多健康有益作用，但其经口服进入机体后，快速进入肝脏发生Ⅱ相代谢，生物利用度低，这影响了白藜芦醇本身的活性效应。
技术实现思路
本专利技术的目的在于合成一种白藜芦醇衍生物——白藜芦醇-二十碳五烯酸酯，该物质可以减弱白藜芦醇在机体内的生物转化和氧化降解速率，进而增强生物利用度；同时，保证合成方法反应条件温和、制备及纯化过程简单、终产物纯度高。为了达到上述目的，本专利技术提供了一种白藜芦醇-二十碳五烯酸酯的制备方法，包括如下步骤：S1、向白藜芦醇中加入甲基叔丁基醚，充分混匀，得到白藜芦醇溶液；所述甲基叔丁基醚与白藜芦醇体积摩尔比为1:0.026～0.044(L/mol)；S2、取二十碳五烯酸(EPA)加入到步骤S1所得的白藜芦醇溶液中，充分混匀，得到醇酸混合溶液；所述二十碳五烯酸与白藜芦醇摩尔比为6～12:1；S3、取脂肪酶EC3.1.1.3加入到步骤S2所得的醇酸混合溶液中，充氮气、密封，得到脂肪酶溶液；所述脂肪酶EC3.1.1.3≥5000U/g，所述脂肪酶EC3.1.1.3与白藜芦醇质量摩尔比为100～150:1(g/mol)；优选方式下，所述脂肪酶EC3.1.1.3为Novozyme435，来自南极假丝酵母。S4、将步骤S3所得的脂肪酶溶液置于35～50℃、150～200rpm环境下振荡反应48～96h后，置于冰水浴中冷却，终止酶解，得酶反应溶液；S5、将步骤S4所得的酶反应溶液过滤，除去脂肪酶，再于35～45℃、相对真空度-0.05～-0.08Mpa条件下旋转蒸发，除去甲基叔丁基醚，得到粗产物；S6、将体积浓度为95％的乙醇加入到步骤S5所得的粗产物中，加入碳酸钠和水，氮气保护，40～50℃回流皂化20～30min，得皂化溶液；所述体积浓度为95％的乙醇与粗产物的体积质量比为10～20:1(mL/g)，所述碳酸钠与粗产物质量比为0.8～1.2:1，所述水与粗产物体积质量比为4～6:1(mL/g)；S7、将步骤S6所得的皂化溶液用正己烷萃取1～3次，萃取所得正己烷层用无水硫酸钠除水后，于35～45℃、相对真空度-0.05～-0.08Mpa条件下旋转蒸发，除去正己烷，得到白藜芦醇-二十碳五烯酸酯；每次萃取所用正己烷的体积与步骤S5中所用体积浓度为95％的乙醇的体积的比为2～6:1。本专利技术的技术创新在于：1、本专利技术反应条件温和，耗时较短，产物酯化率高，制备的白藜芦醇-EPA酯不需要采用柱层析等方法纯化，终产物的纯度高。2、本专利技术方法合成白藜芦醇衍生物，在酶的催化下，将白藜芦醇与二十碳五烯酸(eicosapentaenoicacid，EPA)反应制备白藜芦醇酯，可以减弱白藜芦醇在机体内的生物转化和氧化降解速率，进而增强生物利用度；同时，白藜芦醇可以抗氧化损伤等，而EPA也具有减缓冠状动脉心脏病、高血压和炎症等功能，通过合成的白藜芦醇-EPA酯，可同时发挥白藜芦醇和EPA在健康有益方面的作用。具体实施方式下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1S1、取0.1mol白藜芦醇于可密封的玻璃容器中，缓慢加入甲基叔丁基醚，甲基叔丁基醚:白藜芦醇控制在1:0.026(L/mol)，充分混匀；S2、取0.6molEPA加入S1所得溶液中，充分混匀；S3、取脂肪酶(Novozyme435，≥5000U/g，EC3.1.1.3，来自南极假丝酵母)加入S2所得溶液中，酶:白藜芦醇控制在100:1(g/mol)，然后向玻璃容器充氮气密封；S4、将玻璃容器置于恒温水浴振荡器中进行反应，反应温度为40℃，振荡速度为150rpm，反应时间为48h，反应完成后，取出置于冰水浴中冷却，终止酶解；S5、将S4所得的溶液经0.22μm有机滤膜过滤，除去脂肪酶，再于温度35℃、相对真空度-0.08Mpa条件下旋转蒸发，除去甲基叔丁基醚，得到粗产物；S6、在S5所得粗产物中加入体积浓度为95％乙醇，体积浓度为95％乙醇：粗产物控制在10:1(mL/g)；加入碳酸钠，碳酸钠：粗产物控制在0.8:1(g/g)；加入水，水：粗产物控制在4:1(mL/g)，将上述反应混合物在氮气流保护下回流皂化30min，反应温度控制在40℃；S7、将S6所得混合物，转移至分液漏斗中，用正己烷萃取2次，每次萃取用正己烷:S5中95％乙醇控制在2:1(mL/mL)，萃取所得正己烷层用无水硫酸钠除水，然后于35℃、相对真空度-0.08Mpa条件下旋转蒸发，除去正己烷，得到白藜芦醇-EPA酯，其质量为19.2771g。通过上述步骤，白藜芦醇的酯化率为37.6％。采用高效液相-紫外检测器(HPLC-UV)的检测，白藜芦醇-EPA酯其的纯度为80.3％。实施例2S1、取0.1mol白藜芦醇于可密封的玻璃容器中，缓慢加入甲基叔丁基醚，甲基叔丁基醚:白藜芦醇控制在1:0.044(L/mol)，充分混匀；S2、取1.2molEPA加入S1所得溶液中，充分混匀；S3、取脂肪酶(Novozyme435，≥5000U/g，EC3.1.1.3，来自南极假丝酵母)加入S2所得溶液中，酶:白藜芦醇控制在150:1(g/mol)，然后向玻璃容器充氮气密封；S4、将玻璃容器置于恒温水浴振荡器中进行反应，反应温度为40℃，振荡速度为150rpm，反应时间为48h，反应完成后，取出置于冰水浴中冷却，终止酶解；S5、将S4所得的溶液经0.22μm有机滤膜过滤，除去脂肪酶，再于温度35℃、相对真空度-0.08Mpa条件下旋转蒸发，除去甲基叔丁基醚，得到粗产物；S6、在S5所得粗产物中加入95％乙醇，95％乙醇：粗产物控制在20:1(mL/g)；加入碳酸钠，碳酸钠：粗产物控制在1.2:1(g/g)；加入水，水：粗产物控制在6:1(mL/g)，将上述反应混合物在氮气流保护下回流皂化30min，反应温度控制在40℃；S7、将S6所得混合物，转移至分液漏斗中，用正己烷萃取3次，每次萃取用正己烷:S5中95％乙醇控制在6:1(mL/mL)。萃取所得正己烷层用无水硫酸钠除水，然后于温度35℃、相对真空度-0.08Mpa条件下旋转蒸发，除去正己烷，得到白藜芦醇-EPA酯，其质量为20.2000g。通过上述步骤，白藜芦醇的酯化率为39.4％。采用高效液相-紫外检测器(HPLC-UV)的检测，白藜芦醇-EPA酯的纯度为84.7％。实施例3S1、取0.1mol白藜芦醇于可密封的玻璃容器中，缓慢加入甲基叔丁基醚，甲基叔丁基醚:白藜芦醇控制在1:0.03(L/mol)，充分混匀；S2、取1.0molEPA加入S1所得溶液中，充分混匀；S3、取脂肪酶(Novozyme435，≥5000U/g，EC3.1.1.3，来自南本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白藜芦醇‑二十碳五烯酸酯的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、向白藜芦醇中加入甲基叔丁基醚，充分混匀，得到白藜芦醇溶液；所述甲基叔丁基醚与白藜芦醇体积摩尔比为1:0.026～0.044(L/mol)；S2、取二十碳五烯酸加入到步骤S1所得的白藜芦醇溶液中，充分混匀，得到醇酸混合溶液；所述二十碳五烯酸与白藜芦醇摩尔比为6～12:1；S3、取脂肪酶EC 3.1.1.3加入到步骤S2所得的醇酸混合溶液中，充氮气、密封，得到脂肪酶溶液；所述脂肪酶EC 3.1.1.3≥5000U/g，所述脂肪酶EC 3.1.1.3与白藜芦醇质量摩尔比为100～150:1(g/mol)；S4、将步骤S3所得的脂肪酶溶液置于35～50℃、150～200rpm环境下振荡反应48～96h后，置于冰水浴中冷却，终止酶解，得酶反应溶液；S5、将步骤S4所得的酶反应溶液过滤，除去脂肪酶，再于35～45℃、相对真空度‑0.05～‑0.08Mpa条件下旋转蒸发，除去甲基叔丁基醚，得到粗产物；S6、将体积浓度为95％的乙醇加入到步骤S5所得的粗产物中，加入碳酸钠和水，氮气保护，40～50℃回流皂化20～30min，得皂化溶液；所述体积浓度为95％的乙醇与粗产物的体积质量比为10～20:1(mL/g)，所述碳酸钠与粗产物质量比为0.8～1.2:1，所述水与粗产物体积质量比为4～6:1(mL/g)；S7、将步骤S6所得的皂化溶液用正己烷萃取1～3次，萃取所得正己烷层用无水硫酸钠除水后，于35～45℃、相对真空度‑0.05～‑0.08Mpa条件下旋转蒸发，除去正己烷，得到白藜芦醇‑二十碳五烯酸酯；每次萃取所用正己烷的体积与步骤S5中所用体积浓度为95％的乙醇的体积的比为2～6:1。...

【技术特征摘要】
1.一种白藜芦醇-二十碳五烯酸酯的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、向白藜芦醇中加入甲基叔丁基醚，充分混匀，得到白藜芦醇溶液；所述甲基叔丁基醚与白藜芦醇体积摩尔比为1:0.026～0.044(L/mol)；S2、取二十碳五烯酸加入到步骤S1所得的白藜芦醇溶液中，充分混匀，得到醇酸混合溶液；所述二十碳五烯酸与白藜芦醇摩尔比为6～12:1；S3、取脂肪酶EC3.1.1.3加入到步骤S2所得的醇酸混合溶液中，充氮气、密封，得到脂肪酶溶液；所述脂肪酶EC3.1.1.3≥5000U/g，所述脂肪酶EC3.1.1.3与白藜芦醇质量摩尔比为100～150:1(g/mol)；S4、将步骤S3所得的脂肪酶溶液置于35～50℃、150～200rpm环境下振荡反应48～96h后，置于冰水浴中冷却，终止酶解，得酶反应溶液；S5、将步骤S4所得的酶反应溶液过滤，除去脂肪酶，再于35～45℃、相对真空度-0.05～...

【专利技术属性】
技术研发人员：周大勇，胡晓沛，朱蓓薇，阴法文，赵琪，张建润，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21