本发明专利技术提供新的核酸提取用器具及使用其的核酸提取方法。本发明专利技术的核酸提取器具具备管，所述管在其内部依次具备：由第1油构成的第1管芯、由与油相分离的用于清洗结合了核酸的核酸结合性固相载体的第1清洗液构成的第2管芯、由第2油构成的第3管芯、由与油相分离的用于进行逆转录反应的逆转录反应液构成的第4管芯、由第3油构成的第5管芯、由与油相分离的用于使上述核酸从结合了核酸的核酸结合性固相载体溶出的溶出液构成的第6管芯、由第4油构成的第7管芯。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸提取用器具、使用其的核酸提取方法、核酸提取用试剂盒以及核酸提取用装置。
技术介绍
由Boom等报告了使用二氧化硅粒子等核酸结合性固相载体和促溶剂，从生物体材料中更简便地提取核酸的方法（参照非专利文献1）。包括该Boom等的方法，使用二氧化硅等核酸结合性固相载体和促溶剂使核酸吸附于载体并进行提取的方法主要由以下3个工序构成，即，（1）在促溶剂存在下，使核酸吸附于核酸结合性固相体的工序（吸附工序）、（2）为了除去非特异性结合的夹杂物以及促溶剂，用清洗液清洗吸附有核酸的载体的工序（清洗工序）、以及（3）用水或者低盐浓度缓冲液使核酸从载体中溶出的工序（溶出工序）。 现有技术文献 非专利文献 非专利文献1：J.Clin.Microbiol.,vol.28No.3,p.495-503（1990）
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供新的核酸提取用器具、使用其的核酸提取方法、核酸提取用试剂盒以及核酸提取用装置。 本专利技术的一个实施方式的核酸提取用器具，其具备管，所述管在其内部依次具备由第1油构成的第1管芯（プラグ）、由与油相分离的用于清洗结合了核酸的核酸结合性固相载体的第1清洗液构成的第2管芯、由第2油构成的第3管芯、由与油相分离的用于进行逆转录反应的逆转录反应液构成的第4管芯、由第3油构成的第5管芯、由与油相分离的 用于使上述核酸从结合了核酸的核酸结合性固相载体中溶出的溶出液构成的第6管芯、和由第4油构成的第7管芯。上述管还可以在第5管芯与第6管芯之间，从第5管芯侧依次具备由与油相分离的用于清洗结合了核酸的核酸结合性固相载体的第2清洗液构成的清洗液构成的第10管芯、以及由油构成的第11管芯。上述溶出液可以含有DNA聚合酶、dNTP以及DNA聚合酶用引物。上述管的第7管芯侧的端部是开放的开放端，可具有密封上述开放端的能够装卸的栓。也可以具备用于向上述管导入上述核酸结合性固相载体的罐。上述罐和上述管可装卸。上述罐可以具有用于溶解提取核酸的试样的溶解液。 本专利技术的又一实施方式的核酸提取方法，包括以下工序，即，将在罐中含有上述溶解液的核酸提取用器具以上述管的纵向与重力方向平行的方式进行设置的工序，将用于提取RNA的试样投入上述罐中的工序，对上述管从第1管芯向第4管芯的方向施加磁场，使上述磁性体从上述罐内移动至第4管芯的工序，在上述第4管芯的上述逆转录反应液中对上述RNA进行逆转录而合成cDNA的工序，在上述第6管芯的上述溶出液中使上述cDNA从上述核酸结合性固相载体中游离的工序。 本专利技术的另一实施方式的核酸提取用试剂盒，具有上述任一项记载的核酸提取用器具、具有磁性体的核酸结合性固相载体、和用于溶解提取核酸的试样的溶解液。 本专利技术的另一实施方式的核酸提取用装置，具备具有管的核酸提取用器具和用于对上述管施加磁场的磁场施加器具，所述管在其内部依次具备：由第1油构成的第1管芯、由与油相分离的用于清洗结合了核酸的核酸结合性固相载体的第1清洗液构成的第2管芯、由第2油构成的第3管芯、由与油相分离的用于进行逆转录反应的逆转录反应液构成的第4管芯、由第3油构成的第5管芯、由与油相分离的用于使上述核酸从结合了核酸的核酸结合性固相载体中溶出的溶出液构成的第6管芯、由第4油构成的第7管芯。还可以具备用于沿上述管的纵向使上述管与上述磁场施加器具的位置关系相对变化的磁场施加器具移动装置或者核酸提取用器具移动装置。还可以具备设置在加热上述管的第4管芯和/或第6管芯的位置的加热装置。上述管可以在第5管芯与第6管芯之间从第5管芯侧依次具备：由与油相分离的用于清洗结合了核酸的核酸 结合性固相载体的第2清洗液构成的第10管芯，以及由油构成的第11管芯。上述溶出液可以含有DNA聚合酶、dNTP以及DNA聚合酶用引物。上述管的第7管芯侧的端部是开放的开放端，可以具有密封上述开放端的能够装卸的栓。还可以具备用于向上述管导入上述核酸结合性固相载体的罐。上述罐可以具有用于溶解提取核酸的试样的溶解液。 根据本专利技术，能够提供新的核酸提取用器具、使用其的核酸提取方法、核酸提取用试剂盒以及核酸提取用装置。 附图说明图1是本专利技术的一个实施例的核酸提取用器具的构成的示意图。 图2是本专利技术的一个实施例的核酸提取用器具的构成的示意图。 图3是本专利技术的一个实施例的核酸提取用装置的构成的示意图。 图4是表示本专利技术的一个实施例的核酸提取方法中矩形磁铁的使用方法的图。 图5是表示在本专利技术的一个实施例中，对于1步溶出用毛细管（1-step）和2步溶出毛细管（2-step），比较使用各自得到的含有核酸的溶出液而进行PCR时的检测灵敏度的经时变化的图。 图6是表示在本专利技术的一个实施例中，对于1步溶出用毛细管（1-step）和2步溶出毛细管（2-step），比较使用各自得到的含有核酸的溶出液而进行PCR时的检测灵敏度的图。 图7是表示在本专利技术的一个实施例的2步溶出毛细管（2-step）中，在逆转录反应液管芯后，对于不进一步设置由清洗液构成的管芯和设置管芯的情况而言，比较使用各自得到的含有核酸的溶出液而进行PCR时的检测灵敏度的图。 具体实施方式实施方式及实施例没有特别说明的情况下，使用M.R.Green&J.Sambrook（Ed.）,Molecular cloning,a laboratory manual（4th edition）,Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,New York （2012）;F.M.Ausubel,R.Brent,R.E.Kingston,D.D.Moore,J.G.Seidman,J.A.Smith,K.Struhl（Ed.）,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons Ltd.等标准的方案集中记载的方法，或者使用对其进行修饰或改变的方法。另外，使用市售的试剂盒、测定装置时，没有特别说明的情况下，可使用随其添附的方案。 应予说明，根据本说明书的记载，本领域技术人员可明确本专利技术的目的、特征、优点以及其想法，本领域技术人员可根据本说明书的记载容易地再现本专利技术。以下记载的专利技术的实施方式以及具体的实施例等显示本专利技术优选的实施方式，为了例示或者说明而示出，本专利技术并不限定于此。对于本领域技术人员而言可知在本说明书中公开的本专利技术的意图和范围内，根据本说明书的记载，可进行各种改变和修饰。 核酸提取用器具 （1）罐 本专利技术的核酸提取用器具具备用于向单个或者多个管导入核酸结合性固相载体的罐。 罐可在内部收容液体且具有从外部向内部导入物质的开口。罐中的开口的位置没有特别限定，可以具有多个开口。开口可以具有能够装卸的盖。 罐的内容积没有特别限定，例如可设为0.1mL～100mL。罐的材质没有特别限定，例如，可为玻璃、塑料等树脂、金属等。特别是如果选择透明的玻璃、树脂来作为罐的材质，则能够从罐的外部观察内部本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
2012.10.26 JP 2012-237068;2012.10.26 JP 2012-237061.一种核酸提取用器具，具备管，所述管在其内部依次具备：
由第1油构成的第1管芯，
由与油相分离、用于清洗结合了核酸的核酸结合性固相载体的第1
清洗液构成的第2管芯，
由第2油构成的第3管芯，
由与油相分离、用于进行逆转录反应的逆转录反应液构成的第4管
芯，
由第3油构成的第5管芯，
由与油相分离、用于使所述核酸从结合了核酸的核酸结合性固相载
体溶出的溶出液构成的第6管芯，和
由第4油构成的第7管芯。
2.根据权利要求1所述的核酸提取用器具，其中，所述管在第5
管芯和第6管芯之间、从第5管芯侧依次具备：
由与油相分离、用于清洗结合了核酸的核酸结合性固相载体的第2
清洗液构成的第10管芯，以及
由油构成的第11管芯。
3.根据权利要求1或2所述的核酸提取用器具，其中，所述溶出
液含有DNA聚合酶、dNTP以及DNA聚合酶用引物。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的核酸提取用器具，其中，所
述管的第7管芯侧的端部是开放的开放端，具有密封所述开放端的能够
装卸的栓。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸提取用器具，其中，具
备用于向所述管导入所述核酸结合性固相载体的罐。
6.根据权利要求5所述的核酸提取用器具，其中，所述罐和所述
管可装卸。
7.根据权利要求5或6所述的核酸提取用器具，其特征在于，所
述罐具有用于溶解提取核酸的试样的溶解液。
8.一种核酸提取方法，包括以下工序：
将权利要求7所述的核酸提取用器具以所述管的纵向与重力方向平
行的方式设置的工序，
将用于提取RNA的试样投入所述罐的工序，
对所述管从第1管芯向第4管芯的方向施加磁场，使磁性体从所述
罐内移动至第4管芯的工序，
在所述第4管芯的所述逆转录反应液中对所述RNA进行逆转录，
合成cDNA的工序，和
在所述第6管芯的所述溶出液中使所述cDNA从所述核酸结合性固
相载...
【专利技术属性】
技术研发人员：齐藤祐司，高城富美男，
申请(专利权)人：精工爱普生株式会社，
类型：发明
国别省市：
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