祖代B细胞刺激因子制造技术

本文描述了一种祖代Ｂ细胞刺激因子，它促进前－Ｂ细胞的形成。本文还公开了该因子的生产和纯化方法以及编码该因子的ＤＮＡ的序列。该因子可以用于治疗造血性疾病和用于骨髓移植。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新的因子，祖代B细胞刺激因子，它具有促进造血祖细胞增殖和分化的活性。本专利技术还涉及编码这种因子的DNA序列、其多肽片段和类似物，以及用该因子治疗造血系统疾病的方法和组合物。造血生长因子是能够维持基本的和可诱导的血细胞生成的主要调节分子(Brachetal.Acta.Haematol.86，128(1991))。造血生长因子(集落刺激因子和白细胞介素)、生长因子协同因子和生长因子释放因子控制着造血干细胞和谱系定型祖细胞的增殖、分化和功能活性。尽管在集落刺激因子之间存在谱系活性和协同作用的某些重叠，但每种集落刺激因子对于它们所作用的骨髓细胞的谱系各不相同。在许多情况下，生长因子参与特定造血细胞类型的成熟过程是公知的，比如红细胞生成素参与生成红细胞和粒细胞集落刺激因子以生成中性白细胞。不过，在造血细胞发育过程中有几个期，其中刺激因子的识别不完整或完全缺失的。这结于导致早期造血祖代细胞的增殖和发育那些情况尤为正确。造血祖细胞从多能性逐渐发育成单能性的、定型祖细胞，在此过程中，它们失去了其自我更新能力(OlofssonAca.Oncol.30，889(1991))。这一发育过程取决于特定造血生长因子之间的相与作用。它们通过结合到干细胞的表面受体上刺激它们进入下一步的分化。白细胞介素3(IL-3)对于未分化的祖细胞基本上是一种增殖刺激因子(Pontingetal.GrowthFactors4，165(1991))。粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)在多能干细胞存活、增殖和分化成特定成熟阶段的干细胞过程中也起着主要作用。该阶段的单能干细胞需要红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和IL-5的刺激进行增殖并分别发育成它们的终期产物，红细胞、中性白细胞、单核细胞和嗜酸性细胞。其他的细胞激动素如IL-1β、IL-4和IL-6在这些过程中完成作为辅助因子的重要功能(Araietal.Ann.Rev.Biochem.59，783(1990))。干细胞因子(CSF)，也称作C-药盒的配体，最近被鉴定为一种能够刺激祖细胞增殖的细胞激动素(PCT申请号No.WO91/05795)。SCF能够与多种广泛的其他造血生长因子起协同作用，以引起定型祖细胞的增殖和分化(Migliaccioetal.J.CellPhysiol.148，503(1991))。正常鼠骨髓细胞的克隆培养中，G-CSF、GM-CSF或IL-3与SCF联合可诱导平均细胞含量增加25倍，而它们的平均祖细胞含量增加6倍(MetcalfProc.Natl.Acad.Sci.USA88，11310(1991))。定型为淋巴谱系的祖细胞最终发育成B或T淋巴细胞。成熟的B细胞通过产生在血液中循环并结合外来抗原的抗体而介导体液抗体应答。抗原抗体的结合通过吞噬作用或激活补体而导致抗原破坏。产生抗体的B细胞是人体免疫应答的一个主要部分。生长因子参与造血祖细胞的增殖和分化以发育成为成熟B细胞，这对于保持B细胞含量是必需的。鉴别这些因子对于制定调节B细胞水平治疗方案，尤其是在免疫缺陷病人当中尤为重要。研究领域之一是鉴别在B细胞发育早期起作用以刺激产生B细胞祖代如前-B细胞的因子。前-B细胞的特征是早期的祖细胞，它能在其细胞浆中表达免疫蛋白的μ重链，而不能表达细胞浆轻链或表达免疫球蛋白。美国专利No.4，965，195公开了白细胞介素-7(IL-7)能够刺激鼠骨髓来源的前-B细胞的增殖。McNiece等人(J.Immunol.146，3785(1991))指出SCF与IL-7相互协同作用刺激B谱系细胞的增殖。不过，Billips等人(Blood79，1185(1992))的工作指出在B细胞形成过程中需要其他的因子。Billips等人在文献中指出由B220-、Ig-祖细胞形成前-B细胞以及免疫球蛋白μ重链的表达特异性地依赖于S17基质细胞的存在，而且用IL-7、SCF或IL-7和SCF共同刺激都不能再产生上述过程。另外，还描述了(PCT申请号No.WO89/06541)能单独刺激B祖细胞分化成前-B细胞的基质来源的淋巴细胞生成因子-1(SDLF-1)。因此本专利技术的一个目的是鉴别与促进造血祖细胞，尤其是淋巴祖细胞，增殖和分化成B谱系定型细胞如前-B细胞有关的因子。本专利技术的因子可以用作体液抗体应答的调节剂，能够刺激B细胞祖代的这种因子的治疗效果使得人们希望鉴别和表达编码所说因子的基因。本专利技术提供了一种能够刺激造血祖细胞，特别是祖代B细胞的增殖和分化的新型因子。该因子在本文称之为祖代B细胞刺激因子，或PBSF。PBSF可以具有如SEQIDNO.1中所述的氨基酸序列。本专利技术还包括具有刺激祖代B细胞增殖和分化能力的PBSF的等位基因变异体，片段和类似物。PBSF可以从天然来源如哺乳动物组织或细胞系纯化得到，或者是外源DNA序列的原核生物或真核生物表达产物，即通过重组方法产生。本专利技术包括编码生物活性PBSF的DNA序列。这些DNA序列包括SEQIDNO.1中的序列以及具有生物活性的等位基因变异体、片段和类似物。本专利技术还提供了含有这些DNA序列的载体以及由这些载体转化或转染的宿主细胞。还包括了该因子的产生方法，该方法的步骤是在合适的营养条件下，使转化或转染的宿主细胞以允许多肽表达的方式生长，并分离该因子。在干细胞因子和白细胞介素-7存在下，PBSF表现出能刺激定型为淋巴谱系的造血祖细胞，如B细胞祖代的增殖和分化。本专利技术还涉及能够特异性结合PBSF，结合含PBSF的融合多肽，或结合含有PBSF部分氨基酸序列之肽片段的抗体。本专利技术还提供了含有该因子的药物组合物以及用该因子治疗造血性疾病的方法。附图说明图1表示编码GM-CSF、IL-1β、IL-2、IL-3和IL-6的信号肽酶切割位点的核苷酸序列。还表示了根据信号肽酶切割位点设计的，并且用于在基因文库中筛选细胞激动素的简并寡聚核苷酸探针的序列。图2表示PBSF的核苷酸及推断的氨基酸序列。图3表示一致性干扰素-PBSF融合蛋白在大肠杆菌中的表达。泳道1，分子量标志;泳道2，以错误取向插入的一致性干扰素-PBSF融合基因;泳道3，一致性干扰素基因;泳道4、5和6，正确取向的一致干扰素-PBSF融合基因;泳道7，分子量标志。图4表示在PA317细胞中表达并经被固定的抗PBSF抗体亲和纯化的PBSF的SDS-PAGE。图5A-C表示PBSF在一种前-B细胞集落形成试验中的活性。PBSF来源于转染的COS细胞的条件培养基(A)，转染的PA317细胞条件培养基(B)或来源于转染的PA317细胞条件培养基的亲和纯化(C)。图6表示PBSF在外周血淋巴细胞中表达的Northern印迹分析。对照泳道表示在没有细胞激动素表达诱导剂存在下的表达水平，中间泳道表示在商陆分裂素(PWM)存在下的表达，右边的泳道表示在PWM和放线菌酮存在下的表达。图7表示在人白血病细胞系的单核细胞分化过程中PBSF表达的Northern印迹分析。泳道1，ML-1，未治疗的;泳道2，用PMA治疗的ML-1;泳道3，用肿瘤坏死因子(TNF)治疗的ML-1;泳道4，用TNF和IL-6治疗的ML-1;泳道5，HL-60，未治本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有刺激产生前－Ｂ细胞活性的纯化的和分离的多肽。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：BB沙马尔，
申请(专利权)人：安姆根有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]