一种重组人粒细胞集落刺激因子的生产方法技术

本发明专利技术涉及一种重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）的生产方法。该方法采用反转录后的聚合酶链式（ＲＴ－ＰＣＲ）反应，钓取人粒细胞集落刺激因子基因，转化Ｅ．ｃｏｌｉ菌；蛋白以中空纤维超滤透析方式复性，经离子交换层析、疏水层析和分子筛层析顺序组合，纯化，大规模制得高纯度的药用ｒｈＧ－ＣＳＦ蛋白。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体地说是人中性粒细胞集落刺激因子(G-CSF)cDNA克隆的获得，表达G-CSF菌种的构建，及G-CSF大规模纯化，制成药品。人外周血各种成熟血细胞均源自于骨髓造血干细胞的分化增殖，从造血干细胞到外周成熟细胞之间，存在一系列调节因子，形成网络，控制着人体各种血细胞的数量和功能，维持机体白细胞的稳定。人G-CSF是该网络中存在于正常人体，刺激CFU-GM分化为CFU-G的因子，具有刺激前体细胞分化增殖为成熟外周中性粒细胞并增强其功能的蛋白质调节因子。人G-CSF的发现是从生物活性研究开始的，早在1980年，Asano等人发现一些癌症患者体内有粒细胞增多现象，当把这些人癌细胞移植到裸鼠体内后也发生粒细胞增多现象，表明人癌细胞可产生一种使鼠粒细胞增多的集落刺激因子(CSF)。把人口腔(鳞状)癌细胞株chu-2的条件培养液在体外刺激人和小鼠骨髓细胞时，能形成嗜中性粒细胞集落人膀胱癌5637细胞株的条件培养液，能诱使人骨髓白血病细胞素HL-60和小鼠粒单系白血病细胞系WEHI-3BO+分化，故被称为多向刺激因子。(Sonia.LM.Amgen Patent 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）的生产方法，其特征在于以反转录后的聚合酶链式（ＲＴ－ＰＣＲ）反应方法，钓取人外周血白细胞中粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）基因的ｃＤＮＡ，构建重组质粒，转化Ｅ．ｃｏｌｉ菌；以外压式或内压式中空纤维超滤透析复性；以离子交换柱层析、疏水柱层析和分子筛柱层析顺序组合纯化，大规模制得高纯度的药用ｒｈＧ－ＣＳＦ蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苏勇，孔铁山，王昌梅，黄岩山，孙汉栋，
申请(专利权)人：杭州九源基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]