针对前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶KEXIN9型(PCSK9)的抗原结合蛋白制造技术

本发明专利技术阐述了与前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型(PCSK9)相互作用的抗原结合蛋白。阐述了通过给予药物有效量的针对PCSK9的抗原结合蛋白治疗高胆固醇血症及其它疾病的方法。阐述了用针对PCSK9的抗原结合蛋白检测样品中PCSK9的量的方法。样品中PCSK9的量的方法。样品中PCSK9的量的方法。

【技术实现步骤摘要】
针对前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶KEXIN 9型(PCSK9)的抗原结合蛋白
[0001]本申请是申请日为2008年8月22日、专利技术名称为“针对前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶KEXIN 9型(PCSK9)的抗原结合蛋白”的中国专利技术专利申请号201410218704.6的分案申请。其中，该申请号为201410218704.6的中国专利技术专利申请是申请日为2008年8月22日、申请号为200880113475.4(PCT/US2008/074097)，专利技术名称为“针对前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型(PCSK9)的抗原结合蛋白”的分案申请。
[0002]相关申请
[0003]本申请要求享有于2007年8月23日提交的美国临时申请顺序号60/957,668、于2007年12月21日提交的美国临时申请顺序号61/008,965及于2008年1月9日提交的美国临时申请顺序号61/010,630的优先权，它们以其整体在此引作参考。
专利

[0004]本专利技术涉及结合前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型(Proprotein convertase subtilisin kexin type 9，PCSK9)的抗原结合蛋白及使用和制备所述抗原结合蛋白的方法。本申请连同电子格式的序列表一起提交。所提供的序列表文件名为APMOL-003A.txt，于2008年8月12日创建，且大小为296,639字节，其被更新为文件名为APMOL-003A_Substitute.TXT的文件，该文件于2010年10月11日星期二创建且大小为297,239字节。该电子格式的序列表中的信息以其全部内容通过引用结合到本文中。
[0005]各种实施方案背景
[0006]前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型(PCSK9)是丝氨酸蛋白酶，其参与调节低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白的水平(Horton等，2007；Seidah和Prat，2007)。体外实验显示将PCSK9加到HepG2细胞能降低细胞表面LDLR水平(Benjannet等，2004；Lagace等，2006；Maxwell等，2005；Park等，2004)。对小鼠的实验显示，提高PCSK9蛋白水平能降低肝脏LDLR蛋白水平(Benjannet等，2004；Lagace等，2006；Maxwell等，2005；Park等，2004)，同时PCSK9敲除小鼠提高肝脏中LDLR水平(Rashid等，2005)。另外，业已鉴定了提高或降低血浆LDL水平的各种人PCSK9突变(Kotowski等，2006；Zhao等，2006)。业已显示PCSK9直接与LDLR蛋白作用，与LDLR一起被吞噬，在整个内体途径中与LDLR共发生免疫荧光(Lagace等，2006)。尚未观察到PCSK9降解LDLR，且未确定其降低胞外LDLR蛋白水平的机制。
[0007]PCSK9是丝氨酸蛋白酶的枯草杆菌蛋白酶(S8)家族中的激素原-前蛋白转化酶(Seidah等，2003)。人类有9种激素原-前蛋白转化酶，可将其分为S8A和S8B亚家族(Rawlings等，2006)。弗林蛋白酶、PC1/PC3、PC2、PACE4、PC4、PC5/PC6和PC7/PC8/LPC/SPC7被分在亚家族S8B中。来自鼠弗林蛋白酶和PC1的不同结构域的晶体结构及NMR结构显示了枯草杆菌蛋白酶样前域(pro-domain)及催化结构域，并且P结构域(P domain)直接位于催化结构域的C-末端(Henrich等，2003；Tangrea等，2002)。基于该亚家族内的氨基酸序列的相似性，预测所有7个成员都具有相似的结构(Henrich等，2005)。SKI-1/S1P和PCSK9被分在亚家族S8A中。这些蛋白之间的序列比较也提示存在枯草杆菌蛋白酶样前域及催化结构域
(Sakai等，1998；Seidah等，2003；Seidah等，1999)。在这些蛋白中，位于催化结构域的C-末端的氨基酸序列更易变，且未提示存在P结构域。
[0008]激素原-前蛋白转化酶作为酶原表达，它们经过多个步骤加工成熟。在该加工中前域的功能是双重的。前域首先起分子伴侣作用，为催化结构域的适当折叠所需(Ikemura等，1987)。当催化结构域折叠后，在前域和催化结构域之间发生自身催化。在该初次裂解反应后，前域仍然与催化结构域结合，然后其起着催化活性抑制物的作用(Fu等，2000)。当条件恰当时，在前域内的位点处因第二次自身催化事件继续成熟(Anderson等，1997)。在该第二次裂解事件发生后，前域和催化结构域分离，成为活性蛋白酶。
[0009]PCSK9酶原的自身催化发生在Gln152和Ser153(VFAQ|SIP)之间(Naureckiene等，2003)，业已显示为其从细胞分泌所需(Seidah等，2003)。尚未观察到在PCSK9前域内位点处的第二自身催化事件。纯化的PCSK9由两部分构成，它们可通过非还原性SDS-PAGE分开；为17Kd的前域和为65Kd的催化结构域加上C-末端结构域。尚未分离到没有其抑制性前域的PCSK9，PCSK9的催化活性的测量值一直是不定的(Naureckiene等，2003；Seidah等，2003)。
[0010]各种实施方案概述
[0011]在某些实施方案中，本专利技术包括针对PCSK9的抗原结合蛋白。
[0012]在某些方面，本专利技术包括结合PCSK9的分离的抗原结合蛋白，其包含：A)选自以下的一个或多个重链互补决定区(CDRH)：(i)来自选自以下的序列中的CDRH1的CDRH1：SEQ ID NO：74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81和60；(ii)来自选自以下的序列中的CDRH2的CDRH2：SEQ ID NO：74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81和60；(iii)来自选自以下的序列中的CDRH3的CDRH3：SEQ ID NO：74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81和60；和(iv)含有一处或多处不超过4个氨基酸的氨基酸取代、缺失或插入的(i)、(ii)和(iii)的CDRH；B)选自以下的一个或多个轻链互补决定区(CDRL)：(i)来自选自以下的序列中的CDRL1的CDRL1：SEQ ID NO：5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44和46；(ii)来自选自以下的序列中的CDRL2的CDRL2：SEQ ID NO：5、7本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.针对与人PCSK9的亲和力筛选测试抗体的方法，所述方法包括：产生所述测试抗体，其中所述测试抗体包含：重链可变区(VH)，其包含下列在所指定的位置中的氨基酸残基：SEQ ID NO:67的T28、S30、S31、Y32、S54、S55、S56、Y57、I58、S59、Y60、N74、A75、R98、Y100、F102、W103、S104、A105、Y106、Y107、D108、A109和D111，或在所列位置之一处包含单个氨基酸取代；和轻链可变区(VL)，其包含下列在所指定的位置中的氨基酸残基：SEQ ID NO:12的L48、S51、Y93和S98，或在所列位置之一处包含单个氨基酸残基取代；和针对与人PCSK9的结合筛选所述测试抗体。2.权利要求1的方法，其中所述测试抗体包含：重链可变区(VH)，其在权利要求1所限定的SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：SM杰克逊，NPC沃克，DE皮佩尔，单倍，沈文彦，JCY陈，CT金，RR克彻姆，C梅林，TA卡拉贝奥，曹琼，
申请(专利权)人：安姆根有限公司，
类型：发明
国别省市：