本发明专利技术涉及一种促进杂交瘤生长的培养基及其制备方法。该促进杂交瘤生长的培养基，包括1640完全培养基和添加在所述1640完全培养基中的重组人IL-21，且所述重组人IL-21在所述促进杂交瘤生长的培养基中的浓度为100ng/ml。上述培养基在配制的RPMI?1640完全培养基的基础上，添加了IL-21，并使其在培养基中的最终浓度控制在每毫升100纳克，不仅能通过促进B细胞增殖来促进杂交瘤细胞的生长，同时也可以通过促进B细胞分泌特异性抗体这一特性来促进杂交瘤细胞分泌所需单克隆抗体。
【技术实现步骤摘要】
促进杂交瘤生长的培养基及其制备方法
细胞培养基及其制备方法，更具体地说涉及的是一种能够为杂交瘤细胞提供更好的生长条件的培养基及其制备方法。
技术介绍
单克隆抗体以其高度的特异性和灵敏度，在免疫学检测、目的蛋白的亲和纯化和肿瘤治疗领域得到广泛应用。淋巴细胞杂交瘤技术是生产单克隆抗体过程中极为重要的一个环节，但是，用该技术制备单克隆抗体，其实验环节多，周期长，影响因素复杂，容易遭受挫折。尤其是在杂交瘤产生早期，由于新出现的杂交瘤生活力差，其生长情况容易因环境的变化而变化，不能很好地适应体外组织培养条件，很容易夭折。即便获得了生长良好的杂交瘤细胞，也可能会因为杂交瘤细胞不能分泌特异性抗体而导致实验失败。因此，在现有条件下增强新生成的杂交瘤细胞生长能力，提高杂交瘤细胞的克隆化效率及抗体产量就显得十分必要了。现有的培养基只注重了对杂交瘤细胞生长的促进作用，并没有做到同时加强杂交瘤细胞分泌特异性抗体的能力，且配制方法较为复杂，操作不够简便。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种既促进杂交瘤细胞生长，又促进杂交瘤细胞分泌所需单克隆抗体的培养基及其 制备方法。—种促进杂交瘤生长的培养基，包括1640完全培养基和添加在所述1640完全培养基中的重组人IL-21，且所述重组人IL-21在所述促进杂交瘤生长的培养基中的浓度为100ng/ml。一种促进杂交瘤生长的培养基的制备方法，包括如下步骤:制备1640完全培养基；往所述1640完全培养基中加入重组人IL-21，并使所述重组人IL-21的终浓度为100ng/ml。在其中一个实施例中，所述制备1640完全培养基的方法包括:将10.4克RPMI 1640干粉，3.574克4-羟乙基哌嗪乙磺酸，2克碳酸氢钠粉末用900毫升去离子水溶解，将pH值调至7.0后定容到1000毫升，在生物安全柜中用0.22微米滤膜过滤除菌后分装待用，即为1640无血清培养基；取79毫升1640无血清培养基，加入20毫升胎牛血清，再加入I毫升双抗溶液，即为1640完全培养基。上述培养基在配制的RPMI 1640完全培养基的基础上，添加了 IL-21，并使其在培养基中的最终浓度控制在每毫升100纳克，不仅能通过促进B细胞增殖来促进杂交瘤细胞的生长，同时也可以通过促进B细胞分泌特异性抗体这一特性来促进杂交瘤细胞分泌所需单克隆抗体。【具体实施方式】杂交瘤细胞是B细胞与骨髓瘤细胞融合产生的，同时拥有B细胞和骨髓瘤细胞的特性。淋巴细胞杂交瘤技术是生产单克隆抗体过程中的一个重要技术，但是，用该技术制备单克隆抗体，其实验环节多，周期长，影响因素复杂，容易遭受挫折。尤其是在杂交瘤产生早期，由于新出现的杂交瘤尚未适应体外组织培养条件，很容易夭折或不能很好地分泌特异性抗体。针对上述问题，本实施例设计了一种含有能够促进B细胞增殖分化以及特异性抗体的产生的细胞因子IL-21 (IL-21)的细胞培养基，克服了常规新生成的杂交瘤细胞体外培养易夭折或不能分泌特异性抗体的困难。本实施例的促进杂交瘤生长的培养基，包括1640完全培养基和添加在所述1640完全培养基中的重组人IL-21，且所述重组人IL-21在所述促进杂交瘤生长的培养基中的浓度为100ng/ml。IL-21是一类具有潜在的免疫调节作用的I型细胞因子，主要由表面抗原分化簇4(⑶4)阳性的T细胞和自然杀伤细胞分泌产生的。IL-21的受体分布极其广泛，因此IL-21得以参与机体免疫应答的多重调节。IL-21与其受体结合后，可以激活受体细胞内的相关下游信号通路，促进辅助型T细胞17的增殖，增强表面抗原分化簇8阳性的T细胞和自然杀伤细胞的细胞毒性，诱导B细胞分化为浆细胞，从而发挥免疫调节作用。IL-21作用广泛，但其最主要作用还是在于调节机体的体液免疫反应。已有研究证明，IL-21能够极大程度地刺激人类或小鼠的B细胞增殖和分化，同时也参与了抗体的型别转换，促进B细胞产生大量的免疫球蛋白Gl和免疫球蛋白G3。杂交瘤细胞是B细胞与骨髓瘤细胞融合产生的，同时拥有B细胞和骨髓瘤细胞的特性，促进B细胞增殖分化以及特异性抗体的产生，对促进杂交瘤细胞的生长以及抗体产生有着很有益的作用。上述促进杂交瘤生长的培养基的制备方法，包括如下步骤:步骤S100、制备1640完全培养基。其中，制备1640完全培养基的方法包括:步骤S110、将10.4克RPMI 1640干粉(购自Gibco公司)，3.574克分析纯4_羟乙基哌嗪乙磺酸(购自Sigma公司)，2克分析纯碳酸氢钠粉末(购自上海生工)用900毫升去离子水溶解，将PH值调至7.0后定容到1000毫升，在生物安全柜中用0.22微米滤膜过滤除菌后分装待用，即为1640无血清培养基。步骤S 120、取79毫升1640无血清培养基，加入20毫升胎牛血清(购自Gibco公司)，再加入I毫升双抗溶液(青霉素及链霉素溶液)(100 X )(购自Hyclone公司)，即为1640完全培养基。步骤S200、往所述1640完全培养基中加入重组人IL-21，并使所述重组人IL-21的终浓度为100ng/ml。向上述配制好的每100毫升1640完全培养基中加入10微克重组人IL-21 (购自PeproTech公司)，使IL-21的终浓度为每毫升100纳克，即为可促进杂交瘤生长的培养基。以下用IL21-1640命名配制成的该培养基。本专利技术的培养基配制方法简单，所需试剂容易获得，使用方便。以下为性能测试部分:下列测试是以IL21-1640培养基与常规1640完全培养基在培养克隆细胞上进行的比较。I) BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞悬液的制备取12周龄的BALB/c小鼠，拉颈法处死，于70%乙醇水溶液中浸泡10分钟。在超净工作台的解剖盘中打开腹部皮肤，暴露出腹膜，向腹腔中注入10毫升的1640完全培养基，按摩腹部f 2分钟后，用注射器抽出腹腔液，以每毫升2X 105个细胞的密度加入到96孔细胞培养板中，每孔加入50微升腹腔巨噬细胞悬液。2)将本专利技术的IL21-1640培养基和常规1640完全培养基以每孔50微升的量加入到96孔细胞培养板中，每种培养基设置48个孔。3)将处于对数生长期的鼠抗人IgG单克隆抗体分泌细胞和鼠抗人⑶4单克隆抗体分泌细胞分别用IL21-1640培养基和常规1640完全培养基稀释到每毫升20个，然后分别加入到含相同培养基的培养板孔中，每孔50微升,置于37摄氏度5% 二氧化碳条件下培养。每种细胞设置24个孔。4)分别于第6天和第9天时每孔更换50微升相同培养基，到第12天时检测克隆大小和分泌鼠抗人IgG单克隆抗体和鼠抗人CD4单克隆抗体的克隆细胞孔上清的效价。以相同培养条件下有克隆细胞生长孔细胞集落直径(平均数土标准差)和抗体效价(0D450)作为判断依据。效果比较 比较结果如表1和表2所示。表1本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种促进杂交瘤生长的培养基,其特征在于,包括1640完全培养基和添加在所述1640完全培养基中的重组人IL-21，且所述重组人IL-21在所述促进杂交瘤生长的培养基中的浓度为100ng/ml。2.一种促进杂交瘤生长的培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 制备1640完全培养基； 往所述1640完全培养基中加入重组人IL-21，并使所述重组人IL-21的终浓度为100ng/ml。3.如权利要求2所述的促...
【专利技术属性】
技术研发人员：万晓春，张茜，金言，阮庆国，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：
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