免疫球蛋白单可变结构域的稳定制剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及多肽，例如免疫球蛋白单可变结构域，特别是针对冯维勒布兰德因子(vWF)的免疫球蛋白单可变结构域的稳定制剂。本发明专利技术提供的制剂在延长时间的储存后以及在宽范围的温度下是稳定的。本发明专利技术的制剂确保多肽的高稳定性，允许进行多次冻融循环，而不发生化学或物理变质，并且提供与机械应力相关的稳定性，所述机械应力例如震动、剪切或搅拌应力。它们适用于药物和诊断制剂，并且与药学可接受的稀释剂相容。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫球蛋白单可变结构域的稳定制剂及其应用1.专利
本专利技术涉及多肽，例如免疫球蛋白单可变结构域，特别是针对冯维勒布兰德因子(vonWillebrandFactor,vWF)的免疫球蛋白单可变结构域，例如根据SEQIDNO:s1-19的免疫球蛋白单可变结构域，特别是SEQIDNO:1，即纳米抗体(Nanobody)ALX-0081的稳定制剂。本专利技术提供的制剂在延长时间的储存后以及在宽范围的温度下是稳定的。本专利技术的制剂确保多肽的高稳定性，允许进行多次冻融循环，而不发生化学或物理变质，并且提供与机械应力相关的稳定性，所述机械应力例如震动、剪切或搅拌应力。它们适用于药物和诊断制剂，并且与药学可接受的稀释剂，例如盐水、Ringer’s溶液或葡萄糖/右旋糖溶液相容。本专利技术还涉及该制剂的制备方法、储存方法和应用。本专利技术进一步涉及该制剂的剂量单位形式、试剂盒和医疗应用。2.专利技术背景免疫球蛋白单可变结构域，例如骆驼VHH结构域、骆驼源化VH结构域或人源化VHH结构域，代表了一种迅速增长类别的抗体疗法。例如，针对vWF的免疫球蛋白单可变结构域已在WO2004/015425、WO2004/062551、WO2006/074947、WO2006/122825、WO2009/115614、和WO2011/067160中进行了描述。蛋白质例如免疫球蛋白单可变结构域(ISVDs)在最初的制造和应用如给患者施用之间的过程中通常必须进行储存和运输。运输、制造、储存和分发过程可能对免疫球蛋白单可变结构域施加多种胁迫/应力(stress)，例如化学和物理胁迫/应力。在储存过程中可能发生例如，如脱酰胺、外消旋化、水解、氧化、异构化、β-消除或二硫键交换的化学改变。物理胁迫可能引起变性和去折叠、聚集、微粒形成、沉淀、乳浊或吸附。仍然需要提供用于免疫球蛋白单可变结构域的制剂，例如如本文所定义的，这种制剂提高稳定性，保护活性剂抵抗化学和/或机械胁迫，并且由此使得可以储存和发生温度变化，而不会有显著的物理或化学变质，在延长的时间中保持稳定，和/或是令患者感觉舒适的，例如其中活性剂在高浓度下是可溶的。3.专利技术概述已知上述提及的胁迫可影响蛋白质疗法，例如抗体疗法的物理化学完整性。例如，聚集、脱酰胺和氧化被描述是引起抗体降解的最普遍的原因(Cleland等,1993,Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSystems10,307-377)。同时，提供能保持免疫球蛋白单可变结构域的化学和物理完整性的制剂是有帮助的。化学和物理完整性对于例如治疗剂的使用来说是必需的，而且通常也与生物活性相关。虽然我们对于蛋白质稳定性的知识在增加，但是优化制剂条件以完全抑制这些各种胁迫或使其减至最小，并且确保延长的保存期，仍然是一个重大挑战。对于免疫球蛋白单可变结构域的合适制剂所知甚少。WO2010/077422描述了TNF结合纳米抗体的制剂，其包含冻干保护剂、表面活性剂和缓冲液，所述缓冲液选自pH在5.0-7.5之间的组氨酸缓冲液和Tris-HCl缓冲液。特定的vWF结合剂，特别是与vWF具有高亲和力的免疫球蛋白单可变结构域例如ALX-0081[INN:caplacizumab]，已作为急性冠状动脉综合征(ACS)患者的辅助治疗进行测试，所述患者接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)，并且特定vWF结合剂已被开发用于治疗血栓性血小板减少性紫癜(TTP)。已经成功完成I期临床实验，正在进行II期临床实验的测试。到目前为止，ALX-0081是基于磷酸盐的液体制剂，其中含有D-PBS中的5mg/mL的活性药物成分(API)、200mM甘氨酸和0.02％吐温-80(v/v)。虽然这种制剂被证明是有效的，但是它在几个方面还可以改进。首先，目前的浓度可能需要进行多次皮下注射(假设每次皮下注射的体积限制在大约1mL)，因此降低了患者舒适感和便利性。其次，可以提高目前的ALX-0081制剂(在下文中也被称为同期ALX-0081)在升高的温度下的储存稳定性和保存期。现在的制剂在高温下的稳定性主要由多肽上的化学改变决定。化学改变可能与效力损失有关。虽然可以通过在-20℃储存产品来获得可行的保存期，但是这对于大部分的实用目的来说不是令人满意的选择。冷冻干燥是蛋白质保存中普遍使用的技术，其用于从感兴趣的蛋白质制备物中除去水分。冷冻干燥(Freeze-drying)或冻干(lyophilization)的过程是这样的：要被干燥的物质首先被冷冻，然后通过真空环境下升华除去冰或冻结的溶剂。在预冻干制剂中可以包括赋形剂，以提高冷冻干燥过程中的稳定性和/或提高冻干产物在储存时的稳定性(Arakawa等Pharm.Res.8(3):285-291(1991))。本专利技术涉及制剂，其包含冯维勒布兰德因子(vWF)结合剂和柠檬酸盐或磷酸盐缓冲液，优选柠檬酸盐缓冲液，pH在5.0-7.5的范围内。特别地，本专利技术涉及本文所述的制剂，其中所述vWF结合剂包含至少一个与SEQIDNO:20结合的免疫球蛋白单可变结构域。所述免疫球蛋白单可变结构域包含下述种类或基本上由它们组成，但不限于它们：免疫球蛋白单可变结构域，其是重链可变结构域序列，更特别是免疫球蛋白单可变结构域，其是来自于常规四链抗体的重链可变结构域序列，或是来自重链抗体或纳米抗体(包括但不限于VHH序列)、优选纳米抗体的重链可变结构域序列。此外，本专利技术涉及本文所述的制剂，其中所述vWF结合剂包含SEQIDNO:s1-19中的至少之一。而且，本专利技术涉及本文所述的制剂，其中所述vWF结合剂是包含一个或多个免疫球蛋白单可变结构域的单链多肽，优选其中所述vWF-结合剂是单价的或多价的，其中所述vWF-结合剂是单特异性的或多特异性的和/或其中一个或多个免疫球蛋白单可变结构域是CDR-移植的、人源化的、骆驼源化的、去免疫的(de-immunized)、和/或在体外产生的(例如通过噬菌体展示选择的)。本专利技术还涉及本文所述的制剂，其中所述vWF结合剂包含与SEQIDNO:1具有至少90％同一性的氨基酸序列。本专利技术还涉及本文所述的制剂，其中所述vWF结合剂具有0.1-80mg/mL范围内的浓度，和/或其中所述缓冲液具有5-200mM范围内的浓度。此外，本专利技术涉及本文所述的制剂，其进一步包含赋形剂，优选所述赋形剂具有10-500mM范围内的浓度，更优选地，其中所述赋形剂选自由蔗糖、甘氨酸、甘露醇、海藻糖和NaCl组成的列表，更优选地，其中所述蔗糖具有1-15％范围内的浓度，优选2-12％范围内的浓度，优选4-10％，例如4、5、6、7、8或9％(w/v)，最优选7％。本专利技术还涉及本文所述的制剂，其中缓冲液选自：柠檬酸盐缓冲液，优选所述柠檬酸盐缓冲液具有6.0-7.0之间，更优选6.5的pH；和磷酸盐缓冲液，优选所述磷酸盐缓冲液具有6.5-7.5之间，优选7.1的pH。此外，本专利技术涉及本文所述的制剂，其进一步包含非离子洗涤剂，例如吐温-80，优选浓度在0.001和0.5％(v/v)之间，更优选在0.01-0.02％(v/v)之间。进一步，本专利技术涉及本文所述的制剂，其中所述缓冲液是pH为6.5±0.5，例如6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7或6.8，更特本文档来自技高网...

【技术保护点】
制剂，其包含冯维勒布兰德因子(vWF)结合剂和pH在5.0‑7.5范围内的柠檬酸盐缓冲液。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.05.17 US 61/824,5231.制剂，其包含冯维勒布兰德因子(vWF)结合剂、柠檬酸盐缓冲液、赋形剂和吐温-80，其中：(a)所述vWF结合剂的浓度为10mg/mL至12.5mg/mL；(b)所述赋形剂为蔗糖，浓度为7％(w/v)；(c)吐温-80浓度为0.01％(v/v)；(d)所述柠檬酸盐缓冲液的浓度为20mM；和(e)所述制剂具有6.5的pH，并且所述vWF结合剂由SEQIDNO：1组成。2.根据权利要求1的制剂，其具有：(i)在5℃储存至少12个月之后，少于5％的高分子量(HMW)物质；和/或(ii)在5℃储存至少12个月之后，少于5％的低分子量(LMW)物质。3.根据权利要求1-2任一项的制剂，其中所述制剂中的所述vWF结合剂在5℃储存至少12个月之后保持其至少大约80％的稳定性。4.根据权利要求1-2任一项的制剂，其中与储存之前的结合活性相比，在储存之后，至少80％的vWF结合剂保持其结合活性，所述结合活性如ELISA和/或Biacore所测量。5.根据权利要求1-2任一项的制剂，其中与储存之前的结合活性相比，在储存之后，至少90％的vWF结合剂保持其结合活性，所述结合活性如ELISA和/或Biacore所测量。6.根据权利要求1-2任一项的制剂，其中与储存之前的结合活性相比，在储存之后，至少95％的vWF结合剂保持其结合活性，所述结合活性如ELISA和/或Biacore所测量。7.根据权利要求1-2任一项的制剂，其中与储存之前的结合活性相比，在储存之后，至少99％的vWF结合剂保持其结...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊夫·梅维斯，韦罗妮克·德布拉邦德里，汉斯·乌尔里克，安·布里热，菲利普·卡勒韦尔特，
申请(专利权)人：埃博灵克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE