【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与相关申请的交叉参考本申请要求于2009年5月1日提交的美国临时专利申请号61/174,800的优先权，其内容为了任何目的在此特别整体引入本文作为参考。
本公开内容涉及多价和多特异性结合蛋白、制备方法、和具体而言涉及其在诊断、预防和/或治疗急性和慢性炎性疾病、癌症及其他疾病中的用途。背景工程改造的蛋白，例如可以与2种或更多抗原结合的多特异性抗体是本领域已知的。此种多特异性结合蛋白可以使用细胞融合、化学缀合、或重组DNA技术来产生。基于2种不同杂交瘤细胞系的体细胞融合，已使用四源杂交瘤（quadroma）技术（参见Milstein，C.和Cuello，A.C.（1983）Nature， 305（5934）：第537-40页）生产了双特异性抗体，所述杂交瘤细胞系表达具有双特异性抗体的所需特异性的鼠单克隆抗体（mAbs）。因为2种不同免疫球蛋白（Ig）重和轻链在所得到的杂种-杂交瘤（或四源杂交瘤）细胞系内随机配对，所以产生最高达10种不同Ig种类，其中只有一种是功能性双特异性抗体。错配对副产品的存在和显著减少的生产得率意味着需要复杂的...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.05.01 US 61/174,8001.一种包含多肽链的结合蛋白，其中所述多肽链包含VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n，其中：
VD1是从第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个重链可变结构域；
VD2是从第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个重链可变结构域；
C是重链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n是Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在，
其中所述第一个亲本抗体和所述第二个亲本抗体可以是相同或不同的，
其中所述结合蛋白可以结合选自NGAL和NGAL；HIV和HIV；NGAL和IL-18；BNP和BNP；以及TnI和TnI的一对抗原。
2.权利要求1的结合蛋白，其中VD1和VD2各包含分别选自SEQ ID NOs：29、31、33、35、37、39、41、43、45、47和49的氨基酸序列。
3.一种包含多肽链的结合蛋白，其中所述多肽链包含VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n，其中：
VD1是从第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个轻链可变结构域；
VD2是从第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个轻链可变结构域；
C是轻链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n是Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在，
其中所述第一个亲本抗体和所述第二个亲本抗体可以是相同或不同的，
其中所述结合蛋白可以结合选自NGAL和NGAL；HIV和HIV；NGAL和IL-18；BNP和BNP；以及TnI和TnI的一对抗原。
4.权利要求3的结合蛋白，其中VD1和VD2各包含分别选自SEQ ID NOs：30、32、34、36、38、40、42、44、46、48和50的氨基酸序列。
5.权利要求1或3的结合蛋白，其中（X2）n不存在。
6.一种包括第一个和第二个多肽链的结合蛋白，其中所述第一个多肽链包含第一个VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n，其中
VD1是从第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个重链可变结构域；
VD2是从第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个重链可变结构域；
C是重链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n是Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在；和
其中所述第二个多肽链包含第二个VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n，其中
VD1是从第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个轻链可变结构域；
VD2是从第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个轻链可变结构域；
C是轻链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n不包含Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在，
其中所述第一个亲本抗体和所述第二个亲本抗体可以是相同或不同的，
其中所述结合蛋白可以结合选自NGAL和NGAL；HIV和HIV；NGAL和IL-18；BNP和BNP；以及TnI和TnI的一对抗原。
7.权利要求6的结合蛋白，其中VD1和VD2重链可变结构域各包含分别选自SEQ ID NOs：29、31、33、35、37、39、41、43、45、47和49的氨基酸序列，并且其中VD1和VD2轻链可变结构域各包含分别选自SEQ ID NOs：30、32、34、36、38、40、42、44、46、48和50的氨基酸序列。
8.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中（X2）n是选自SEQ ID NOs 1-28的氨基酸序列。
9.权利要求6的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含两个第一个多肽链和两个第二个多肽链。
10.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中所述Fc区选自天然序列Fc区和变体序列Fc区。
11.权利要求10的结合蛋白，其中所述Fc区选自来自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD的Fc区。
12.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中第一个多肽链的所述VD1和第二个多肽链的所述VD1是从相同亲本抗体或其抗原结合部分获得的。
13.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中第一个多肽链的所述VD1和第二个多肽链的所述VD1是从不同亲本抗体或其抗原结合部分获得的。
14.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中第一个多肽链的所述VD2和第二个多肽链的所述VD2是从相同亲本抗体或其抗原结合部分获得的。
15.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中第一个多肽链的所述VD2和第二个多肽链的所述VD2是从不同亲本抗体或其抗原结合部分获得的。
16.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中所述第一个亲本抗体和所述第二个亲本抗体结合所述抗原上的不同表位。
17.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分结合所述第一个抗原，其结合能力不同于所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分结合所述第二个抗原的能力。
18.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分结合所述第一个抗原，其结合亲和力不同于所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分结合所述第二个抗原的亲和力。
19.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分和所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分选自人抗体、CDR嫁接的抗体和人源化抗体。
20.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分和所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分选自Fab片段；F（ab’）2片段；包含由铰链区的二硫键连接的2个Fab片段的二价片段；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；dAb片段；分离的互补性决定区（CDR）；单链抗体；和双抗体。
21.权利要求1、3或6的结合蛋白，其中所述结合蛋白具有至少一个由所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分、或所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分表现的所需特性。
22.权利要求21的结合蛋白，其中所述所需特性选自一个或多个抗体参数。
23.权利要求21的结合蛋白，其中所述抗体参数选自抗原特异性、对抗原的亲和力、能力、生物学功能、表位识别、稳定性、可溶性、生产效率、免疫原性、药物代谢动力学、生物利用率、组织交叉反应性、以及直向同源抗原结合。
24.一种可以与两个抗原结合、包含四个多肽链的DVD-Ig，其中，第一个和第三个多肽链包含VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n，其中：
VD1是从第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个重链可变结构域；
VD2是从第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个重链可变结构域；
C是重链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n是Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在；和
其中第二个和第四个多肽链包含VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n，其中
VD1是从第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个轻链可变结构域；
VD2是从第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个轻链可变结构域；
C是轻链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n不包含Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在，
其中所述第一个亲本抗体和所述第二个亲本抗体可以是相同或不同的，
其中所述VD1和VD2重链可变结构域各包含分别选自SEQ ID NOs：29、31、33、35、37、39、41、43、45、47和49的氨基酸序列，并且其中所述VD1和VD2轻链可变结构域各包含分别选自SEQ ID NOs：30、32、34、36、38、40、42、44、46、48和50的氨基酸序列。
25.一种可以与两个抗原结合、包含四个多肽链的DVD-Ig，其中，第一个和第三个多肽链包含VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n，其中
VD1是从第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个重链可变结构域；
VD2是从第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个重链可变结构域；
C是重链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n是Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在；和
其中第二个和第四个多肽链包含VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n，其中
VD1是从第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个轻链可变结构域；
VD2是从第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个轻链可变结构域；
C是轻链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n不包含Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在，
其中所述第一个亲本抗体和所述第二个亲本抗体可以是相同或不同的，和
其中所述DVD-Ig结合选自NGAL、HIV、IL-18、BNP和TnI的至少一种抗原。
26.一种生成可以结合两个抗原的双重可变结构域免疫球蛋白的方法，包括下列步骤：
（a）获得可以结合第一个抗原的第一个亲本抗体或其抗原结合部分；
（b）获得可以结合第二个抗原的第二个亲本抗体或其抗原结合部分；
（c）构建含有VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n的第一个和第三个多肽链，其中：
VD1是从所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个重链可变结构域；
VD2是从所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个重链可变结构域；
C是重链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n是Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在；
（d）构建含有VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n的第二个和第四个多肽链，其中：
VD1是从所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个轻链可变结构域；
VD2是从所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个轻链可变结构域；
C是轻链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n不包含Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在，及
（e）表达所述第一个、第二个、第三个和第四个多肽链；
从而生成可以结合所述第一个和所述第二个抗原的双重可变结构域免疫球蛋白，
其中所述第一个亲本抗体和所述第二个亲本抗体可以是相同或不同的，和
其中所述双重可变结构域免疫球蛋白可以结合选自NGAL和NGAL；HIV和HIV；NGAL和IL-18；BNP和BNP；以及TnI和TnI的一对抗原。
27.权利要求26的方法，其中所述VD1和VD2重链可变结构域各包含分别选自SEQ ID NOs：29、31、33、35、37、39、41、43、45、47和49的氨基酸序列，并且其中所述VD1和VD2轻链可变结构域各包含分别选自SEQ ID NOs：30、32、34、36、38、40、42、44、46、48和50的氨基酸序列。
28.权利要求26的方法，其中所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分中的每一个和所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分中的每一个选自人抗体、CDR嫁接的抗体和人源化抗体。
29.权利要求26的方法，其中所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分中的每一个和所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分中的每一个分别选自Fab片段、F（ab’）2片段、包含由铰链区的二硫键连接的2个Fab片段的二价片段；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段、dAb片段、分离的互补性决定区（CDR）、单链抗体、和双抗体。
30.权利要求26的方法，其中所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分具有至少一个由所述双重可变结构域免疫球蛋白表现的所需特性。
31.权利要求26的方法，其中所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分具有至少一个由所述双重可变结构域免疫球蛋白表现的所需特性。
32.权利要求26的结合蛋白，其中所述Fc区选自天然序列Fc区和变体序列Fc区。
33.权利要求26的结合蛋白，其中所述Fc区选自来自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD的Fc区。
34.权利要求30的结合蛋白，其中所述所需特性选自一个或多个抗体参数。
35.权利要求31的结合蛋白，其中所述所需特性选自一个或多个抗体参数。
36.权利要求34的结合蛋白，其中所述抗体参数选自抗原特异性、对抗原的亲和力、能力、生物学功能、表位识别、稳定性、可溶性、生产效率、免疫原性、药物代谢动力学、生物利用率、组织交叉反应性、以及直向同源抗原结合。
37.权利要求35的结合蛋白，其中所述抗体参数选自抗原特异性、对抗原的亲和力、能力、生物学功能、表位识别、稳定性、可溶性、生产效率、免疫原性、药物代谢动力学、生物利用率、组织交叉反应性、以及直向同源抗原结合。
38.权利要求26的结合蛋白，其中所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分结合所述第一个抗原，其结合亲和力不同于所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分结合所述第二个抗原的亲和力。
39.权利要求26的结合蛋白，其中所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分结合所述第一个抗原，其结合能力不同于所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分结合所述第二个抗原的能力。
40.一种生成具有所需特性的可以结合两个抗原的双重可变结构域免疫球蛋白的方法，包括下列步骤：
（a）获得第一个亲本抗体或其抗原结合部分，其可以结合第一个抗原，并具有至少一个由双重可变结构域免疫球蛋白表现的所需特性；
（b）获得第二个亲本抗体或其抗原结合部分，其可以结合第二个抗原，并具有至少一个由双重可变结构域免疫球蛋白表现的所需特性；
（c）构建包含VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n的第一个和第三个多肽链，其中；
VD1是从所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个重链可变结构域；
VD2是从所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个重链可变结构域；
C是重链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n是Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在；
（d）构建包含VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n的第二个和第四个多肽链，其中；
VD1是从所述第一个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第一个轻链可变结构域；
VD2是从所述第二个亲本抗体或其抗原结合部分获得的第二个轻链可变结构域；
C是轻链恒定结构域；
（X1）n是接头，条件是它不是CH1，其中所述（X1）n存在或不存在；和
（X2）n不包含Fc区，其中所述（X2）n存在或不存在；及
（e）表达所述第一个、第二个、第三个和第四个多肽链；
其中所述第一个亲本抗体和所述第二个亲本抗体可以是相同或不同的，
从而生成具有所需特性的可以结合所述第一个和所述第二个抗原的双重可变结构域免疫球蛋白，
其中所述双重可变结构域免疫球蛋白可以结合选自NGAL和NGAL；HIV和HIV；NGAL和IL-18；BNP和BNP；以及TnI和TnI的一对抗原。
41.一种确定测试样品中抗原或其片段的存在、量或浓度的方法，
其中所述抗原或其片段选自单独或与IL-18组合的HIV、BNP、TnI和NGAL，
所述方法包含通过免疫测定对测试样品测定抗原或其片段，
其中所述免疫测定（i）采用至少一种结合蛋白和至少一种可检测标记，以及（ii）包含将测试样品中由可检测标记生成的、作为抗原或其片段的存在、量或浓度的直接或间接指示的信号，与对照或校准物中生成的、作为抗原或其片段的存在、量或浓度的直接或间接指示的信号进行比较，
其中所述校准物任选是一系列校准物的部分，其中每个校准物通过抗原或其片段的浓度而不同于系列中的其他校准物，和
其中所述至少一种结合蛋白之一（i’）包括包含VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n的多肽链，其中VD1是从第一个亲本抗体（或其抗原结合部分）获得的第一个重链可变结构域，VD2是从第二个亲本抗体（或其抗原结合部分）获得的第二个重链可变结构域，所述第二个亲本抗体可以与第一个亲本抗体相同或不同，C是重链恒定结构域，（X1）n是接头，其是任选存在的，并且当存在时，与CH1不同，且（X2）n是Fc区，其是任选存在的，并且（ii’）可以结合选自NGAL和NGAL；HIV和HIV；NGAL和IL-18；BNP和BNP；以及TnI和TnI的一对抗原，
因此确定所述测试样品中抗原或其片段的存在、量或浓度。
42.权利要求41的方法，其中所述方法包括下列步骤：
（i）将测试样品与结合抗原或其片段上的表位的至少一种捕获剂接触，以便形成捕获剂/抗原或其片段复合物，
（ii）将捕获剂/抗原或其片段复合物与至少一种检测剂接触，所述检测剂包括可检测标记且结合抗原或其片段上不由捕获剂结合的表位，以形成捕获剂/抗原或其片段/检测剂复合物，和
（iii）基于通过（ii）中形成的捕获剂/抗原或其片段/检测剂复合物中的可检测标记生成的信号，测定测试样品中抗原或其片段的存在、量或浓度，因此确定所述测试样品中抗原或其片段的存在、量或浓度，
其中至少一种捕获剂和/或至少一种检测剂是至少一种结合蛋白。
43.权利要求41的方法，其中所述方法包括下列步骤：
（i）将测试样品与结合抗原或其片段上的表位的至少一种捕获剂接触，以便形成捕获剂/抗原或其片段复合物，并同时或以任何顺序序贯将测试样品与可检测标记的抗原或其片段接触，所述可检测标记的抗原或其片段可与测试样品中的任何抗原或其片段竞争结合所述至少一种捕获剂，其中测试样品中存在的任何抗原（或其片段）和可检测标记的抗原彼此竞争，以分别形成捕获剂/抗原或其片段复合物和捕获剂/可检测标记的抗原或其片段复合物，和
（ii）基于通过（ii）中形成的捕获剂/可检测标记的抗原或其片段复合物中的可检测标记生成的信号，测定测试样品中抗原或其片段的存在、量或浓度，
其中至少一种捕获剂是至少一种结合蛋白，
其中通过捕获剂/可检测标记的抗原或其片段复合物中的可检测标记生成的信号与测试样品中的抗原或其片段的量或浓度成反比，
因此确定所述测试样品中抗原或其片段的存在、量或浓度。
44.权利要求41的方法，其中所述测试样品来自患者，并且所述方法另外包括诊断、预后、或评估所述患者的治疗性/预防性处理的功效，其中如果所述方法另外包括评估所述患者的治疗性/预防性处理的功效，则所述方法任选另外包括根据需要修改患者的治疗性/预防性处理以改善功效。
45.权利要求42的方法，其中所述测试样品来自患者，并且所述方法另外包括诊断、预后、或评估所述患者的治疗性/预防性处理的功效，其中如果所述方法另外包括评估所述患者的治疗性/预防性处理的功效，则所述方法任选另外包括根据需要修...
【专利技术属性】
技术研发人员：T哈于尔，SE布罗菲，SG德瓦雷，FC格雷尼耶，JA穆尔，Q阮，SY特廷，JM施泰因豪斯，J刘，S阿利，HN赛德，
申请(专利权)人：T哈于尔，SE布罗菲，SG德瓦雷，FC格雷尼耶，JA穆尔，Q阮，SY特廷，JM施泰因豪斯，J刘，S阿利，HN赛德，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。