本发明专利技术提供了一种制备黄孢原毛平革菌厚垣孢子的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）将黄孢原毛平革菌的发酵种子接种到发酵培养基中；所述发酵种子为黄孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌丝体；（2）将接种了所述黄孢原毛平革菌的发酵种子的发酵培养基进行液体深层发酵，以产生黄孢原毛平革菌的厚垣孢子。另外还提供了一种制备黄孢原毛平革菌厚垣孢子制剂的方法及其制剂。通过上述技术方案，可简单的、大规模生产黄孢原毛平革菌的厚垣孢子。
【技术实现步骤摘要】
工业规模化发酵产黄孢原毛平革菌厚垣孢子及其制剂的方法及其制剂
本专利技术涉及一种制备黄孢原毛平革菌的厚垣孢子和制备黄孢原毛平革菌的厚垣孢子制剂的方法，以及利用该方法制备的黄孢原毛平革菌的厚垣孢子制剂。
技术介绍
黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)具有很强且广谱的降解异生物质的能力。自20世纪80年代初《Science》首次报道了 P.chrysosporium的降解作用，便引起了环境界的广泛关注，开展了对白腐真菌生物学特性、理化特性、应用等方面的大量研究，成为污水处理、废气污染处理和土壤生物修复的有用工具。P.chrysosporium在其生长周期内可以产生三种繁殖体,包括菌丝体、厚垣孢子和分生孢子。目前P.chrysosporium的发酵生产主要采用液体发酵菌丝生产漆酶、过氧化物酶等代谢产物，或者采用固体培养生产分生孢子制备分生孢子制剂。由于其菌丝或分生孢子不易保存，在保存和运输过程中，菌剂中有效微生物大量死亡或活性降低，导致产品的效力减小或功能下降，限制了 P.chrysosporium菌剂的大规模生产应用。厚垣孢子是真菌产生的一种细胞壁加厚的具有抵抗能力的孢子，能抗御不良外界环境，如高温、低温、紫外线、pH值和其他化学物质,产品的货架期长,易于保存。因此开发P.chrysosporium的厚垣孢子制剂，对于P.chrysosporium的商品化开发利用具有重要意义。CN102140425A公开了一种黄孢原毛平革菌厚垣孢子的培养方法，但该方法采用摇瓶培养发酵P.chrysosporium,菌丝团需要冷冻后研磨处理制备菌剂,该方法的发酵培养仅为摇瓶水平，从摇瓶到大罐的不断放大生产过程中还有许多技术难题，且该方法操作步骤复杂，与大规模生产的技术要求有一定的距离。因此，亟需开发一种操作简单且适用于发酵罐大规模生产黄孢原毛平革菌厚垣`孢子的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术制备黄孢原毛平革菌的厚垣孢子操作步骤复杂、不适于大规模生产的缺陷，提供一种操作方法简单且可大规模生产黄孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法，一种制备黄孢原毛平革菌的厚垣孢子制剂的方法，以及利用该方法得到的黄孢原毛平革菌的厚垣孢子制剂。为了实现上述目的，一方面，本专利技术提供了一种制备黄孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法，其中，该方法包括如下步骤:(I)将黄孢原毛平革菌的发酵种子接种到发酵培养基中；所述发酵种子为黄孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌丝体；(2)将接种了所述黄孢原毛平革菌的发酵种子的培养基进行液体深层发酵，以产生黄孢原毛平革菌的厚垣孢子；其中，步骤(1)中，所述发酵培养基含有0.5-3.5重量％的碳水化合物、0.1-2重量％的酵母粉、2-8重量％的玉米浆、0.05-1重量％的CaC03、0.005-0.05重量％的ZnS04、0.005-0.05重量%的MgS04、0.01-0.05重量%的MnSO4和余量的水；步骤(2)中，所述液体深层发酵的条件包括:发酵的温度为25_31°C，通气量为1:0.5-1体积:(体积.分钟)，搅拌速度为150-200rpm，发酵的时间为100-120小时。第二方面，本专利技术提供了一种制备黄孢原毛平革菌的厚垣孢子制剂的方法，其中，该方法包括:(I)按照本专利技术提供的方法制备含有黄孢原毛平革菌的厚垣孢子的发酵液；(2)将所述含有黄孢原毛平革菌的厚垣孢子的发酵液与助滤剂混合，得到混合后的物料；(3)将步骤(2)中所述的混合后的物料进行固液分离，得到含有黄孢原毛平革菌的厚垣孢子制剂。第三方面，本专利技术提供了如上所述的方法制备的黄孢原毛平革菌的厚垣孢子制剂。通过上述技术方案，实现了操作方法简单且可大规模生产黄孢原毛平革菌的厚垣孢子的目的。本专利技术的其他特 征和优点将在随后的【具体实施方式】部分予以详细说明。【具体实施方式】以下对本专利技术的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的【具体实施方式】仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。第一方面，本专利技术提供了一种制备黄孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法，其中，该方法包括如下步骤:(I)将黄孢原毛平革菌的发酵种子接种到发酵培养基中；所述发酵种子为黄孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌丝体；(2)将接种了所述黄孢原毛平革菌的发酵种子的培养基进行液体深层发酵，以产生黄孢原毛平革菌的厚垣孢子；其中，步骤(1)中，所述发酵培养基含有0.5-3.5重量％的碳水化合物、0.1-2重量％的酵母粉、2-8重量％的玉米浆、0.05-1重量％的CaC03、0.005-0.05重量％的ZnS04、0.005-0.05重量%的MgS04、0.01-0.05重量%的MnSO4和余量的水；步骤(2)中，所述液体深层发酵的条件包括:发酵的温度为25_31°C，通气量为1:0.5-1体积:(体积.分钟)，搅拌速度为150-200rpm，发酵的时间为100-120小时。优选的，步骤(1)中，所述发酵培养基含有1-1.5重量％的碳水化合物、0.5-1重量%的酵母粉、3-5重量%的玉米浆、0.1-0.5重量%的CaC03、0.01-0.02重量%的ZnSO4'0.01-0.03 重量 ％ 的 MgSO4 和 0.02-0.04 重量 ％ 的 MnS04。本专利技术中，步骤(1)中所述的发酵培养基中含有的碳水化合物为本领域常规的各种可以为培养基提供碳源的碳水化合物，优选的，所述碳水化合物为淀粉、葡萄糖和蔗糖中的一种或多种；所述发酵培养基的PH值为培养基的自然pH值，优选为6.5-6.8。本专利技术中，所述黄孢原毛平革菌的来源没有特别的限制，例如，可以在工业微生物菌种保藏管理中心通过商购获得，例如，编号可以为CICC40299，也可以为CICC40719。根据本专利技术，所述黄孢原毛平革菌的发酵种子的接种量可以为常规的接种量，优选以每升所述发酵培养基为基准，所述发酵种子的接种量为5-10体积％。其中，步骤(2)中，所述液体深层发酵的操作可以按照常规的液体深层发酵方法进行，优选情况下，所述液体深层发酵的操作包括如下步骤:(I)接种步骤，在所述接种步骤中，将如上所述的黄孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌丝体接种到液体培养基中；(2)发酵步骤，在所述发酵步骤中，将接种了黄孢原毛平革菌分生孢子和/或菌丝体的液体培养基在发酵罐中进行发酵。其中，所述黄孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌丝体可以使用常规的斜面培养法获得，例如，可以将如上所述的黄孢原毛平革菌的菌丝体接种在PDA培养基(含有马铃薯180-220g/L,葡萄糖 18-22g/L，琼脂 10_25g/L，pH 值 6.8-7.0 )上，在 29-31V 下培养 5-7 天，即可得到大量附着在培养基上的分生孢子和/或菌丝体，可以将斜面培养结束的培养基挖块以得到用于接种的分生孢子和/或菌丝体。其中，也可以将斜面培养结束的培养基挖块并接种于液体培养基中扩大培养，得到扩大培养的菌丝体，将扩大培养的菌丝体作为用于发酵生产的接种体。所述扩大培养的方法为本领域技术人员所公知，例如，可以将斜面培养结束的培养基挖块并接种于摇瓶培养基(含有淀粉5-15g/L、葡萄糖5-15g/L、酵母粉3-7g/L、CaC033-5g/L，pH值 6.5-6.8本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备黄孢原毛平革菌厚垣孢子的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）将黄孢原毛平革菌的发酵种子接种到发酵培养基中；所述发酵种子为黄孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌丝体；（2）将接种了所述黄孢原毛平革菌的发酵种子的发酵培养基进行液体深层发酵，以产生黄孢原毛平革菌的厚垣孢子；其中，步骤（1）中，所述发酵培养基含有0.5?3.5重量%的碳水化合物、0.1?2重量%的酵母粉、2?8重量%的玉米浆、0.05?1重量%的CaCO3、0.005?0.05重量%的ZnSO4、0.005?0.05重量%的MgSO4、0.01?0.05重量%的MnSO4和余量的水；步骤（2）中，所述液体深层发酵的条件包括：发酵的温度为25?31℃，通气量为1:0.5?1体积:(体积·分钟)，搅拌速度为150?200rpm，发酵的时间为100?120小时。
【技术特征摘要】
1.一种制备黄孢原毛平革菌厚垣孢子的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤: (1)将黄孢原毛平革菌的发酵种子接种到发酵培养基中；所述发酵种子为黄孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌丝体； (2)将接种了所述黄孢原毛平革菌的发酵种子的发酵培养基进行液体深层发酵，以产生黄孢原毛平革菌的厚垣孢子； 其中， 步骤(1)中，所述发酵培养基含有0.5-3.5重量％的碳水化合物、0.1-2重量％的酵母粉、2-8重量％的玉米浆、0.05-1重量％的CaC03、0.005-0.05重量％的ZnS04、0.005-0.05重量%的MgS04、0.01-0.05重量%的MnSO4和余量的水； 步骤(2)中，所述液体深层发酵的条件包括:发酵的温度为25-31°C，通气量为1:0.5-1体积:(体积.分钟)，搅拌速度为150-200rpm，发酵的时间为100-120小时。2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述发酵培养基含有1-1.5重量％的碳水化合物、0.5-1重量％的酵母粉、3-5重量％的玉米浆、0.1-0.5重量％的CaC03、0.01-0.02 重量 ％ 的 ZnS04、0.01-0.03 重量 ％ 的 MgSO4 和 0.02-0.04 重量 ％ 的 MnSO4。3.根据权利要求1或...
【专利技术属性】
技术研发人员：李梅，蒋细良，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：
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