一种蛹虫草子囊孢子的收集和保存方法技术

本发明专利技术提供了一种蛹虫草子囊孢子的收集和保存方法，收集方法包括如下步骤：将沙子放入能封口的多孢分离收集容器中，灭菌、干燥；选用蛹虫草子囊果发育成熟的子实体，放入有沙子的多孢分离收集容器中；振荡多孢分离收集容器，收集含有弹射出的成熟的子囊孢子和未弹射出的成熟的子囊孢子的沙子。将收集到的沙子置于干燥无菌容器中密封，室温避光或冰箱冷藏保存。本发明专利技术提供的收集方法操作简单、提高了子囊孢子的收集率，保存的子囊孢子活化后能够保留蛹虫草原始亲本的遗传性状，并用于筛选抗逆新品种。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛹虫草栽培
，具体地，涉及。
技术介绍
蛹虫草Cordyceps militaris (L.ex Fr)Link,又名北冬虫夏草、北虫草，寄生在鳞翅目、鞘翅目、双翅目等昆虫蛹体上。生长在低海拔的平原地域，主要分布在东北、华北、西北等地。现代研究表明，蛹虫草含有虫草素(3’_脱氧腺苷)、虫草酸(D-甘露醇)、腺苷、虫草多糖、麦角留醇、超氧化物歧化酶(S0D)、硒(Se)等化学成分。具有提高人体免疫功能、抗癌、抗菌、抗疲劳、抗衰老、抗惊厥、耐缺氧、镇静、壮阳固肾等作用。同时还具有减肥、瘦身、美容等功效。近年来，很多研究都表明，人工栽培的蛹虫草化学成分及药理作用与冬虫夏草相似，但价格却远远低于冬虫夏草，因此，蛹虫草的开发应用具有极大的潜在市场。人工培养蛹虫草要得到子实体，关键是该蛹虫草菌株要有形成子实体的能力，不同菌株所具备的遗传背景是不一样的，所以它们具备形成的子实体的能力有差异。然而，在实际生产中，即使是优势蛹虫草菌株，随着菌种传代、转接次数的增加或保藏时间的延长，菌种资源极易退化。孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。目前的孢子分离法主要有:(一)单孢分离法:是每次或每支试管只取一个担孢子，让它萌发 成菌丝体来获得纯菌种的方法。单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。(二)多孢分离法是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。具体操作方法，有以下几种:1.种菇孢子弹射法:选择适应性强的八九分成熟的种菇，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12~20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。还可用孢子采集器收集孢子。按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。移入20°C左右恒温箱培养。2.褶上涂抹法:选择成熟的种菇，用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划线接种。3.钩悬法:取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片(黑木耳、毛木耳、白木耳)，用无菌不锈钢丝(或铁丝、棉线等其他悬挂材料)悬挂于三角瓶内的培养基的上方，勿使接触到培养基或四周瓶壁。置适宜温度下培养、转接即可。4.贴附法:将成熟的菌褶或耳片取一小块，用溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊等贴附在配管斜面培养基正上方的试管壁上。经6~12小时的培养，待孢子落在斜面上，立即把孢子连同部分琼脂培养基移植到新的试管中培养即可。孢子分离得到的母种、进一步提纯复壮，当母种定植一周左右，菌丝布满斜面时，选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、无感染杂茵的母种试管，进而转管扩大。孢子分离得到的母种，必须通过出菇试验，鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。上述方法存在两个不足:第一，操作复杂。第二，只能收集成熟的被弹射出的孢子，而成熟的却没被弹射出的成熟孢子却不能收集到。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，以克服上述不足。为了实现本专利技术目的，本专利技术的一种蛹虫草子囊孢子的收集方法，其包括如下步骤:I)将沙子放入能封口的多孢分离收集容器中，灭菌、干燥；2)蛹虫草子囊果发育成熟的子实体放入步骤I)中的多孢分离收集容器中；3)振荡多孢分离收集容器，收集含有弹射出的成熟的子囊孢子和未弹射出的成熟的子囊孢子的沙子。其中，所述步骤I)沙子为中性干燥沙子，其通过如下方法获得:a)将河沙过60目筛，弃去大颗粒及杂质；b)再用80目过筛，弃去细沙，收集未过筛的沙子；c )去除沙子中的铁质；`d)用10%_20%的盐酸浸泡沙子24h后，倒去盐酸，用水洗泡至中性，烘干沙子。进一步地，步骤c)中可使用吸铁石除去沙子中的铁质。本专利技术使用的多孢分离收集容器，可以为任意形状的可密封的玻璃容器或金属容器。其中，步骤I)所述的沙子放入能封口的多孢分离收集容器中的放置方法是将等质量的沙子与蒸馏水混合后，按体积比1:3-10置于多孢分离收集容器中。其中，步骤I)所述的灭菌是121°C,湿热灭菌30min。其中，步骤I)所述的干燥是80°C干燥24_48h。上述灭菌和干燥的步骤中，多孢分离收集容器均严格封口进行灭菌和干燥。其中，步骤2)蛹虫草子囊果发育成熟的子实体优选l_2cm子囊果丰富的子实体头部，放入步骤I)中的多孢分离收集容器中，室温放置10-30天，至子实体完全干燥。其中，步骤2)所述的子实体放入多孢分离收集容器中，放入的子实体条数与容器中沙子的个数质量比为I条:2.5-5g。在本专利技术提供的蛹虫草子囊孢子收集方法的步骤2)中，室温放置10-30天，直至子实体完全干燥。在这期间，一部分成熟的子囊果会自然弹射子囊孢子到细沙上，有部分成熟的子囊果尚未弹射子囊孢子就干燥了，还有一部分未完全成熟的子囊果没有进入弹射时期，子囊孢子仍然保留在干燥的子囊果内。其中，步骤3)所述的振荡是将多孢分离收集容器以80-200r/min转速振荡24-48h。本专利技术提供的一种蛹虫草子囊孢子的收集方法还包括将干燥的子实体取出。本专利技术还提供一种蛹虫草子囊孢子的保存方法，将上述方法获得的含有弹射出的成熟的子囊孢子和未弹射出的成熟的子囊孢子的沙子置于干燥无菌容器中密封保藏。进一步地，本专利技术保存蛹虫草子囊孢子的保藏条件为室温避光或0_6°C冷藏。本专利技术提供了蛹虫草子囊孢子收集方法在蛹虫草育种中的应用。本专利技术利用细沙的摩擦作用，当干燥的成熟的子囊果和未成熟的子囊果受到到细沙的摩擦作用从而破碎并释放其中的子囊孢子，落入沙子载体中。通过收集肉眼可视的沙子，从而收集到肉眼不可见的蛹虫草子囊孢子，因此本方法不仅能够收集到弹出的子囊孢子，还能收集到未弹出的子囊孢子，子囊孢子的收集率达到100%，提高了子囊孢子的收集效率。而现有技术中采用弹射方法收集的子囊孢子只是子囊果成熟后弹射出的部分子囊孢子，子囊孢子数量不到子实体子囊果中所有子囊孢子总量的1%。本专利技术进一步将干燥的子实体取出，将子囊孢子活化或保存备用，最终实现了蛹虫草子囊孢子的分离、收集和保藏的目的。本专利技术提供的蛹虫草子囊孢子收集方法操作简单，节省人力物力，同时提高了子囊孢子的收集率，提供的蛹虫草子囊孢子保存方法能在2-4年内有效保持子囊孢子的生物活性，保持了原始亲本的遗传性状，为选育新菌种提供有效方法，具有广泛的应用前景。【具体实施方式】以下实施例进一步说明本专利技术的内容，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1蛹虫草子实体的培养1、菌种:采用自主筛选获得的菌株编号为HX-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛹虫草子囊孢子的收集方法，其特征在于，包括如下步骤：1）将沙子放入能封口的多孢分离收集容器中，灭菌、干燥；2）蛹虫草子囊果发育成熟的子实体放入步骤1）中的多孢分离收集容器中；3）振荡多孢分离收集容器，收集含有弹射出的成熟的子囊孢子和未弹射出的成熟的子囊孢子的沙子。

【技术特征摘要】
1.一种蛹虫草子囊孢子的收集方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)将沙子放入能封口的多孢分离收集容器中，灭菌、干燥； 2)蛹虫草子囊果发育成熟的子实体放入步骤I)中的多孢分离收集容器中； 3)振荡多孢分离收集容器，收集含有弹射出的成熟的子囊孢子和未弹射出的成熟的子囊孢子的沙子。2.如权利要求1所述的收集方法，其特征在于，所述步骤I)沙子为中性干燥沙子，其通过如下方法获得: a)将河沙过60目筛，弃去大颗粒及杂质； b)再用80目过筛，弃去细沙，收集未过筛的沙子； c)去除沙子中的铁质； d)用10%-20%的盐酸浸泡沙子24h后，倒去盐酸，用水洗泡至中性，烘干沙子。3.如权利要求1所述的收集方法，其特征在于，步骤I)所述的沙子放入能封口的多孢分离收集容器中的放置方法 是将等质量的沙子与蒸馏水混合后，按体积比1:3-10置于多孢分离收集容器中。4.如权利要求1所述的收...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡健，
申请(专利权)人：北京中怡远大机电设备有限公司，
类型：发明
国别省市：