本发明专利技术公开了一株枯草芽孢杆菌、发酵方法、粉剂和应用，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Gv-1，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏号：CCTCC NO：M2015766，保藏日期：2015年12月21日。本发明专利技术首次从海滨锦葵块根中分离海滨锦葵块根内生菌，并通过纯化，16S rDNA测序以及形态生理特征分析，确定分离培养的菌株Gv-1为枯草芽孢杆菌。本发明专利技术利用枯草芽孢杆菌发酵液制备枯草芽孢杆菌粉剂，并添加到猪饲料中，结果表明，添加了枯草芽孢杆菌粉剂的猪饲料，能够充分发挥枯草芽孢杆菌Gv-1的作用，促进仔猪的生产性能和对蛋白质、Ca、P的消化吸收，改善仔猪肠道的微生态菌群，使肠道微生态系统处于最佳的平衡状态。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株枯草芽孢杆菌，同时还涉及该枯草芽孢杆菌的发酵方法、含有该枯草芽孢杆菌的粉剂和应用，属于生物工程
技术介绍
海滨锦葵(Kosteletzkyavirginica)是一种耐盐、能利用盐碱地和干旱土壤的抗逆植物，原生长于美国东、南海岸，1992年以后陆续被科学家引入中国。海滨锦葵的种子含有较高的不饱和脂肪酸和较高的蛋白质，其块根含有多糖、皂苷等成分和抗癌活性成分，能提高动物的生产性能和免疫力，具有作为饲料、药等的开发潜力。枯草芽孢杆菌是我国允作料添加的两种芽孢杆菌之一，能够产生氨基糖类、磷脂类、肽类和脂肽类等多种抗生素，已被越来越多的研制成微生物制剂(无毒、无残留、无染色的添加)。枯草芽孢杆菌具有以下优点：(1)枯草芽孢杆菌具有蛋白、脂肪和淀粉等活性，能产生抗菌素，其中脂肽类抗生素(包括伊枯草菌素、泛革素和表面活性素)是枯草芽孢杆菌最重要的抗菌物质。(2)枯草芽孢杆菌在动物肠道内具有较强的生物夺氧能力，这些特性对促进动物营养的消化吸收，提高动物的饲料转化率和疾病防治都有着重要作用，从抗菌机理上看，既可以干扰病原菌的生物合成系统，也可以对病原菌的细胞壁、细胞膜、核酸和蛋白质等直接作用，从而达到促进动物生长的目的。(3)枯草芽孢杆菌对致病性大肠杆菌和沙门氏菌都有一定的抑制作用。(4)枯草芽孢杆菌能够通过增强机体的谷胱甘肽过氧化物酶活性等总抗氧化能力，降低血清及肝脏中丙二醛等氧化终产物的含量，提高畜禽的抗氧化性能。但是，目前在枯草芽孢杆菌的工业化生产中，仍然存在发酵周期长、芽孢形成率低、成本高等问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一株枯草芽孢杆菌，同时还涉及该枯草芽孢杆菌的发酵方法、含有该枯草芽孢杆菌的粉剂和应用，该枯草芽孢杆菌能够提高仔猪的生产性能和吸收性能，调节猪肠道微生物菌群，该枯草芽孢杆菌的发酵方法简单、活菌数多且芽孢形成率高。为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：一株枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)Gv-1，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏号：CCTCCNO：M2015766，保藏日期：2015年12月21日。一种枯草芽孢杆菌的发酵方法，将枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中，恒温振荡培养，至OD600达到1.0，得到枯草芽孢杆菌菌液，再将枯草芽孢杆菌菌液以1％的接种量接种于发酵培养基，37℃发酵24-72h。所述发酵培养基的制备方法为：将海冰锦葵块根提取液和普通肉汤培养基按照体积比4-0.5:1的比例混合，得到混合培养液，再加入混合培养液总重量0.02％的(NH4)2SO4和0.04％的NaOH，调节pH至9.0，121℃高压灭菌30min。所述的海冰锦葵块根提取液的制备方法为：将海滨锦葵块根清洗、干燥并切块，加水煮沸3次，每次30min，过滤，合并三次煮沸滤液即得；其中，每次加水量为海滨锦葵块根重量3倍。一种含有枯草芽孢杆菌的粉剂，所述的粉剂的制备方法包括以下步骤：(1)将枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中，恒温振荡培养，至OD600达到1.0，得到枯草芽孢杆菌菌液，再将枯草芽孢杆菌菌液以1％的接种量接种于发酵培养基，37℃发酵24-72h；(2)将步骤(1)的枯草芽孢杆菌发酵液以12-18％的接种量接种于扩大培养培养基中，35-39℃、150-250r/min发酵48h；(3)将步骤(2)的发酵液加入自动排渣碟式分离机中离心，得到菌泥，将菌泥和菌泥载体按照质量比1:2混合，再送入高效沸腾干燥机中烘干，最后用粉碎机粉碎即得。所述发酵培养基的制备方法为：将海冰锦葵块根提取液和普通肉汤培养基按照体积比4-0.5:1的比例混合，得到混合培养液，再加入混合培养液总重量0.02％的(NH4)2SO4和0.04％的NaOH，调节pH至9.0，121℃高压灭菌30min；所述的海冰锦葵块根提取液的制备方法为：将海滨锦葵块根清洗、干燥并切块，加水煮沸3次，每次30min，过滤，合并三次煮沸滤液即得；其中，每次加水量为海滨锦葵块根重量3倍。所述扩大培养培养基的制备方法为：将海冰锦葵块根提取液、普通肉汤培养基和玉米粉按照体积比8:1:1的比例混合，得到混合培养液，再加入混合培养液总重量0.02％的(NH4)2SO4和0.04％的NaOH，调节pH至9.0，121℃高压灭菌30min。所述扩大培养培养基中还可加入少许植物油作为消泡剂。步骤(3)中发酵液加入自动排渣碟式分离机的流量为400L/h，高效沸腾干燥机的进风温度为70℃，烘干时间为3h。一种含有枯草芽孢杆菌粉剂的猪饲料，所述的猪饲料包括以下重量份的原料：玉米44份、豆粕45份、麦麸10份、枯草芽孢杆菌粉剂0.01-0.03份、预混料1份；所述的预混料为每10千克预混料中含有VA5512U、VD640U、VK32.2U、VE20U、VB1227.6μg、VB25.5mg、D-泛酸14.8mg、烟酸30.3mg、胆碱500mg、铜50mg、铁100mg、锌50mg、锰10mg、碘0.85mg、硒0.25mg。一种枯草芽孢杆菌在促进植物生长和提高植物高盐浓度下抗逆性方面的应用。一种枯草芽孢杆菌在提高猪生产性能、吸收能力和调节肠道菌群方面的应用。本专利技术有益效果1、本专利技术首次从海滨锦葵块根中分离海滨锦葵块根内生菌，并通过纯化，16SrDNA测序以及形态生理特征分析，确定分离培养得到的菌株Gv-1为枯草芽孢杆菌。2、本专利技术的枯草芽孢杆菌Gv-1能够促进植物的生长，提高植物高盐浓度下的抗逆性。3、本专利技术通过正交实验，优化枯草芽孢杆菌的发酵条件，最终确定在菌液接种量1％、发酵温度37℃的条件下，发酵培养基中海滨锦葵块根提取液和普通肉汤培养基体积为4:1，发酵时间72h，活菌数最多，达到1.64×109cfu/ml，芽孢率达到99％。4、本专利技术通过正交实验，再次优化枯草芽孢杆菌在发酵罐中的发酵工艺条件，最终确定在发酵时间相同的条件下，菌种接种量15％、发酵温度37℃、培养基pH9.0、转速250r/min，发酵液中的活菌量最多，达到9.926Log(cfu/mL)。5、本专利技术利用枯草芽孢杆菌发酵液制备枯草芽孢杆菌粉剂，并添加到猪饲料中，结果表明，添加了枯草芽孢杆菌粉剂的猪饲料，能够充分发挥枯草芽孢杆菌Gv-1的作用，促进仔猪的生产性能和对蛋白质、Ca、P的消化吸收，改善仔猪肠道的微生态菌群，使肠道微生态系统处于最佳的平衡状态。...
【技术保护点】
一株枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Gv‑1，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏号：CCTCC NO：M2015766，保藏日期：2015年12月21日。
【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus
subtilis)Gv-1，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保
藏号：CCTCCNO：M2015766，保藏日期：2015年12月21日。
2.一种如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，将枯草芽孢杆菌接
种于LB液体培养基中，恒温振荡培养，至OD600达到1.0，得到枯草芽孢杆菌菌液，再将枯草
芽孢杆菌菌液以1％的接种量接种于发酵培养基，37℃发酵24-72h。
3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基的制
备方法为：将海冰锦葵块根提取液和普通肉汤培养基按照体积比4-0.5:1的比例混合，得到
混合培养液，再加入混合培养液总重量0.02％的(NH4)2SO4和0.04％的NaOH，调节pH至9.0，
121℃高压灭菌30min。
4.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，所述的海冰锦葵块根
提取液的制备方法为：将海滨锦葵块根清洗、干燥并切块，加水煮沸3次，每次30min，过
滤，合并三次煮沸滤液即得；其中，每次加水量为海滨锦葵块根重量3倍。
5.一种含有如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的粉剂，其特征在于，所述的粉剂的制备
方法包括以下步骤：
(1)将枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中，恒温振荡培养，至OD600达到1.0，得到
枯草芽孢杆菌菌液，再将枯草芽孢杆菌菌液以1％的接种量接种于发酵培养基，37℃发酵
24-72h；
(2)将步骤(1)的枯草芽孢杆菌发酵液以12-18％的接种量接种于扩大培养培养基中，
35-39℃、150-250r/min发酵48h；
(3)将步骤(2)...
【专利技术属性】
技术研发人员：高天增，郭予琦，张天勇，高鹏飞，郭小云，符锋，管军军，毛晶晶，李梦君，
申请(专利权)人：河南广安生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。