一种测定噁喹酸含量的液相色谱分析方法技术

本发明专利技术公开了一种测定噁喹酸含量的液相色谱分析方法，属于医药化工质量检测技术领域。该方法包括：将待测噁喹酸样品溶于二甲基甲酰胺与甲醇按体积比2:3～5的混合溶剂中得到样品溶液；采用外标法测定样品溶液中噁喹酸的含量，其色谱条件为：色谱柱为C18柱，流动相：乙腈、添加有机碱的有机改性剂和添加有机酸的水按体积比为10～30：5～20:60～90组成的混合溶液，流速：0.3～1.2mL/min，检测波长：300～350nm，柱温：35～45℃，进样量：5～20μL。采用本发明专利技术提供的方法可使噁喹酸与杂质A、B、C得到有效分离，准确测定出噁喹酸的含量，方法简便、可靠、迅速、灵敏度高，重现性和专属性好。

【技术实现步骤摘要】
一种测定Π惡喹酸含量的液相色谱分析方法
本专利技术属于医药化工质量检测
，特别涉及。
技术介绍
噁喹酸又称氧环噁喹酸、奥基索林酸、奥林酸(Oxilinic acid)，英文缩写0A，喹诺酮类的第二代产品，为白色带黄白色柱状结晶或结晶性粉末，无臭无味，熔点320°C，几乎不溶于水和乙醇，能溶于蚁酸和氢氧化钠溶液，不吸潮，对热、湿、光比较稳定。它具有较强的广谱性，对革兰氏阴性菌和一部分阳性菌有较强的抗菌效力，并与抗生素无交叉耐药性，但对真菌与结核杆菌没有抗菌作用，具有用量低，抑菌效果好等优点，国外水产养殖者认为它是治疗水产动物疾病较为理想的药物之一，对鳗弧菌、嗜水气单胞杆菌等鱼类病原菌有相当强的抗菌活性。目前实施的进口兽药质量标准和欧洲药典中，噁喹酸的含量测定均采用非水滴定法进行测定，由于化学合成法制备的噁喹酸中含有少量的酸性杂质，会干扰酸碱指示剂的显色，并且酸性杂质的存在，会导致测定结果比实际偏高。另外，在现有文献中虽然公开了一些采用液相色谱法测噁喹酸含量的方法，但是其测量范围小，适用于低含量噁喹酸的测量，并不适于测量化学合成法制备的噁喹酸产品含量且测量结果不理想。如现有文献公开了一种水产品中噁喹酸残留量的检测技术研究；具体地，采用液相色谱法进行测量，高效液相色谱条件为色谱柱采用反相C18柱，荧光检测器激发波长为325nm，发射波长为369nm，流动相为0.02mol/L磷酸+乙腈+四氢呋喃(体积比为69: 16: 15)，流速为0.8ml/min。噁喹酸标准曲线线性范围在10?200ng/mL。不同浓度水平下，噁喹酸的回收率为79%?93%，变异系数小于10%，检测限为10μ g/kg。
技术实现思路
本专利技术的目的在于弥补上述现有技术之不足，提供了 一种测定噁喹酸含量的液相色谱(HPLC)分析方法，采用该方法能够使噁喹酸与杂质A、B、C有效分离，准确测定噁喹酸产品的含量。所述技术方案如下:本专利技术实施例提供了，该方法包括以下步骤:(I)待测样品溶液的制备:将待测噁喹酸样品于75-85°C (水浴加热)溶于二甲基甲酰胺与甲醇按体积比2:3?5的混合溶剂中，配制成浓度为0.1?0.5mg/mL的溶液，用0.22 μ m?0.45 μ m的微孔滤膜过滤得到样品溶液。(2)样品检测:采用外标法测定步骤(I)得到的样品溶液中噁喹酸的含量，其色谱条件为:色谱柱为C18柱,流动相:乙腈、添加有机碱(有机碱占流动相总体积的百分比为0.02-0.05%)的有机改性剂和添加有机酸(有机酸占流动相总体积的百分比为0.2-0.5%)的水按体积比为10?30:5?20:60?90组成的混合溶液，流速:0.3?1.2mL/min，检测波长:300?350nm，柱温:35?45°C，进样量:5?20μ L。其中，有机碱包括三正己胺、三正庚胺或三正辛胺等，有机改性剂包括甲醇或四氢呋喃等，有机酸包括乙酸、三氟乙酸或柠檬酸等。优选地，在前述步骤(I)中，二甲基甲酰胺与甲醇的体积比为2:3。优选地，在前述步骤(I)中，样品溶解温度为80°C。其中，在前述步骤(2)中，C18柱为固定相为十八烷基键合硅胶的色谱柱，柱长150?250mmX内径4.6mmX填料粒径3?10 μ m。优选地，在前述步骤(2)中，有机改性剂为四氢呋喃。优选地，在前述步骤(2)中，有机碱为三正辛胺。优选地，在前述步骤(2)中，有机酸为柠檬酸。优选地，在前述步骤(2)中，乙腈、添加有机碱的有机改性剂和添加有机酸的水的体积比为20:10:70。其中，在前述步骤(2)中，有机碱占流动相总体积的百分比为0.03%。其中，在前述步骤(2)中，有机酸占流动相总体积的百分比为0.3%。优选地，在前述步骤(2)中，流动相的流速为0.5mL/min，检测波长为330nm，柱温为 40。。。具体地，本专利技术实施例提供的测定噁喹酸含量的液相色谱分析方法，包括:(I)待测样品溶液和对照品溶液的制备:取适量噁喹酸样品，在二甲基甲酰胺与甲醇按体积比2:3?5的混合溶剂中于80°C水浴中溶解后，配制成浓度为0.1?0.5mg/mL的溶液,用0.22 μ m?0.45 μ m的微孔滤膜过滤；取噁喹酸对照品适量，同法配制，供色谱分析用。(2)样品检测:采用十八烷基键合硅胶为固定相的色谱柱，柱长150?250mmX内径4.6mmX填料粒径3?10 μ m,流动相是由乙腈、添加有机碱(占流动相总体积的百分比为0.03%)的有机溶剂和添加有机酸(占流动相总体积的百分比为0.3%)的水按体积比为10?30:5?20:60?90组成的混合溶液，流速为0.3?1.2mL/min，检测波长为300?350nm，柱温为35?45°C，取步骤(I)制备好的待测样品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，进样量为5?20 μ L，检测后得到谱图。(3)含量计算:根据步骤(2)得到的谱图采用外标法计算待测样品中噁喹酸的含量。由上述技术方案可知，本专利技术是利用十八烷基键合硅胶为固定相的色谱柱，采用液相色谱法使噁喹酸与各杂质得到有效分离，从而准确测定样品中噁喹酸的含量。在优化条件下的结果表明，嚼喹酸在0.05mg/mL?2.5mg/mL范围内有良好的线性关系，RSD为1.66%。本专利技术提供的测量方法简便、可靠、迅速、灵敏度高，重现性好，专属性好，适合于对噁喹酸产品含量的测定。【附图说明】图1为实施例1中噁喹酸含量测定中样品的色谱图，其主峰出峰时间为17.575min，杂质A出峰时间为11.386min，杂质B出峰时间为13.0lOmin，杂质C出峰时间为 15.475min ； 图2为实施例1中噁喹酸含量测定中对照品的色谱图，其主峰出峰时间为17.541min。【具体实施方式】以下通过具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术的保护内容不局限于以下实施例。以下实施例中所用仪器与试药如下:岛津Lc20A高效液相色谱仪，紫外检测器，LC-solution色谱工作站；十八烷基键合硅胶为固定相的色谱柱(柱长150?250mmX内径4.6mmX填料粒径3?10 μ m),电子分析天平,水浴锅。1I惡喹酸对照品为Sigma公司所生产，含量为98.0%，噁喹酸样品为湖北美天生物科技有限公司自制；乙腈、四氢呋喃、三正辛胺为进口色谱纯，二甲基甲酰胺、柠檬酸为国产分析纯。实施例1 采用十八烧基键合娃胶为固定相的色谱柱，柱长150mmX内径4.6mmX填料粒径5 μ m,流动相为乙腈:四氢呋喃(含占流动相总体积0.03%的三正辛胺):水(含占流动相总体积0.3%的柠檬酸)=20:10:70，流速为0.5mL/min,检测波长为330nm，柱温为40°C，进样量为10 μ L0分别精密称取20mg噁喹酸样品(批号130801)和对照品，到IOOmL容量瓶中，加入适量二甲基甲酰胺与甲醇的混合溶剂(体积比为2:3)，于80°C水浴中溶解后，再加入上述二甲基甲酰胺与甲醇的混合溶剂稀释至刻度，进样前用0.45 μ m的微孔滤膜过滤，供色谱分析用。取上述样品溶液和对照品溶液，分别注入色谱仪，记录检测时间25min，得到色谱图，其色谱图如图1和图2所示，按外标法计算噁喹酸含量，测的噁喹酸样品含量为97.8%。实施例2 采用十八烧基键合娃胶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定噁喹酸含量的液相色谱分析方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）待测样品溶液的制备：将待测噁喹酸样品于75?85℃溶于二甲基甲酰胺与甲醇按体积比2:3～5的混合溶剂中，配制成浓度为0.1～0.5mg/mL的溶液，用0.22μm～0.45μm的微孔滤膜过滤得到样品溶液；（2）样品检测：采用外标法测定所述样品溶液中噁喹酸的含量，其色谱条件为：色谱柱为C18柱，流动相：乙腈、添加有机碱的有机改性剂和添加有机酸的水按体积比为10～30：5～20:60～90组成的混合溶液，流速：0.3～1.2mL/min，检测波长：300～350nm，柱温：35～45℃，进样量：5～20μL，所述有机碱包括三正己胺、三正庚胺或三正辛胺，所述有机改性剂包括甲醇或四氢呋喃，所述有机酸包括乙酸、三氟乙酸或柠檬酸。

【技术特征摘要】
1.一种测定噁喹酸含量的液相色谱分析方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤: (1)待测样品溶液的制备:将待测噁喹酸样品于75-85°C溶于二甲基甲酰胺与甲醇按体积比2:3?5的混合溶剂中，配制成浓度为0.1?0.5mg/mL的溶液，用0.22 μ m?0.45 μ m的微孔滤膜过滤得到样品溶液； (2)样品检测:采用外标法测定所述样品溶液中噁喹酸的含量，其色谱条件为:色谱柱为C18柱，流动相:乙腈、添加有机碱的有机改性剂和添加有机酸的水按体积比为10?30:5?20:60?90组成的混合溶液，流速:0.3?1.2mL/min,检测波长:300?350nm，柱温:35?45°C，进样量:5?20 μ L，所述有机碱包括三正己胺、三正庚胺或三正辛胺，所述有机改性剂包括甲醇或四氢呋喃，所述有机酸包括乙酸、三氟乙酸或柠檬酸。2.根据权利要求1所述的测定噁喹酸含量的液相色谱分析方法，其特征在于:在步骤(O中，所述二甲基甲酰胺与甲醇的体积比为2:3。3.根据权利要求1所述的测定噁喹酸含量的液相色谱分析方法，其特征在于:在步骤(2)中，所述C18柱为固定相为十八烷基键合硅胶的色谱柱，柱长...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭要武，田文敬，徐建义，
申请(专利权)人：湖北美天生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：