用高效液相色谱法测定盐酸屈他维林注射液中有关物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种用高效液相色谱法测定盐酸屈他维林注射液中有关物质的方法，所述方法包括以下步骤：a.配制供试样品溶液：将待测样品用溶剂配制成供试样品溶液；b.检测：以十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填料，以磷酸盐缓冲液作为流动相A、以乙腈作为流动相B、以甲醇作为流动相C，采用梯度洗脱法，检测所述供试样品溶液，检测波长为244nm。使用本申请提供的高效液相色谱法检测盐酸屈他维林原料药成分的方法，能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出盐酸屈他维林原料药中有关物质，有利于提高盐酸屈他维林注射液的产品质量，提高患者用药安全性。

Method for determination of related substances in Drotaverine Hydrochloride Injection in the high performance liquid chromatography

The invention discloses a HPLC method for determination of related substances in Drotaverine Hydrochloride Injection, the method comprises the following steps: preparing A. sample solution: the sample prepared by solvent sample solution; B. detection: Eighteen alkyl silane bonded silica as filler in the column, as of A, phosphate buffer acetonitrile as B, using methanol as mobile phase C mobile phase mobile phase with gradient elution method, detecting the sample solution, the detection wavelength was 244nm. The application provides the use of high performance liquid chromatography method virin API hydrochloride Qu he composition, can be fast and effective, accurate and reliable separation and detection of hydrochloric acid related substances he Qu API vering, is conducive to improving the quality of Drotaverine Hydrochloride Injection's products, improve patient safety.

【技术实现步骤摘要】
用高效液相色谱法测定盐酸屈他维林注射液中有关物质的方法
本专利技术涉及药物分析
，尤其是涉及一种用高效液相色谱法测定盐酸屈他维林注射液中有关物质的方法。
技术介绍
盐酸屈他维林(Drotaverinehydrochloride)，化学名称为：1-{(3,4-二乙氧基苯基)亚甲基}-6,7-二乙氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐，商品名为诺仕帕(RNO-SPA)，是由法国赛诺菲公司在匈牙利的合资公司Chinoin药厂研制开发的一种新型解痉挛药。该药是异喹啉类衍生物，与传统山莨菪碱，阿托品等抗胆碱能解除痉挛药不同，它直接作用于平滑肌细胞，其舒张平滑肌的作用机制为：作用于平滑肌细胞表面，改变细胞膜电位和通透性；抑制磷酸二酯酶，增加肌细胞内环磷腺苷(cAMP)水平；抑制细胞内最初的钙离子反应，平滑肌舒张，解除痉挛。其特点是：(1)作用全面，疗效持久，盐酸屈他维林对平滑肌痉挛性收缩的每一环节都起作用，特别是高张力平滑肌有特效，其消除半衰期为9-11h，故有效期长；(2)不良反应小，盐酸屈他维林不影响自主神经系统，对胃肠道正常的平滑肌无影响，没有M受体拮抗剂的不良反应。该药的适应症包括冠脉功能不全、闭塞性动脉内膜炎、心绞痛、胃肠道平滑肌痉挛、肠易激综合征、胆绞痛、肾绞痛和泌尿道痉挛、子宫痉挛、痛经等。其优点在于无严重心血管反应、无副交感神经阻滞、无瞳孔放大、无青光眼的急性发作、无尿道膀胱的扩张，起效快，不良反应少。盐酸屈他维林原料药的成分是明确的，主要包含盐酸屈他维林及2种相关杂质(乙基罂粟碱、屈他维林酮)，将这2种物质彻底的快速的分离十分重要。盐酸屈他维林注射液国家局标准(YBH17602006)有关物质高效液相分析方法参照盐酸屈他维林注射液复核标准JX20000051、盐酸屈他维林片质量标准WS-2127(X-184)-2002制定。国家局标准(YBH17602006)，采用磷酸盐缓冲液(pH3.3±0.05)-乙腈-甲醇等度洗脱，分析时间周期较短，主峰约5～7分钟出峰，有后拖尾现象，可能存在未知杂质与主峰未有效分离的情况，各已知杂质分离较好，但盐酸屈他维林注射液经提高灭菌工艺条件，有3个未知杂质降解明显，分离不理想，在保留时间约3～5分钟之间某些杂质相互重叠，测定不准确，不能达到有关物质检查要求，不利于实际推广应用。因此，需要对盐酸屈他维林注射液有关物质分析方法进行改进，建立一个快速、有效的检测方法，在灭菌工艺由100℃灭菌20分钟，变为121℃灭菌15分钟后，能区分并检测出盐酸屈他维林原料药内的所有相关物质，有利于提高盐酸屈他维林注射液的产品质量，提高患者用药安全性。针对上述问题，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的是探索盐酸屈他维林有关物质高效液相色谱分析的各种条件，提供一个简便、可靠的盐酸屈他维林有关物质高效液相色谱分析方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种用高效液相色谱法测定盐酸屈他维林注射液中有关物质的方法，该方法包括如下步骤：(1)配制供试样品溶液：取盐酸屈他维林用溶剂配制成供试样品溶液；(2)配制对照品溶液：取盐酸屈他维林、乙基罂粟碱和屈他维林酮用溶剂配制成对照品溶液；(3)配制系统适用性溶液：取盐酸屈他维林、乙基罂粟碱和屈他维林酮用溶剂配制成系统适用性溶液；(4)进行系统适用性实验；(5)进行检测灵敏度实验；用对照品溶液调节高效液相色谱仪的检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10-25％；(6)按照下列高效液相色谱条件进行测定：流动相：以磷酸盐缓冲液作为流动相A，以乙腈为流动相B，以甲醇为流动相C；所述磷酸盐缓冲液为0.1％磷酸水溶液用三乙胺调节至pH＝3.3±0.05；紫外检测器：检测波长为200-400nm；色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速：0.5-2.0mL/min；柱温：20-60℃；(7)按外标法，计算有关物质的含量。优选地，所述的紫外检测器的检测波长为200-300nm，更优选的为244nm。优选地，所述流速为1.0mL/min；所述柱温为30-50℃，更优选地为40℃。优选地，所述磷酸盐缓冲液由0.1％磷酸水溶液用三乙胺调节pH3.3±0.05后制成。优选地，所述供试样品溶液的配制具体包括配制含盐酸屈他维林0.8mg/mL的溶液，所述溶液的溶剂为流动相A、甲醇和乙腈形成的混合溶剂，所述混合溶剂为将甲醇和乙腈按体积比2:1混合后的混合液再与流动相A按体积比1:9混合。优选地，所述对照品溶液的配制具体包括配制含盐酸屈他维林、乙基罂粟碱和屈他维林酮的溶液，所述溶液中盐酸屈他维林的浓度为4.0μg/mL；乙基罂粟碱的浓度为1.6μg/mL；屈他维林酮的浓度为4.0μg/mL；将盐酸屈他维林、乙基罂粟碱和屈他维林酮先用甲醇与乙腈体积比为2:1的混合液溶解，然后加入流动相A、甲醇和乙腈形成的混合溶剂，所述混合溶剂为将甲醇和乙腈按体积比2:1混合后的混合液再与流动相A按体积比1:9混合。优选地，所述系统适用性溶液的配制具体包括配制含盐酸屈他维林、乙基罂粟碱和屈他维林酮的溶液，所述溶液中盐酸屈他维林的浓度为0.8mg/mL；乙基罂粟碱的浓度为1.6μg/mL；屈他维林酮的浓度为4.0μg/mL；将盐酸屈他维林、乙基罂粟碱和屈他维林酮先用甲醇与乙腈体积比为2:1的混合液溶解，然后加入流动相A、甲醇和乙腈形成的混合溶剂，所述混合溶剂为将甲醇和乙腈按体积比2:1混合后的混合液再与流动相A按体积比1:9混合。优选地，所述系统适用性试验是指取系统适用性溶液20μL注入液相色谱仪，盐酸屈他维林与乙基罂粟碱的分离度大于3.0，各杂质峰之间分离度符合要求，理论塔板数按盐酸屈他维林计算，不低于3000。优选地，以流动相A、流动相B和流动相C进行梯度洗脱；所述的梯度为：本专利技术的有益效果如下：本专利技术立足于高效液相色谱分析方法，针对现有技术存在的分离不彻底、峰形拖尾严重、包峰等缺点，采用新的缓冲液体系以及流动相比例，使杂质能够完全分离，解决了现有技术的相关问题；且本专利技术提供的方法经专属性、灵敏度等方法学研究及验证，其验证结果均在可接受范围；本专利技术同现行标准进行专属性对比研究，证明其方法更能有效地控制盐酸屈他维林注射液有关物质；本专利技术方法还具有下述有益效果，1.流动相配制较为简单易操作；2.能够有效分离杂质，主成分无拖尾，检出的杂质种类、数量均高于国家局标准(YBH17602006)方法，检测准确度高，提高产品的安全性，方法科学、可靠，可控；3.操作简便，适于实际应用和推广。附图说明图1示出了本申请比较例1提供的检测结果的HPLC图谱；图2示出了本申请比较例2提供的检测结果的HPLC图谱；图3示出了本申请实施例1提供的检测结果的HPLC图谱；图4示出了本申请实施例2提供的检测结果的HPLC图谱；图5示出了本申请实施例3提供的检测结果的HPLC图谱；图6A示出了本申请比较例3提供的检测结果的HPLC图谱；图6B示出了本申请实施例4提供的检测结果的HPLC图谱；图7A示出了本申请比较例4提供的检测结果的HPLC图谱；图7B示出了本申请实施例5提供的检测结果的HPLC图谱；图8A示出了本申请比较例5提供的检测结果的HPLC图谱；图8B示出了本申请实施例6提供的检测结果的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用高效液相色谱法测定盐酸屈他维林注射液中有关物质的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)配制供试样品溶液：取盐酸屈他维林注射液用溶剂配制成供试样品溶液；(2)配制对照品溶液：取盐酸屈他维林、乙基罂粟碱和屈他维林酮用溶剂配制成对照品溶液；(3)配制系统适用性溶液：取盐酸屈他维林、乙基罂粟碱和屈他维林酮用溶剂配制成系统适用性溶液；(4)进行系统适用性实验；(5)进行检测灵敏度实验；用对照品溶液调节高效液相色谱仪的检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10‑25％；(6)按照下列高效液相色谱条件进行测定：流动相：以磷酸盐缓冲液作为流动相A，以乙腈为流动相B，以甲醇为流动相C；所述磷酸盐缓冲液为0.1％磷酸水溶液用三乙胺调节至pH＝3.3±0.05；紫外检测器：检测波长为200‑400nm；色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速：0.5‑2.0mL/min；柱温：20‑60℃；(7)按外标法，计算有关物质的含量。

【技术特征摘要】
1.一种用高效液相色谱法测定盐酸屈他维林注射液中有关物质的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)配制供试样品溶液：取盐酸屈他维林注射液用溶剂配制成供试样品溶液；(2)配制对照品溶液：取盐酸屈他维林、乙基罂粟碱和屈他维林酮用溶剂配制成对照品溶液；(3)配制系统适用性溶液：取盐酸屈他维林、乙基罂粟碱和屈他维林酮用溶剂配制成系统适用性溶液；(4)进行系统适用性实验；(5)进行检测灵敏度实验；用对照品溶液调节高效液相色谱仪的检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10-25％；(6)按照下列高效液相色谱条件进行测定：流动相：以磷酸盐缓冲液作为流动相A，以乙腈为流动相B，以甲醇为流动相C；所述磷酸盐缓冲液为0.1％磷酸水溶液用三乙胺调节至pH＝3.3±0.05；紫外检测器：检测波长为200-400nm；色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速：0.5-2.0mL/min；柱温：20-60℃；(7)按外标法，计算有关物质的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的紫外检测器的检测波长为200-300nm，更优选的为244nm。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流速为1.0mL/min；；所述柱温为30-50℃，更优选地为40℃。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液由0.1％磷酸水溶液用三乙胺调节pH3.3±0.05后制成。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试样品溶液的配制具体包括配制含盐酸屈他维林0.8mg/mL的溶液，所述溶液的溶剂为流动相A、甲醇和...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚青松，秦雄剑，贾志祥，黄坤，
申请(专利权)人：江苏联环药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32