一种中药组合物制剂的指纹图谱的建立方法技术

本发明专利技术提供一种中药组合物制剂的指纹图谱建立方法，以及采用所述方法建立的指纹图谱来检测所述中药组合物制剂的成分的方法。所述中药组合物制剂的原料组成为狗脊、黑老虎、千斤拔、蒸桑寄生、蒸女贞子、鸡血藤、金樱子、牛大力、盐水制菟丝子；所述指纹图谱的建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间；其中所述高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相由乙腈-甲醇-0.1％的磷酸水溶液组成，0～150min梯度洗脱；紫外检测波长为230nm。本发明专利技术所述方法建立的指纹图谱以原儿茶酸吸收峰为参考峰，标定了43个共有峰的相对保留时间和相对峰面积。

Method for establishing fingerprint of Chinese medicinal composition preparation

The present invention provides a method for establishing a fingerprint of a Chinese medicinal composition preparation, and a method for detecting the composition of the preparation of the traditional Chinese medicine composition by using the fingerprint established by the method. The Chinese medicinal composition, composition of raw materials for Rhizoma cibotii, black tiger, waras, steamed steamed mistletoe, Ligustrum lucidum, Caulis Spatholobi, Rosa laevigata, cattle vigorously, salt water dodder; the establishing method of fingerprint including retention time of various compounds by HPLC detection of the traditional Chinese medicine composition; the HPLC conditions are as follows: Eighteen alkyl silane bonded silica stationary phase; the mobile phase from the aqueous solution of phosphoric acid acetonitrile methanol -0.1%, 0 ~ 150min gradient elution; the UV detection wavelength was 230nm. The fingerprint established by the method adopts the absorption peak of protocatechuic acid as reference peak, and the relative retention time and relative peak area of the 43 common peaks are demarcated.

【技术实现步骤摘要】
一种中药组合物制剂的指纹图谱的建立方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种中药组合物制剂的指纹图谱的建立方法，所述中药组合物为壮腰健肾丸。
技术介绍
中药指纹图谱是一种综合的、可量化的质量检测手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂质量的真实性、优良性和稳定性。中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。因此，中药指纹图谱的研究和建立，对于提高中药质量，促进中药现代化具有重要意义。中药组合物指纹图谱的建立，应以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，体现系统性、特征性和稳定性三个基本原则。才能保证指纹图谱的标准化、规范化、客观化，从而便于推广和应用。高效液相色谱法(HPLC)具有分离效率高，分析速度快，定量精密度高，检测器种类多，稳定性好等特点。不受样品挥发性和热稳定性的限制，样品中大多数成分均可在高效液相色谱仪上进行分析检测，是构建指纹图谱的主要方法之一。2010版《中国药典》收载了中成药品种共计1069个，但是仅收载了高效液相指纹图谱9项，其中中成药仅6项。可见中成药指纹图谱的建立，绝非易事，需要解决众多的技术问题，花费大量的劳动。壮腰健肾丸，由狗脊、鸡血藤、黑老虎等九味中药材组成，具有壮腰健肾，养血，祛风湿的作用，用于肾亏腰痛，膝软无力，小便频数，遗精梦泄，风湿骨痛，神经衰弱。壮腰健肾丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第三册，标准编号：WS3-B-0538-91，标准中仅有显微鉴别、化学鉴别。显然，上述药品标准无法全面表征壮腰健肾丸的化学特征和质量情况。因此，有必要研究如何建立壮腰健肾丸的指纹图谱，从而更好地保证临床用药的质量和治疗效果。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的一个目的在于提供一种中药组合物制剂指纹图谱的建立方法，其中所述中药组合物为壮腰健肾丸。本专利技术利用HPLC-UV技术，建立了壮腰健肾丸指纹图谱共有模式，标定了43个共有峰，其中，确定了5个峰的化学成分归属：原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲和(2′S)-南五味子木质素。经检测，10批样品与共有模式之间相似度均大于0.9。以本专利技术提供的方法稳定性和重现性好，从而提供了比现有技术的检测方法更深层次和更全面的质量评价依据。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用了如下的技术方案：一种中药组合物制剂的指纹图谱建立方法，所述中药组合物以狗脊、黑老虎、千斤拔、蒸桑寄生、蒸女贞子、鸡血藤、金樱子、牛大力、盐水制菟丝子为原料，通过本领域常用的方法，与药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂；所述指纹图谱建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物制剂中化合物的保留时间，其中所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相由A、B和C相组成，其中A相为乙腈，B相为甲醇，C相为体积百分浓度0.05％～0.1％的磷酸水溶液，流速1ml/min，0～150min按照如下程序进行梯度：0～10min，按照体积百分比，A：B：C＝5％：0％：95％匀速地变化为A：B：C＝10％：0％：90％，10～20min，按照体积百分比，A：B：C＝10％：0％：90％，20～65min，按照体积百分比，A：B：C＝10％：0％：90％匀速地变化为A：B：C＝35％：5％：60％，65～70min，按照体积百分比，A：B：C＝35％：5％：60％匀速地变化为A：B：C＝40％：10％：50％，70～95min，按照体积百分比，A：B：C＝40％：10％：50％匀速地变化为A：B：C＝45％：15％：40％，95～130min，按照体积百分比，A：B：C＝45％：15％：40％匀速地变化为A：B：C＝80％：5％：15％，130～150min，按照体积百分比，A：B：C＝80％：5％：15％匀速地变化为A：B：C＝90％：0％：10％；柱温为20℃～40℃；紫外检测波长为210～280nm。优选的，所述C相为体积浓度0.1％的磷酸水溶液。优选的，所述柱温为30℃。优选的，所述检测波长为230nm。优选的，所述指纹图谱建立方法还包括通过以下方法制备供试品溶液：取所述中药组合物制剂5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入极性有机溶剂20～30ml，超声提取、冷浸提取或回流提取，滤过，取续滤液，即得。优选的，所述极性有机溶剂为体积浓度50％～100％的甲醇或体积浓度50％～95％的乙醇；更优选的，所述极性有机溶剂为100％甲醇。优选的，提取方式为超声提取，提取时间40～50min。更优选的，通过如下方法制备所述供试品溶液：取所述中药组合物制剂5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声45min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。优选的，所述指纹图谱建立方法还包括通过如下方法制备对照品溶液：分别精密称取原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲和(2′S)-南五味子木质素对照品，加甲醇制成浓度为原儿茶酸120μg/ml、原儿茶醛130μg/ml、特女贞苷140μg/ml、日本南五味子素甲40μg/ml和(2′S)-南五味子木质素30μg/ml的混合对照品溶液，即得。作为一个优选的实施方式，本专利技术提供所述中药组合物制剂的指纹图谱建立方法，具体的操作步骤包括：1)对照品溶液的制备：分别精密称取原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲和(2′S)-南五味子木质素对照品，加甲醇制成浓度为原儿茶酸120μg/ml、原儿茶醛130μg/ml、特女贞苷140μg/ml、日本南五味子素甲40μg/ml和(2′S)-南五味子木质素30μg/ml的混合对照品溶液，即得；2)供试品溶液的制备：取所述中药组合物制剂5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，超声45min，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，记录150min内的色谱图，得到指纹图谱：色谱柱：PhenomenexLuna5uC18(2)100A色谱柱(规格：250×4.6mm，5μm)；流动相：由A、B和C相组成，其中A相为乙腈，B相为甲醇，C相为体积百分浓度0.05％～0.1％的磷酸水溶液，流速1ml/min，0～150min按照如下程序进行梯度：0～10min，按照体积百分比，A：B：C＝5％：0％：95％匀速地变化为A：B：C＝10％：0％：90％，10～20min，按照体积百分比，A：B：C＝10％：0％：90％，20～65min，按照体积百分比，A：B：C＝10％：0％：90％匀速地变化为A：B：C＝35％：5％：60％，65～70min，按照体积百分比，A：B：C＝35％：5％：60％匀速地变化为A：B：C＝40％：10％：50％，70～95min，按照体积百分比，A：B：C＝40％：10％：50％匀速地变化为A：B本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中药组合物制剂的指纹图谱建立方法，所述中药组合物制剂以狗脊、黑老虎、千斤拔、蒸桑寄生、蒸女贞子、鸡血藤、金樱子、牛大力、盐水制菟丝子为原料，通过本领域常用的方法，与药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂；所述指纹图谱建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间，其中所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相由A、B和C相组成，其中A相为乙腈，B相为甲醇，C相为体积百分浓度0.05％～0.1％的磷酸水溶液，流速1ml/min，0～150min按照如下程序进行梯度：0～10min，按照体积百分比，A：B：C＝5％：0％：95％匀速地变化为A：B：C＝10％：0％：90％，10～20min，按照体积百分比，A：B：C＝10％：0％：90％，20～65min，按照体积百分比，A：B：C＝10％：0％：90％匀速地变化为A：B：C＝35％：5％：60％，65～70min，按照体积百分比，A：B：C＝35％：5％：60％匀速地变化为A：B：C＝40％：10％：50％，70～95min，按照体积百分比，A：B：C＝40％：10％：50％匀速地变化为A：B：C＝45％：15％：40％，95～130min，按照体积百分比，A：B：C＝45％：15％：40％匀速地变化为A：B：C＝80％：5％：15％，130～150min，按照体积百分比，A：B：C＝80％：5％：15％匀速地变化为A：B：C＝90％：0％：10％；柱温为20℃～40℃；紫外检测波长为210～280nm。...

【技术特征摘要】
1.一种中药组合物制剂的指纹图谱建立方法，所述中药组合物制剂以狗脊、黑老虎、千斤拔、蒸桑寄生、蒸女贞子、鸡血藤、金樱子、牛大力、盐水制菟丝子为原料，通过本领域常用的方法，与药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂；所述指纹图谱建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间，其中所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相由A、B和C相组成，其中A相为乙腈，B相为甲醇，C相为体积百分浓度0.05％～0.1％的磷酸水溶液，流速1ml/min，0～150min按照如下程序进行梯度：0～10min，按照体积百分比，A：B：C＝5％：0％：95％匀速地变化为A：B：C＝10％：0％：90％，10～20min，按照体积百分比，A：B：C＝10％：0％：90％，20～65min，按照体积百分比，A：B：C＝10％：0％：90％匀速地变化为A：B：C＝35％：5％：60％，65～70min，按照体积百分比，A：B：C＝35％：5％：60％匀速地变化为A：B：C＝40％：10％：50％，70～95min，按照体积百分比，A：B：C＝40％：10％：50％匀速地变化为A：B：C＝45％：15％：40％，95～130min，按照体积百分比，A：B：C＝45％：15％：40％匀速地变化为A：B：C＝80％：5％：15％，130～150min，按照体积百分比，A：B：C＝80％：5％：15％匀速地变化为A：B：C＝90％：0％：10％；柱温为20℃～40℃；紫外检测波长为210～280nm。2.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，所述C相为体积浓度0.1％的磷酸水溶液；优选的，所述柱温为30℃；优选的，所述检测波长为230nm。3.根据权利要求1或2所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，还包括通过以下方法制备供试品溶液：取所述中药组合物制剂5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入极性有机溶剂20～30ml，超声提取、冷浸提取或回流提取，滤过，取续滤液，即得；优选的，所述极性有机溶剂为体积浓度50％～100％的甲醇或体积浓度50％～95％的乙醇；更优选的，所述极性有机溶剂为100％甲醇；优选的，提取方式为超声提取，提取时间40～50min；更优选的，通过如下方法制备所述供试品溶液：取所述中药组合物制剂5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声45min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。4.根据权利要求1至3中任一项所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，还包括通过如下方法制备对照品溶液：分别精密称取原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲和(2′S)-南五味子木质素对照品，混合，加甲醇制成浓度为原儿茶酸120μg/ml、原儿茶醛130μg/ml、特女贞苷140μg/ml、日本南五味子素甲40μg/ml和(2′S)-南五味子木质素30μg/ml的混合对照品溶液，即得。5.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，具体的操作步骤包括：1)对照品溶液的制备：分别精密称取原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲和2′S)-南五味子木质素对照品，加甲醇制成浓度为原儿茶酸120μg/ml、原儿茶醛130μg/ml、特女贞苷140μg/ml、日本南五味子素甲40μg/ml和(2′S)-南五味子木质素30μg/ml的混合对照品溶液，即得；2)供试品溶液的制备：取所述中药组合物制剂5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，超声45min，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，记录150min内的色谱图，得到指纹图谱：色谱柱：PhenomenexLuna5uC18(2)100A色谱柱(规格：250×4.6mm,5μm)；流动相：由A、B和C相组成，其中A相为乙腈，B相为甲醇，C相为体积百分浓度0.05％～0.1％的磷酸水溶液，流速1ml/min，0～150min按照如下程序进行梯度：0～10min，按照体积百分比，A：B：C＝5％：0％：95％匀速地变化为A：B：C＝10％：0％：90％，10～20min，按照体积百分比，A：B：C＝10％：0％：90％，20～65min，按照体积百分比，A：B：C＝10％：0％：90％匀速地变化为A：B：C＝35％：5％：60％，65～70min，按照体积百分比，A：B：C＝35％：5％：60％匀速地变化为A：B：C＝40％：10％：50％，70～95min，按照体积百分比，A：B：C＝40％：10％：50％匀速地变化为A：B：C＝45％：15％：40％，95～130min，按照体积百分比，A：B：C＝45％：15％：40％匀速地变化为A：B：C＝80％：5％：15％，130～150min，按照体积百分比，A：B：C＝80％：5％：15％匀速地变化为A：B：C＝90％：0％：10％；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；紫外检测波长：230nm；4)共有峰的标定：以原儿茶酸吸收峰为参照峰，共有峰包括原儿茶醛吸收峰、特女贞苷吸收峰、日本南五味子素甲和(2′S)-南五味子木质素吸收峰中的一个或多个，相对保留时间为：原儿茶醛吸收峰：1.384±0.04％，特女贞苷吸收峰：3.729±0.07％，日本南五味子素甲吸收峰：7.854±0.06％，(2′S)-南五味子木质素吸收峰：10.305±0.06％。6.根据权利要求1至5中任一项所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，所述的中药组合物制剂的原料由如下重量份的药材组成：狗脊1876重量份，黑老虎1125重量份，千斤拔450重量份，蒸桑寄生563重量份，蒸女贞子94重量份，鸡血藤1125重量份，金樱子600重量份，牛大力750重量份，盐水制菟丝子94重量份。7.根据权利要求6所述的指纹图谱建立...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨能英，何风雷，彭富全，苏赟，
申请(专利权)人：广州白云山陈李济药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44