一种远志UPLC测定方法技术

本发明专利技术涉及一种远志UPLC测定方法，所述方法包括如下步骤：步骤1、对照品溶液制备：取西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、西伯利亚远志口山酮B、球腺糖A、远志口山酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖，甲醇定容制成混合对照品溶液；步骤2、供试品溶液制备：取远志药材含水低级醇提取后，滤过，得到供试品溶液；步骤3、将对照品溶液和供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算供试品中的有效成分含量。

A method for determination of Polygala tenuifolia UPLC

The invention relates to a method for the determination of Polygala UPLC, the method comprises the following steps: Step 1, standard solution preparation: Siberia A5, Siberia sugar sugar Polygala Polygala A6, Siberia Polygala xanthone B, gland sugar A, Polygala xanthones III and 3,6'- two mustard acyl sucrose, methanol capacity made of mixed standard solution; step 2, for sample preparation: take p.tenuifolia water lower alcohol extraction, filtration, sample solution; step 3, the standard solution and the test solution were injected into the ultra high performance liquid chromatography, get color spectrum, according to the chromatogram test calculation the content of effective components of products.

【技术实现步骤摘要】
一种远志UPLC测定方法
：本专利技术涉及一种中药材的检测方法，特别涉及一种远志UPLC测定方法
技术介绍
:远志为远志科远志属植物远志Polygala.tenuifoliaWilld.或卵叶远志Polygala.sibiricaL.的干燥根，其味苦、辛、温，归心、肾、脾经，具有安神益智、祛痰、消肿之功效，用于心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚等。市售远志药材品质参差不齐，polygalaxanthoneⅢ、3,6'-disinapoylsucrose含量总体偏低，药材质量难以控制。近年来，针对远志质量评价等方面的研究也多为个别成分为指标的含量测定分析。姜勇等开展了远志指纹图谱研究，但所建立的HPLC指纹图谱检测时间为80min，耗时长，损耗试剂多，不利于高通量分析，同时存在共有峰数目较少、缺乏共有峰定性等问题。综上所述，建立一种全面、快速的远志药材质量评价方法很有必要。本专利技术选取了有神经保护、抗抑郁等活性报道的6种成分(sibiricoseA5、sibiricoseA6、sibiricaxanthoneB、glomeratoseA、polygalaxanthoneⅢ、3,6'-disinapoylsucrose)进行同时测定。同时，由于远志药材的化学成分复杂，仅以几种成分来控制药材质量较为片面，远志药材中其他成分同样有可能对药材质量产生影响。因此本专利技术采用指纹图谱进一步对远志质量进行表征和研究，并采用UPLC-Q-TOF质谱仪指认共有峰。本专利技术利用“指纹图谱+多成分定量”方法，对多个主产地的远志药材进行了较全面的快速质量分析，为临床合理使用提供更多科学依据。
技术实现思路
：本专利技术建立了一种远志药材超高效液相色谱(UPLC)多成分含量测定及指纹图谱建立方法。本专利技术提供一种远志药材有效成分的含量检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤1、对照品溶液制备：取西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、西伯利亚远志口山酮B、球腺糖A、远志口山酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖，甲醇定容制成混合对照品溶液；步骤2、供试品溶液制备：取远志药材含水低级醇提取后，滤过，得到供试品溶液；步骤3、将对照品溶液和供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算供试品中的有效成分含量。其中，步骤1所述混合对照品溶液，其中各组分的含量分别为：每1ml含西伯利亚远志糖A535-40ug、西伯利亚远志糖A642-52ug、西伯利亚远志口山酮B20-26ug、球腺糖A25-31ug、远志口山酮Ⅲ24-30ug、3,6'-二芥子酰基蔗糖234-286ug的混合对照品溶液，优选的，西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、西伯利亚远志口山酮B、球腺糖A、远志口山酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖的含量分别为39.8mg/L、47.7mg/L、23.9mg/L、28.2mg/L、27.4mg/L、263mg/L的混合对照品溶液。其中，步骤2所述含水低级醇为甲醇或乙醇的水溶液。所述的提取方法包括回流法或超声波提取法。优选步骤2供试品溶液配制方法如下：取远志药材用30-100％低级醇超声提取10-60分钟或回流提取2-3次每次1-1.5小时。其中的含水低级醇选自30％-100％甲醇或30％-100％乙醇溶液，优选30％-100％甲醇，最佳70％甲醇溶液超声提取30分钟。。步骤3中所述的超高效液相色谱条件：UPLC色谱仪C18色谱柱、流动相酸水-乙腈溶液梯度洗脱、流速0.3-0.4mL/min、检测波长300-330nm、柱温25-35℃。所述的梯度洗脱条件为0～1min，10％乙腈；1～2.5min，10％～14％乙腈；2.5～4min，14％～16％乙腈；4～9min，16％～25％乙腈；9～12min，25％乙腈；12～14min，25％～27％乙腈；14～16min，27％～30％乙腈；16～18min，30％～39.8％乙腈；18～21min，39.8％～40％乙腈；21～23min，40％～60％乙腈；23～24min，60％～100％乙腈；24～26min，100％～10％乙腈。经过测定，所述远志药材中，西伯利亚远志糖A5含量0.4-1.7mg/g、西伯利亚远志糖A6含量0.4-1.6mg/g、西伯利亚远志口山酮B含量0.5-1.5mg/g、球腺糖A含量0.2-0.8mg/g、远志口山酮Ⅲ含量0.3-1.0mg/g、3,6'-二芥子酰基蔗糖含量1.9-6.9mg/g。其中，步骤3、优选UPLCC18色谱柱为T3键合色谱柱，流速0.4mL/min、检测波长320nm、柱温30℃。本专利技术进一步提供一种远志药材超高效液相指纹图谱建立方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：步骤1、供试品溶液制备：取多批次远志药材含水低级醇提取后，滤过，得到供试品溶液；步骤2、将供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图，对所有色谱图相似度评价得到含有37个共有峰的远志药材的参照指纹图谱步骤3、采用质谱分析法；并对37个共有峰进行归属，鉴定出37个共有峰中的33个峰；其中，超高效液相色谱的色谱条件如下：UPLC色谱仪C18色谱柱、流动相酸水-乙腈溶液梯度洗脱、流速0.3-0.4mL/min、检测波长300-330nm、柱温25-35℃。所述的梯度洗脱条件为0～1min，10％乙腈；1～2.5min，10％～14％乙腈；2.5～4min，14％～16％乙腈；4～9min，16％～25％乙腈；9～12min，25％乙腈；12～14min，25％～27％乙腈；14～16min，27％～30％乙腈；16～18min，30％～39.8％乙腈；18～21min，39.8％～40％乙腈；21～23min，40％～60％乙腈；23～24min，60％～100％乙腈；24～26min，100％～10％乙腈。其中，所述的对共有峰进行归属，采用质谱分析法，其中质谱条件如下：采用电喷雾离子源ESI，负离子模式，质量扫描范围100-2000Da；毛细管电压为2.5-3kV；锥孔电压为10-50V；离子源温度为80-120℃；雾化温度为200-300℃；载气流速为400-1000L/h，碰撞能量(CE)40-100V,优选60-80V。优选采用电喷雾离子源(ESI)，负离子MSE模式，雾化气体为高纯度氮气(N2)，碰撞气体为高纯度氩气(Ar)。质量扫描范围100～2000Da；毛细管电压为3kV；锥孔电压为40V；离子源温度为120℃；雾化温度为300℃；载气流速为800L/h，碰撞能量(CE)60～80V；采用亮氨酸-脑啡肽进行精确质量校正([M-H]-＝554.2615)。其中，所述共有峰37个、相对保留时间及相对峰面积表1表137个共有峰的相对保留时间和相对峰面积其中，已经确认归属的共有峰33个，化学结构式、相对保留时间及相对峰面积结果见表2。表2基于UPLC-Q-TOF-MSE的远志指纹图谱共有峰的归属其中，步骤1供试品溶液配制方法中所述含水低级醇为甲醇或乙醇的水溶液。所述的提取方法包括回流法或超声波提取法。优选取远志药材用30-100％低级醇超声提取10-60分钟或回流提取2-3次每次1-1.5小时。其中的含水低级醇选自30％-100％甲醇或30％-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种远志药材有效成分的含量检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤1、对照品溶液制备：取西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、西伯利亚远志口山酮B、球腺糖A、远志口山酮Ⅲ、3,6'‑二芥子酰基蔗糖，甲醇定容制成混合对照品溶液；步骤2、供试品溶液制备：取远志药材含水低级醇提取后，滤过，得到供试品溶液；步骤3、将对照品溶液和供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算供试品中的有效成分含量；其中，所述的超高效液相色谱条件：UPLC色谱仪C18色谱柱、流动相酸水‑乙腈溶液梯度洗脱；所述的梯度洗脱条件为0～1min，10％乙腈；1～2.5min，10％～14％乙腈；2.5～4min，14％～16％乙腈；4～9min，16％～25％乙腈；9～12min，25％乙腈；12～14min，25％～27％乙腈；14～16min，27％～30％乙腈；16～18min，30％～39.8％乙腈；18～21min，39.8％～40％乙腈；21～23min，40％～60％乙腈；23～24min，60％～100％乙腈；24～26min，100％～10％乙腈。

【技术特征摘要】
1.一种远志药材有效成分的含量检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤1、对照品溶液制备：取西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、西伯利亚远志口山酮B、球腺糖A、远志口山酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖，甲醇定容制成混合对照品溶液；步骤2、供试品溶液制备：取远志药材含水低级醇提取后，滤过，得到供试品溶液；步骤3、将对照品溶液和供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算供试品中的有效成分含量；其中，所述的超高效液相色谱条件：UPLC色谱仪C18色谱柱、流动相酸水-乙腈溶液梯度洗脱；所述的梯度洗脱条件为0～1min，10％乙腈；1～2.5min，10％～14％乙腈；2.5～4min，14％～16％乙腈；4～9min，16％～25％乙腈；9～12min，25％乙腈；12～14min，25％～27％乙腈；14～16min，27％～30％乙腈；16～18min，30％～39.8％乙腈；18～21min，39.8％～40％乙腈；21～23min，40％～60％乙腈；23～24min，60％～100％乙腈；24～26min，100％～10％乙腈。2.一种远志药材超高效液相指纹图谱建立方法，其特征在于，步骤如下：步骤1、供试品溶液制备：取多批次远志药材含水低级醇提取后，滤过，得到供试品溶液；步骤2、将供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图，对所有色谱图相似度评价得到含有37个共有峰的远志药材的参照指纹图谱步骤3、采用质谱分析法；并对37个共有峰进行归属，鉴定出37个共有峰中的33个峰；其中，超高效液相色谱的色谱条件如下：UPLC色谱仪C18色谱柱、流动相酸水-乙腈溶液梯度洗脱，所述的梯度洗脱条件为0～1min，10％乙腈；1～2.5min，10％～14％乙腈；2.5～4min，14％～16％乙腈；4～9min，16％～25％乙腈；9～12min，25％乙腈；12～14min，25％～27％乙腈；14～16min，27％～30％乙腈；16～18min，30％～39.8％乙腈；18～21min，39.8％～40％乙腈；21～23min，40％～...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏忠庭，刘筱筱，何毅，宋兆辉，
申请(专利权)人：天士力制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12