一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法技术

本发明专利技术涉及一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法。本发明专利技术建立的美洲大蠊药材的指纹图谱色谱峰的分离度好，检测时间合理，重复性和稳定性好。与现有报道的美洲大蠊药材指纹图谱技术相比，本发明专利技术提高了对美洲大蠊原料药材的质量控制水平。本发明专利技术使用的指纹图谱技术能更有效地评价和控制美洲大蠊原料药材质量，保证了在一定制备工艺条件下，所得美洲大蠊提取物的质量稳定，从而能进一步有效的控制由美洲大蠊提取物制成的包含但不仅限于康复新片、康复新胶囊、康复新液、心脉隆及肝龙胶囊等制剂的质量。

Method for determining quality of fingerprint of Periplaneta americana

The invention relates to a method for determining the quality of the fingerprint of Periplaneta americana. The chromatographic fingerprint of Periplaneta americana has the advantages of good separation degree, reasonable detection time, good repeatability and stability. Compared with the existing report of the American cockroach medicinal materials fingerprint technology, the invention improves the quality control level of raw materials of Periplaneta americana. The fingerprint technique used to more effectively evaluate and control the quality of raw material of Periplaneta americana, the preparation conditions in a certain system, the quality and stability of Periplaneta americana extract, which can further effective control made of Periplaneta americana extract including but not limited to the quality of rehabilitation, rehabilitation film capsule, Kangfuxin Liquid, and Xinmailong GANGLONG capsule and medicine.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种中药材的质量测定方法，特别涉及一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法。
技术介绍
美洲大蠊药材收载于《云南省药品标准》1996年版。美洲大蠊药材主要含有神经肽类、核苷类、氨基酸类、多糖等成分，已经被开发成多种制剂，如康复新液、肝龙胶囊、心脉隆及消症益肝片等。专利号CN101320027公布了一种美洲大蠊药材及其提取物的指纹图谱质量测定方法，该方法中美洲大蠊药材供试品溶液的制备方法过于繁琐，且耗时长，势必会导致样品检测的误差，降低分析的精确度，且所建立的指纹图谱信息量小，难以对成分复杂的美洲大蠊药材得到较为全面的表征。因此本文通过建立简便的美洲大蠊样品前处理方法，同时又能反映更多信息的HPLC指纹图谱，以期为较为全面的评价和控制美洲大蠊药材的质量提供参考。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法。本专利技术是通过如下技术方案实现的。本专利技术美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，该方法包括如下步骤：(a)样品前处理：取美洲大蠊干燥样品粉碎并过40-60目筛后，将所得样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管中，往提取瓶内加入石油醚，采用索氏提取方法，去除美洲大蠊样品中的油脂，倒出药渣，并将药渣挥干；(b)供试品溶液的制备：精密称取药渣1～5重量份，置于锥形瓶中，加入20％～80％乙醇30～150体积份，于50℃超声处理0.5～3h，放冷，减压蒸馏出乙醇后，将药渣转移至25～100体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用；(c)对照品溶液的制备：精密称取尿嘧啶，加水制成每1mL含尿嘧啶15μg的溶液，备用；(d)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。步骤(b)供试品溶液的制备优选为：精密称定药渣1重量份，置于锥形瓶中，加入40％乙醇30体积份，于50℃超声处理1h，放冷，减压蒸馏出乙醇，后转移至25体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用。高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0-3min，3％B-5％B；3min-15min，5％B-10％B；15min-20min，10％B-30％B；20min-30min，30B％-50％B；30min-40min，50B％-60％B；40min-50min，60B％-3％B，检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为0.45mL/min；理论板数按尿嘧啶计算不低于5000。美洲大蠊药材共有13个共有指纹峰，参照峰S为尿嘧啶色谱峰，13个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.417±0.042，2号峰0.624±0.062，3号峰0.827±0.083，4(S)号峰1.000±0.000，5号峰1.426±0.143，6号峰1.632±0.163，7号峰1.933±0.193，8号峰1.983±0.198，9号峰2.717±0.272，10号峰2.929±0.293，11号峰3.135±0.314，12号峰3.268±0.327，13号峰3.664±0.366。本专利技术的优点如下：1.本专利技术确定了美洲大蠊乙醇提取物最优提取条件，为美洲大蠊开发利用制成各种制剂提供参考依据。2.本专利技术提供的指纹图谱质量测定方法分离度好，重复性及稳定性好。3.本专利技术提供的指纹图谱有13个共有峰，可作为鉴别美洲大蠊乙醇提取液的特征性指纹图谱，并可对美洲大蠊药材进行鉴别真伪和质量控制。具体实施方式下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本专利技术。实验例1(1)仪器及试药LC-6AD高效液相色谱仪(日本岛津公司)，KQ5200超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，RE-52旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。无水乙醇为分析纯，甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，自制超纯水。美洲大蠊样品由四川好医生攀西药业有限责任公司提供。(2)美洲大蠊乙醇提取物提取条件的考察a.样品前处理取美洲大蠊虫体的干燥样品用粉碎机粉碎成粉末状，过40-60目筛，除去较大的颗粒。在浸渍样品前先除去所含的脂类物质，减少其对试验的影响。用石油醚处理前，将待测样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管内。采用索氏提取方法，往提取瓶内加入石油醚，加热提取瓶，石油醚气化，由连接管上升进入冷凝器，凝聚成液滴滴入提取管内，浸提样品中的脂类物质。待提取管内石油醚液面达到一定高度，溶有粗脂肪的石油醚经虹吸管流入提取瓶。流入提取瓶内的石油醚继续被加热气化、上升、冷凝，滴入提取管内，如此循环往复，直到提取管内凝成液体的石油醚澄清后，倒出药渣，并将药渣挥干。美洲大蠊乙醇提取物质不溶于石油醚，提取液与药渣易分离，静置所得溶液澄清，提取分离工艺简单，耗时短。b.提取方法考察准确称取1.0g美洲大蠊粉末3份分别置于100mL锥形瓶中，加入85％乙醇10mL浸渍并密封瓶口，分别对3份样品按以下条件处理：①冷浸12h，②冷浸12h、室温超声60min，③冷浸12h、60℃超声60min，条件②和③处理样品静置冷却至室温。再对4份样品进行抽滤获得澄清溶液，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏挥发出乙醇得到美洲大蠊提取物的水溶液，将其转移至25mL容量瓶中，加蒸馏水定容摇匀。4份样品各取100μL稀释溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，各取10μL依次注入高效液相色谱仪进行分析，计算美洲大蠊样品全部吸收峰的峰面积见表1。结果表明在条件③下超声提取美洲大蠊化学成分全部吸收峰的峰面积积分最大，即这种方法提取物的所含化学成分最多。与传统的冷浸法相比，超声提取法操作简单、快速、提取效率高。表1美洲大蠊不同提取方法峰面积积分提取方法①②③峰面积积分166445002226681727160763c.提取温度考察准确称取1.0g美洲大蠊粉末5份分别置于100mL锥形瓶中，加入85％乙醇10mL并密封瓶口浸渍12h，分别对5份样品在以下温度超声提取60min并静置冷却至室温：①室温，②40℃，③50℃，④60℃，⑤70℃。再对5份样品进行抽滤获得澄清溶液，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏挥发出乙醇得到美洲大蠊提取物的水溶液，将其转移至25mL容量瓶中，加蒸馏水定容摇匀。5份样品各取100μL稀释溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，各取10μL依次注入高效液相色谱仪进行分析，计算美洲大蠊样品全部吸收峰的峰面积见表2。结果表明在条件③下超声提取美洲大蠊化学成分全部吸收峰的峰面积积分最大，因此确定后续实验中的提取温度为50℃。表2美洲大蠊不同提取温度峰面积积分提取温度①②③④⑤峰面积积分2226681724145291292192972716076327292103d.提取时间考察准确称取1.0g美洲大蠊粉末4份分别置于100mL锥形瓶中，加入85％乙醇10mL并密封瓶口浸渍12h，分别对4份样品在以下提取时间50℃超声并静置冷却至室温：①3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(a)样品前处理：取美洲大蠊干燥样品粉碎并过40‑60目筛后，将所得样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管中，往提取瓶内加入石油醚，采用索氏提取方法，去除美洲大蠊样品中的油脂，倒出药渣，并将药渣挥干；(b)供试品溶液的制备：精密称取药渣1～5重量份，置于锥形瓶中，加入20％～80％乙醇30～150体积份，于50℃超声处理0.5～3h，放冷，减压蒸馏出乙醇后，将药渣转移至25～100体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用；(c)对照品溶液的制备：精密称取尿嘧啶，加水制成每1mL含尿嘧啶15μg的溶液，备用；(d)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)‑甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(a)样品前处理：取美洲大蠊干燥样品粉碎并过40-60目筛后，将所得样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管中，往提取瓶内加入石油醚，采用索氏提取方法，去除美洲大蠊样品中的油脂，倒出药渣，并将药渣挥干；(b)供试品溶液的制备：精密称取药渣1～5重量份，置于锥形瓶中，加入20％～80％乙醇30～150体积份，于50℃超声处理0.5～3h，放冷，减压蒸馏出乙醇后，将药渣转移至25～100体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用；(c)对照品溶液的制备：精密称取尿嘧啶，加水制成每1mL含尿嘧啶15μg的溶液，备用；(d)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。2.根据权利要求1所述的一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，其特征在于：步骤(b)供试品溶液的制备优选为：精密称定药渣1重量份，置于锥形瓶中，加入40％乙醇30体积份，于50℃超声处理1h，放冷，减压蒸馏出乙醇，后转移至25体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘越飞，耿福能，沈咏梅，
申请(专利权)人：四川好医生攀西药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川;51