一种胃可宁片中氨基酸类成分指纹图谱的检测方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种胃可宁片指纹图谱的检测方法，通过对供试品溶液的制备、衍生化、测定并获得胃可宁片的指纹图谱。本发明专利技术还提供一种胃可宁片中氨基酸类成分指纹图谱的检测方法，通过对供试品溶液、对照品溶液及空白对照溶液的制备、衍生化、测定并获得供试品溶液、对照品溶液及空白对照溶液的液相色谱图，经与对照品溶液及空白对照溶液的液相色谱图比较后，得到氨基酸类成分指纹图谱。此方法还可以作为胃可宁片中氨基酸类成分含量的测定方法及其胃可宁片的质量检测方法。本发明专利技术中方法测定胃可宁片中氨基酸类成分结果可靠，精密度、重复性、稳定性良好，可作为胃可宁片的质控方法，实现多成分定量控制胃可宁片质量，提高胃可宁片质控水平。

【技术实现步骤摘要】
一种胃可宁片中氨基酸类成分指纹图谱的检测方法及其应用
本专利技术属于中药成分分析检测
，涉及一种胃可宁片中氨基酸类成分指纹图谱的检测方法及其应用，具体涉及一种胃可宁片及胃可宁片中氨基酸类成分指纹图谱的检测方法及其在质量检测中应用。
技术介绍
胃可宁片是在传统古方“乌贝散”的基础上，由上海中药制药一厂(现为上海和黄药业有限公司)与上海市一、香山、仁济、中山、华山等家医院协作，经临床验证、对照、研制成功的一种治疗胃部疾病的药物。经临床证实，胃可宁片具有收敛、制酸、止痛作用，可用于胃病泛酸、胃及十二指肠溃疡。它是治疗慢性胃炎及消化性溃疡的理想药物，既能中和胃酸、抑制胃蛋白酶，又能收敛生肌、保护胃粘膜、促进胃上皮细胞生长，有利于炎症消失和溃疡愈合。经临床验证，75％患者服药后，在3-7天疼痛就能得到缓解。疼痛消失最快的天数为1-3天，总有效率可达80％左右；二组药物治疗中泛酸缓解率在1周己达70-80％。胃可宁片中的主要有两味药材，珍珠层粉和浙贝母。其中，珍珠层粉为蚌科动物三角帆蚌Hyriopsiscumingii(Lea)、褶纹冠蚌Cristariaplicata(Leach)或珍珠贝科动物马氏珍珠贝Pteriamartensii(Dunker)的贝壳内壁磨成粉，性味咸寒，其主要成分为钙，多种氨基酸和少量微量元素，其中所含有的角壳蛋白有人体不能合成的单元氨基酸。浙贝母为百合科植物浙贝母FritillariathunbergiiMiq.的干燥鳞茎，性味苦寒，其主要成分为生物碱，皂苷类和多种氨基酸等。氨基酸是人体主要的营养物质及生命物质，在珍珠层粉和浙贝母中均含有丰富的氨基酸，且是珍珠层粉最主要的成分，而珍珠层粉为胃可宁的主要药材。为了更好的控制胃可宁质量，因而需要检测氨基酸这类成分。中药指纹图谱具有整体、宏观、模糊分析等特点，可通过对中药整体特征的描述，采用适当模糊处理方式，达到整体质量控制的目的，因此成为中药质量控制的有效手段。其中色谱指纹图谱分析可以使中药所含多种化学组分的整体特征可视化，从而披露出常规检验难以发现的质量问题。目前缺乏对胃可宁片系统的定性、定量研究。氨基酸类成分作为人体营养所需蛋白质的基本物质，在胃可宁片中广泛存在，因此，有必要建立胃可宁片中氨基酸类成分的指纹图谱，同时也可用此指纹图谱方法建立成分含量测定方法，实现以一次样品制备、一次进样分析，同时完成定性和定量分析，用于对胃可宁片中氨基酸类成分进行有效的质量控制，防止生产过程中掺假、掺杂现象，使指纹图谱在胃可宁片的质量控制中更具意义。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种胃可宁片中氨基酸类成分指纹图谱的检测方法及其应用，采用优化条件的前处理及高效液相色谱方法建立了胃可宁片及胃可宁片中氨基酸类成分指纹图谱的检测方法，并且同时可以利用此方法一次对5种成分(甘氨酸、精氨酸、丙氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸)进行定量分析。本专利技术中方法主要通过指纹图谱来反映胃可宁片中氨基酸类成分，且利用该方法实现多成分定量控制胃可宁片的质量，提高胃可宁片的质控水平。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种胃可宁片指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：1)供试品溶液的制备：称取胃可宁片样品，加入5-7mol/L浓盐酸溶解，再进行水解后冷却，取水溶液浓缩至干，再加0.05-0.2mol/L稀盐酸溶解后过滤，取清液，即得供试品溶液；优选地，所述胃可宁片为将原料珍珠层粉、浙贝母粉碎后过筛、混合，加入糊精和淀粉制粒，再加入陈皮油、润滑剂混合均匀后压片，制得。优选地，所述胃可宁片样品为将胃可宁片粉碎后获得的粉末样品。优选地，所述胃可宁片样品加入的重量与所述浓盐酸加入的体积之比为1:10-15(g/ml)。更优选地，所述胃可宁片样品加入的重量与所述浓盐酸加入的体积之比为2:25(g/ml)。优选地，所述浓盐酸的浓度为6mol/L。优选地，所述稀盐酸的浓度为0.1mol/L。优选地，所述水解条件为：水解设备：水浴；水解温度：100±5℃；水解时间：7-9h。更优选地，所述水解条件为：水解设备：水浴；水解温度：100±1℃；水解时间：8h。优选地，所述水溶液与浓盐酸加入的体积比为1:2-3。更优选地，所述水溶液与浓盐酸加入的体积比为2:5。优选地，所述浓缩条件为：浓缩设备：水浴；浓缩温度：100±5℃。更优选地，所述浓缩条件为：浓缩设备：水浴；浓缩温度：100±1℃。优选地，所述稀盐酸与浓盐酸加入的体积比为1:1-3。更优选地，所述稀盐酸与浓盐酸加入的体积比为1:2。优选地，所述过滤的方式为采用针式过滤器的滤膜过滤方式。更优选地，所述滤膜的孔径为0.45μm。2)衍生化：在步骤1)中的供试品溶液中分别加入三乙胺的乙腈溶液和异硫氰酸苯酯的乙腈溶液，摇匀后进行衍生，再加入有机溶剂摇匀后静置分层，取下层溶液过滤后，待用；优选地，所述三乙胺的乙腈溶液的浓度为0.5-2.0mol/L。更优选地，所述三乙胺的乙腈溶液的浓度为1mol/L。优选地，所述异硫氰酸苯酯的乙腈溶液的浓度为0.05-0.2mol/L。更优选地，所述异硫氰酸苯酯的乙腈溶液的浓度为0.1mol/L。优选地，所述三乙胺的乙腈溶液与供试品溶液加入的体积比为1:4-3:4。更优选地，所述三乙胺的乙腈溶液与供试品溶液加入的体积比为1:2。优选地，所述异硫氰酸苯酯的乙腈溶液与供试品溶液加入的体积比为1:4-3:4。更优选地，所述异硫氰酸苯酯的乙腈溶液与供试品溶液加入的体积比为1:2。优选地，所述衍生条件为：衍生温度：室温；衍生时间：0.5-2h。更优选地，所述衍生条件为：衍生温度：20-25℃；衍生静置时间：1h。优选地，所述有机溶剂为正己烷。更优选地，所述正己烷与供试品溶液加入的体积比为1-3:1。进一步优选地，所述正己烷与供试品溶液加入的体积比为2:1。优选地，所述静置分层时间为5-15min。更优选地，所述静置分层时间为10min。优选地，所述下层溶液与供试品溶液加入的体积比为1:1。优选地，所述下层溶液要用水稀释定容。3)测定：采用高效液相色谱法测定经步骤2)衍生化的供试品溶液，获得供试品溶液的指纹图谱。优选地，所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：VenusilAA色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；柱温：30-45℃；检测波长：250-260nm；流速：0.8-1.2mL/min；进样量：5-20μL；流动相：乙腈水溶液-醋酸钠水溶液，其中，A相为乙腈水溶液(乙腈与水的体积之比为80:15-25)，B相为40-100mmol/L醋酸钠水溶液(醋酸调pH＝6.0-7.5)；分析时间：50min；梯度洗脱。更优选地，所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：VenusilAA色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；柱温：40℃；检测波长：254nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；流动相：乙腈水溶液-醋酸钠水溶液，其中，A相为乙腈水溶液(乙腈与水的体积之比为80:20)，B相为100mmol/L醋酸钠水溶液(醋酸调pH＝6.5)；分析时间：50min；梯度洗脱。最优选地，所述梯度洗脱的具体程序为(见表1)：0-15min，A相：B相体积比为0:100-8:92；15-25m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胃可宁片指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：1)供试品溶液的制备：称取胃可宁片样品，加入5‑7mol/L浓盐酸溶解，再进行水解后冷却，取水溶液浓缩至干，再加0.05‑0.2mol/L稀盐酸溶解后过滤，取清液，即得供试品溶液；2)衍生化：在步骤1)中的供试品溶液中分别加入三乙胺的乙腈溶液和异硫氰酸苯酯的乙腈溶液，摇匀后进行衍生，再加入有机溶剂摇匀后静置分层，取下层溶液过滤后，待用；3)测定：采用高效液相色谱法测定经步骤2)衍生化的供试品溶液，获得供试品溶液的指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.一种胃可宁片指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：1)供试品溶液的制备：称取胃可宁片样品，加入5-7mol/L浓盐酸溶解，再进行水解后冷却，取水溶液浓缩至干，再加0.05-0.2mol/L稀盐酸溶解后过滤，取清液，即得供试品溶液；2)衍生化：在步骤1)中的供试品溶液中分别加入三乙胺的乙腈溶液和异硫氰酸苯酯的乙腈溶液，摇匀后进行衍生，再加入有机溶剂摇匀后静置分层，取下层溶液过滤后，待用；3)测定：采用高效液相色谱法测定经步骤2)衍生化的供试品溶液，获得供试品溶液的指纹图谱。2.根据权利要求1所述的一种胃可宁片指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤1)中，包括以下条件中任一项或多项：a1)所述胃可宁片样品加入的重量与所述浓盐酸加入的体积之比为1:10-15；a2)所述水解条件为：水解设备：水浴；水解温度：95-105℃；水解时间：7-9h；a3)所述水溶液与浓盐酸加入的体积比为1:2-3；a4)所述浓缩条件为：浓缩设备：水浴；浓缩温度：95-105℃；a5)所述稀盐酸与浓盐酸加入的体积比为1:1-3。3.根据权利要求1所述的一种胃可宁片指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤2)中，包括以下条件中任一项或多项：b1)所述三乙胺的乙腈溶液的浓度为0.5-2.0mol/L；b2)所述异硫氰酸苯酯的乙腈溶液的浓度为0.05-0.2mol/L；b3)所述三乙胺的乙腈溶液与供试品溶液加入的体积比为1:4-3:4；b4)所述异硫氰酸苯酯的乙腈溶液与供试品溶液加入的体积比为1:4-3:4；b5)所述衍生条件为：衍生温度：室温；衍生时间：0.5-2h；b6)所述有机溶剂为正己烷；所述正己烷与供试品溶液加入的体积比为1-3:1。4.根据权利要求1所述的一种胃可宁片指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤3)中，所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：VenusilAA色谱柱，4.6mm×250mm,5μm；柱温：30-45℃；检测波长：250-260nm；流速：0.8-1.2mL/min；进样量：5-20μL；流动相：乙腈水溶液-醋酸钠水溶液，其中，A相为乙腈水溶液，乙腈与水的体积之比为80:15-25，B相为40-100mmol/L醋酸钠水溶液，醋酸调pH＝6.0-7.5；分析时间：50min；梯度洗脱。5.根据权利要求4所述的一种胃可宁片指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的具体程序为：0-15min，A相：B相体积比为0:100-8:92；15-25min，A相：B相体积比为8:92-22:78；25-36min，A相：B相体积比为22:78-36:64；36-38min，A相：B相体积比为36:64-100:0；38-43min，A相：B相体积比为100:0-100:0；43-43.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈丹萍，姜鹏，詹常森，田禾苗，
申请(专利权)人：上海和黄药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31