一种西罗莫司的高效液相色谱检测方法技术

本发明专利技术提供了一种西罗莫司的高效液相色谱检测方法，以无水乙腈为溶剂，并以乙腈和缓冲盐溶液为流动相，可选地加入改性剂，可有效改善脯氨酰西罗莫司、西罗莫司互变异构体A、去甲基西罗莫司及西罗莫司主峰之间的分离。所述西罗莫司的高效液相色谱检测方法操作简便、专属性好，样品溶液稳定性好，可有效分离西罗莫司、互变异构体、同系物及其工艺副产物(如脯氨酰西罗莫司、去甲基西罗莫司)、开环降解产物(如断雷帕霉素)等，检出的杂质个数较多，各相关色谱峰(工艺副产物及降解产物等)之间分离良好，准确度高且重复性好，可有效克服现有技术中存在的缺陷，从而有效控制西罗莫司原料药及其制剂的产品质量，亦可用于评估西罗莫司的生产工艺。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种西罗莫司的高效液相色谱检测方法。
技术介绍
西罗莫司(sirolimus)又称雷帕霉素(rapamycin)，是一种亲脂性含氮36元大环内酯类免疫抑制剂。1975年，加拿大Ayerst实验室的Vezina等人从太平洋Easler岛土壤样品中分离的吸水链霉菌(Streptomyeeshygroscopicus)发酵液中首次得到。1977年西罗莫司被发现具有免疫抑制作用，1989年开始把西罗莫司作为治疗器官移植排斥反应的新药进行使用。1999年10月惠氏制药研制的西罗莫司口服溶液在美国首次上市，此后，1mg片剂也已在美上市。国内西罗莫司产品主要有西罗莫司原料药、西罗莫司胶囊及西罗莫司口服溶液。目前，西罗莫司原料药及其制剂的有关物质与含量测定的现有检测技术主要是国家食品药品监督管理局标准(企业注册标准)，具体包括原料药标准YBH09982005、YBH15302005、YBH02322008、YBH00972011和YBH01872012，胶囊标准YBH02472010，口服溶液标准YBH09992005、YBH14502005和YBH15312005。然而，各现有技术在重要参数质量控制上均存在显著缺陷，例如：(1)流动相系统上，多项现有技术使用了甲醇，而西罗莫司在甲醇中存在结构转化现象，不适合作为溶解样品的溶剂或作为流动相的一部分。凡采用甲醇作为流动相组成的色谱系统，其供试品溶液西罗莫司主峰均存在和其前洗脱的杂质峰分离较差的现象，该现象也从侧面证实了以甲醇作为溶解样品的溶剂及作为流动相的一部分在有关物质控制上的局限性；(2)流动相组成均为有机溶剂-水混合物，流动相系统不调节pH，不利于开环降解产物如断雷帕霉素等的控制，在此前提下采用等度洗脱方式，十分不利于弱极性强保留杂质的检测；(3)在有关物质杂质的控制上，有2项现有技术提到已知杂质去甲基西罗莫司，1项现有技术提到去甲基西罗莫司和开环降解转化物，然而，其结论存在明显的错误，这是因为：在西罗莫司的检测过程中，所述开环降解转化物已被证实为断雷帕霉素与西罗莫司同系物及西罗莫司同分异构体的混合物，所述已知杂质去甲基西罗莫司已被证实为脯氨酰西罗莫司。例如，中国专利申请CN105301159A披露了一种西罗莫司的高效液相色谱分析方法，其所采用的流动相为体积配比18：82～22：78的流动相A与流动相B的混合溶液，并且实施等度洗脱；其中，所述流动相A中的磷酸、庚烷磺酸钠、水的质量配比为0.1:0.01:1，所述流动相B中甲醇与乙腈的体积配比为15：85；由此可见，该专利申请未能避免甲醇的使用，且没有规避等度洗脱所带来的技术问题。综上所述，现有技术在针对西罗莫司原料药及其制剂的有效可控的质量控制方面存在诸多缺陷与不足。因此，亟需提供一种全新的西罗莫司的分析方法或检测方法，在保证各相关杂质与有效成分高效分离的基础上，使其具有良好的专属性、重复性与准确度，从而更好地实现对西罗莫司的质量控制。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的缺陷与不足，专利技术人旨在提供一种既具有高的分离度，又具有良好的专属性、重复性与准确度的分析方法或检测方法，用于西罗莫司原料药及其各种制剂的质量控制。因此，本专利技术提供了一种西罗莫司的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：将西罗莫司溶解于无水乙腈，制得西罗莫司样品溶液；取5～50μL进样至HPLC系统，该进样量与色谱柱载样量或检测器响应相适应；流速为1.0～2.5mL·min-1，具体操作时，采用与所选择的色谱柱尺寸相适应的流速；梯度洗脱，以277±2nm的检测波长进行HPLC分析；其中，采用C18反相色谱柱，流动相由乙腈和缓冲盐溶液组成；所述缓冲盐溶液的pH为2.0～7.5，且所述缓冲盐溶液中盐的浓度为5～100mmol/L；其中，乙腈占流动相总体积的体积百分比浓度为50～100％。优选地，在上述西罗莫司的高效液相色谱检测方法中，所述西罗莫司包括西罗莫司原料药、西罗莫司片剂、西罗莫司胶囊或西罗莫司口服溶液。优选地，在上述西罗莫司的高效液相色谱检测方法中，所述缓冲盐溶液的pH为3.5～4.0。优选地，在上述西罗莫司的高效液相色谱检测方法中，所述缓冲盐溶液选自以下任一种体系：磷酸盐缓冲体系、甲酸铵缓冲体系、乙酸铵缓冲体系、三氟乙酸缓冲体系。所述缓冲盐溶液和质谱系统兼容，利于后续可实施的西罗莫司及其制剂中的杂质分析。进一步优选地，在上述西罗莫司的高效液相色谱检测方法中，所述缓冲盐溶液为甲酸铵缓冲体系。优选地，在上述西罗莫司的高效液相色谱检测方法中，所述缓冲盐溶液中盐的浓度为20～50mmol/L。进一步优选地，在上述西罗莫司的高效液相色谱检测方法中，所述流动相由缓冲盐溶液、乙腈和改性剂组成。更进一步优选地，在上述西罗莫司的高效液相色谱检测方法中，所述改性剂包括：甲基叔丁基醚和/或四氢呋喃。更进一步优选地，在上述西罗莫司的高效液相色谱检测方法中，所述乙腈占流动相总体积的体积百分比浓度为50～99％，所述改性剂占流动相总体积的体积百分比浓度为1～5％。其中，所述改性剂的百分比浓度可根据西罗莫司的保留行为而做适当的调整。综上所述，本专利技术所提供的西罗莫司的高效液相色谱检测方法，以无水乙腈为西罗莫司原料药及其制剂的溶剂，并以乙腈和缓冲盐溶液为流动相，可选地加入改性剂，意外地改善了脯氨酰西罗莫司、西罗莫司互变异构体A、去甲基西罗莫司及西罗莫司主峰之间的分离；其中，加入改性剂的主要目的和作用是调节西罗莫司及其杂质与固定相之间的相互作用力，最终目的是提高西罗莫司及其杂质之间的分离度，增加定量测定的准确度；从而避免了甲醇作为溶解样品的溶剂或作为流动相的一部分时，在有关物质控制上的局限性。本专利技术涉及的西罗莫司原料药及其制剂有关物质及含量测定的检测方法操作简便、专属性好，样品溶液稳定性好，可有效分离西罗莫司、互变异构体A、同系物及其工艺副产物(如脯氨酰西罗莫司、去甲基西罗莫司)、开环降解产物(如断雷帕霉素)等，检出的杂质个数较多，各相关色谱峰(工艺副产物及开环降解产物等)之间分离良好，准确度高且重复性好，可有效克服现有技术中存在的缺陷，从而有效控制西罗莫司原料药及其制剂的产品质量，亦可用于评估西罗莫司的生产工艺。附图说明图1～4依次为依据本专利技术实施例1所述的方法检测企业A、企业B、企业C和企业D的西罗莫司原料药所得到的典型液相色谱图；图5为依据本专利技术实施例2所述的方法检测企业B的西罗莫司胶囊所得到的典型液相色谱图；图6为依据现有国家食品药品监督管理局标准在甲醇-乙腈-水流动相体系中检测企业A的西罗莫司原料药所得到的典型液相色谱图；图7为依据现有技术在甲醇-水流动相体系中检测企业A的西罗莫司原料药所得到的典型液相色谱图；图8为依据现有技术在乙腈-水流动相体系中检测断雷帕霉素所得到的典型液相色谱图；图9为依据本专利技术实施例3所述的方法检测企业A的西罗莫司原料药所得到的典型液相色谱图；图10为依据本专利技术实施例4所述的方法检测企业A的西罗莫司胶囊所得到的典型液相色谱图；图11为依据本专利技术实施例6所述的方法在磷酸盐缓冲体系中检测企业A的西罗莫司原料药所得到的典型液相色谱图；图12为依据本专利技术实施例6所述的方法在乙酸铵缓冲体系中检测企业A本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种西罗莫司的高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将西罗莫司溶解于无水乙腈，制得西罗莫司样品溶液；取5～50μL进样至HPLC系统，流速为1.0～2.5mL·min‑1，梯度洗脱，以277±2nm的检测波长进行HPLC分析；其中，采用C18反相色谱柱，流动相由乙腈和缓冲盐溶液组成；所述缓冲盐溶液的pH为2.0～7.5，且所述缓冲盐溶液中盐的浓度为5～100mmol/L；其中，乙腈占流动相总体积的体积百分比浓度为50～100％。

【技术特征摘要】
1.一种西罗莫司的高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将西罗莫司溶解于无水乙腈，制得西罗莫司样品溶液；取5～50μL进样至HPLC系统，流速为1.0～2.5mL·min-1，梯度洗脱，以277±2nm的检测波长进行HPLC分析；其中，采用C18反相色谱柱，流动相由乙腈和缓冲盐溶液组成；所述缓冲盐溶液的pH为2.0～7.5，且所述缓冲盐溶液中盐的浓度为5～100mmol/L；其中，乙腈占流动相总体积的体积百分比浓度为50～100％。2.根据权利要求1所述的西罗莫司的高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述西罗莫司包括西罗莫司原料药、西罗莫司片剂、西罗莫司胶囊或西罗莫司口服溶液。3.根据权利要求1所述的西罗莫司的高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述缓冲盐溶液的pH为3.5～4.0。4.根据权利要求1所述的西罗莫司的高效液相色谱检...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵敬丹，缪天瑶，秦峰，刘浩，
申请(专利权)人：上海市食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：上海;31