一种IPTG含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种IPTG含量的检测方法，包括如下步骤：(1) 样品前处理；(2) 配置IPTG标准溶液，采用离子色谱‑脉冲安培检测法进行检测，得到标准曲线；所述离子色谱‑脉冲安培检测法的色谱条件如下：色谱柱为反相色谱柱；流动相为缓冲溶液和有机溶剂的混合流动相；(3) 将步骤(1)的待测样品采用离子色谱‑脉冲安培检测法进行检测，对照步骤(2)的标准曲线，即可得到IPTG的含量。本发明专利技术的方法可以准确地测定IPTG的含量，取得了显著的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种IPTG含量的检测方法。
技术介绍
IPTG，中文名为异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，英文名为Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyranoside，CAS：367-93-1；其化学式如下：，是一种硫代化合物。IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质，基于这个特性，当pUC系列的载体DNA（或其他带有lacZ基因载体DNA）以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑选出基因重组体。此外，它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。现有技术中，IPTG作为一种分子生物学试剂，常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等。基因工程技术中，采用IPTG作为诱导剂，可促进目的蛋白的大量表达。但IPTG价格昂贵，使用量过多时有毒性，并且提高了工业生产成本。IPTG实际上是一种半硫代的化合物。由于含硫的化合物分子中缺乏发光基团，无法采用常规的紫外-可见检测器检测，目前最常用的检测方法是衍生化联合荧光的HPLC检测法检测，如常用的荧光衍生试剂有o-苯二醛和N-马来酰亚胺。但是这种检测法费时费力，选择性差，而且存在衍生不完全的可能。因此，开发一种IPTG含量的检测方法，以实现对生化样品中IPTG含量的准确测定，显然具有积极的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的是提供一种IPTG含量的检测方法。为达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案是：一种IPTG含量的检测方法，包括如下步骤：(1)样品前处理：将样品进行超滤离心处理，得到分子量小于10000道尔顿的待测样品；(2)配置IPTG标准溶液，采用离子色谱-脉冲安培检测法进行检测，得到标准曲线；所述离子色谱-脉冲安培检测法的色谱条件如下：色谱柱为反相色谱柱；流动相为缓冲溶液和有机溶剂的混合流动相；其中，缓冲溶液的pH值为1~11；缓冲溶液和有机溶剂的体积比为99~80：1~20；(3)将步骤(1)的待测样品采用离子色谱-脉冲安培检测法进行检测，对照步骤(2)的标准曲线，即可得到IPTG的含量；所述离子色谱-脉冲安培检测法的色谱条件与步骤(2)中的色谱条件相同。上文中，所述有机溶剂为与水互溶的有机溶剂，如乙腈、低级醇C3以下和多元醇（如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、丙三醇、正丁醇等）、丙酮、四氢呋喃、三氟乙酸、乙二醇二甲醚、乙二胺、二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）等。优选的，所述步骤(1)中的过滤离心处理为采用超滤离心管进行处理。此处的超滤离心管可以采用现有技术，其同时具有超滤和离心两种效应，可以简单高效的处理多种生物样品。优选的，所述超滤离心管中超滤管的孔径范围为0.001~0.02微米。优选的，所述步骤(1)中，经过样品前处理之后的待测样品的分子量小于3000道尔顿。优选的，经过样品前处理之后的待测样品的分子量小于500道尔顿。优选的，所述步骤(2)中，所述色谱柱为采用(弱)非键合硅胶、氰基、C1(TMS)、C3、C4、苯基、C8、C18或C6H5作为固定相的反相色谱柱。所述色谱柱为C18色谱柱。优选的，所述步骤(2)中，所述缓冲溶液为pH缓冲溶液，所述缓冲溶液选自无机酸、有机酸、碱及其盐类中的一种或几种；所述无机酸为盐酸、硫酸、硝酸、磷酸或碳酸；所述有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、酒石酸、草酸、柠檬酸、苹果酸、枸椽酸、抗坏血酸、苯甲酸、水杨酸或咖啡酸；所述碱为氢氧化钠或氢氧化钾；所述盐类为甲酸钠、甲酸钾、乙酸钠、乙酸钾、柠檬酸钠、柠檬酸钾、酒石酸钠、酒石酸钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾。当然也可以选用一些与上述试剂的物性参数（如酸碱度、溶解性等）相近似的试剂作为缓冲溶液。优选醋酸钠溶液。优选的，所述步骤(2)中，所述缓冲溶液的pH值为2~8。优选3~7。更优选4~6。优选的，所述步骤(2)中，所述有机溶剂为乙腈、C3以下的低级醇或多元醇、丙酮、四氢呋喃、三氟乙酸、乙二醇二甲醚、乙二胺、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。所述C3以下的低级醇或多元醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、丙三醇、正丁醇。优选的，所述有机溶剂为乙腈、甲醇或丙酮。更优选为乙腈。所述有机溶剂为分析纯以上有机溶剂。优选的，所述有机溶剂为色谱纯有机溶剂。更优选的，所述有机溶剂的纯度为100%。本专利技术的工作原理如下：本专利技术采用超滤离心管进行处理样品，快速高效去除体系中的杂质，将处理后的待测样品溶液通过pH缓冲溶液与有机溶剂的混合流动相进入反相色谱柱进行分离，IPTG在该条件下很快洗脱出来，再通过脉冲安培检测器进行检测，从而完成分析。由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点：1．本专利技术设计了一种新的IPTG含量的检测方法，试验证明，本专利技术的方法可以准确地测定IPTG的含量，取得了显著的效果；2．本专利技术的方法具有样品前处理简便、专属性好、灵敏度高等优点，适于推广应用。附图说明图1是采用离子色谱-脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）测定IPTG的检测电位图。图2是采用离子色谱-脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）测定IPTG的色谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步描述：实施例一参见图1~2所示，一种IPTG含量的检测方法，包括如下步骤：(1)样品前处理：取适量的样品用超滤管离心20min，取滤液，滤液用流动相A（醋酸钠溶液）稀释100倍，得到分子量小于等于3000道尔顿的待测样品；(2)配置IPTG标准溶液，采用离子色谱-脉冲安培检测法进行检测，得到标准曲线；所述离子色谱-脉冲安培检测法的色谱条件如下：C18色谱柱（ACCLAIMÒ（C18，5微米，4.6´150mm），Dionex）；流动相为流动相A和流动相B的混合缓冲溶液，其中，流动相A为pH值为4~6的醋酸钠溶液，临用前经0.45微米膜过滤，脱气，保存于N2中；流动相B为100%乙腈；柱温：25℃，压力上限：3000psi，流速：1.0ml/min，进样体积：50微升，洗脱条件：A：B=90：10，时间20min；(3)将步骤(1)的待测样品采用离子色谱-脉冲安培检测法进行检测，对照步骤(2)的标准曲线，处理数据，即可得到IPTG的含量；所述离子色谱-脉冲安培检测法的色谱条件与步骤(2)中的色谱条件相同。图1是采用离子色谱-脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）测定IPTG的检测电位图；图2是采用离子色谱-脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）测定IPTG的色谱图。从图中可以看出采用该工作体系，IPTG可以快速的出峰，灵敏度高，峰型对称，且没有干扰。上述实施例仅为本专利技术的优选实施方式，不能依此来限定本专利技术保护的范围，本领域的技术人员在本专利技术的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本专利技术所要求保护的范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种IPTG含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1) 样品前处理：将样品进行超滤离心处理，得到分子量小于10000道尔顿的待测样品；(2) 配置IPTG标准溶液，采用离子色谱‑脉冲安培检测法进行检测，得到标准曲线；所述离子色谱‑脉冲安培检测法的色谱条件如下：色谱柱反相色谱柱；流动相为缓冲溶液和有机溶剂的混合流动相；其中，缓冲溶液的pH值为1~11；缓冲溶液和有机溶剂的体积比为99~80：1~20；(3) 将步骤(1)的待测样品采用离子色谱‑脉冲安培检测法进行检测，对照步骤(2)的标准曲线，即可得到IPTG的含量；所述离子色谱‑脉冲安培检测法的色谱条件与步骤(2)中的色谱条件相同。

【技术特征摘要】
1.一种IPTG含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品前处理：将样品进行超滤离心处理，得到分子量小于10000道尔顿的待测样品；(2)配置IPTG标准溶液，采用离子色谱-脉冲安培检测法进行检测，得到标准曲线；所述离子色谱-脉冲安培检测法的色谱条件如下：色谱柱反相色谱柱；流动相为缓冲溶液和有机溶剂的混合流动相；其中，缓冲溶液的pH值为1~11；缓冲溶液和有机溶剂的体积比为99~80：1~20；(3)将步骤(1)的待测样品采用离子色谱-脉冲安培检测法进行检测，对照步骤(2)的标准曲线，即可得到IPTG的含量；所述离子色谱-脉冲安培检测法的色谱条件与步骤(2)中的色谱条件相同。2.根据权利要求1所述的IPTG含量的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中的过滤离心处理为采用超滤离心管进行处理。3.根据权利要求2所述的IPTG含量的检测方法，其特征在于：所述超滤离心管中超滤管的孔径范围为0.001~0.02微米。4.根据权利要求1所述的IPTG含量的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中，经过样品前处理之后的待测样品的分子量小于3000道尔顿。5.根据权利要求1所述的IPTG含量的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述色谱柱为采用(弱)非键合硅胶、氰基、...

【专利技术属性】
技术研发人员：王荔，
申请(专利权)人：王荔，
类型：发明
国别省市：上海;31