一种基于高效液相色谱法的沙库必曲中间体及其光学异构体的分离检测方法技术

本发明专利技术属于药物分析技术领域，涉及一种基于高效液相色谱法的沙库必曲中间体及其光学异构体的分离检测方法。本发明专利技术的分离检测方法采用以涂敷有直链淀粉衍生物的硅胶作为固定相的手性柱，并且以非极性混合溶剂作为流动相，实现了简单、快速、准确地分离检测AHU08及其光学异构体(杂质)，解决了含有AHU08及其光学异构体的原料及制剂的分离检测问题，从而确保了沙库必曲以及含有沙库必曲的组合物或制剂的质量可控性。

A method based on high performance liquid chromatography as intermediates will curve and optical isomer separation and detection method

The invention belongs to the technical field of drug analysis, relates to a based on high performance liquid chromatography as intermediates will curve and optical isomer separation and detection method. Separation and detection method of the invention adopts the coated with amylose derivatives as chiral stationary phase of silica gel column, and nonpolar mixed solvents as the mobile phase, to achieve a simple, rapid and accurate detection of AHU08 and its optical isomers (impurities), to solve the problem of raw materials and preparation separation and detection with AHU08 and its optical isomers, thus ensuring the song and will contain as will as the quality control of composition or preparation.

【技术实现步骤摘要】
一种基于高效液相色谱法的沙库必曲中间体及其光学异构体的分离检测方法
本专利技术属于药物分析
，涉及一种基于高效液相色谱法的沙库必曲中间体及其光学异构体的分离检测方法。
技术介绍
瑞士诺华制药公司研发的抗心衰药物Entresto(代号LCZ696)是一种血管紧张素II受体与脑啡肽酶的双重抑制剂，其包含等摩尔的缬沙坦(valsartan)和沙库必曲(sacubitril)。(2R,4S)-5-(联苯-4-基)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-甲基戊酸(代号AHU08)是合成沙库必曲的关键中间体，其分子结构中具有2个手性中心，因此AHU08中往往存在其它3种光学异构体杂质，分别是作为差向异构体的Isomer1(2S,4S)、作为差向异构体的Isomer2(2R,4R)和作为对映异构体的Isomer3(2S,4R)(结构如下所示)。这些光学异构体杂质会残留在药物中，影响药物的质量和安全性。因此，控制AHU08中其它光学异构体的含量，对提高LCZ696的质量，保证广大患者的用药安全具有重大意义。对于上述AHU08的光学异构体杂质，需要在药物合成过程中进行质量控制。然而，对于具有手性碳原子(尤其是多个手性碳原子)的光学异构体的分离一直是手性药物合成和制剂质量控制的难点。经文献检索，未见有关于AHU08及其光学异构体的分离检测方法的报道。
技术实现思路
针对上述情况，本专利技术旨在提供一种基于HPLC的沙库必曲中间体(AHU08)及其光学异构体的分离检测方法。通过该方法能够简单、快速、准确地分离分析AHU08及其光学异构体杂质，可用于AHU08的制备过程和终产品质量控制。具体而言，本专利技术采用如下技术方案：一种基于高效液相色谱法的沙库必曲中间体及其光学异构体的分离检测方法，其采用以涂敷有直链淀粉衍生物的硅胶作为固定相的手性柱，并且以非极性混合溶剂作为流动相，可以将沙库必曲中间体及其光学异构体进行有效分离，从而可以准确控制杂质的含量。在一项优选的实施方案中，所述直链淀粉衍生物为直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。在一项更优选的实施方案中，所述以涂敷有直链淀粉衍生物的硅胶作为固定相的手性柱为CHIRALPAKAD-H手性柱(250mm×4.6mm，5μm)，使用该手性柱可以获得更好的分离效果。该手性柱中的固定相为涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶。在一项优选的实施方案中，所述非极性混合溶剂由低级烷烃和低级脂肪醇组成。所述低级烷烃选自正戊烷、正己烷、正庚烷、正辛烷中的任意一种，优选正己烷。所述低级脂肪醇选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇中的任意一种，优选乙醇。在一项更优选的实施方案中，所述非极性混合溶剂中的低级烷烃的体积百分比为90％～95％(优选92％)，低级脂肪醇的体积百分比为5％～10％(优选8％)。在一项更优选的实施方案中，除了所述低级烷烃和所述低级脂肪醇以外，所述非极性混合溶剂中还包含有机酸。所述有机酸选自甲酸、乙酸、三氟乙酸中的任意一种，优选三氟乙酸。在一项最优选的实施方案中，所述非极性混合溶剂中的有机酸和其余组分(低级烷烃+低级脂肪醇)的体积比为0.1～0.5:100，优选0.3:100。上述分离检测方法可以按照下列方式实施：1)取包含沙库必曲中间体(AHU08)及其光学异构体的样品适量，用流动相溶解，配制成浓度为0.5～1mg/ml(优选0.5mg/ml)的样品溶液；2)设置流动相流速为0.8～1.0ml/min(优选1.0ml/min)，色谱柱柱温为30～35℃(优选35℃)，紫外检测器检测波长为240～270nm(优选254nm)；3)取步骤1)中配制的样品溶液5～20μl(优选10μl)，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，利用面积归一化法计算沙库必曲中间体(AHU08)及其光学异构体的含量，完成分离检测过程。本专利技术采用以涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶作为固定相的手性柱(CHIRALPAKAD-H)，实现了简单、快速、准确地分离检测AHU08及其光学异构体(杂质)；以非极性混合溶剂(正己烷/乙醇+三氟乙酸)作为流动相，确保了溶液的稳定性；通过优化流动相流速、色谱柱柱温以及进样体积等参数，提高了色谱峰的对称性。本专利技术解决了含有AHU08及其光学异构体的原料及制剂的分离检测问题，从而确保了沙库必曲以及含有沙库必曲的组合物或制剂的质量可控性。附图说明图1为实施例1中以正己烷:乙醇:三氟乙酸＝92:8:0.1(v/v/v)作为流动相的HPLC图谱。图2为实施例2中以正己烷:乙醇:三氟乙酸＝92:8:0.3(v/v/v)作为流动相的HPLC图谱。图3实施例3中以正己烷:乙醇:三氟乙酸＝92:8:0.5(v/v/v)作为流动相的HPLC图谱。具体实施方式下面将结合具体的实施例对本专利技术中的技术方案做出进一步的阐述。除非另有说明，下列实施例中所使用的试剂、材料及仪器均可通过常规商业手段获得。实施例1：AHU08及其光学异构体的分离检测。仪器与条件：高效液相色谱仪：ThermoU3000(Thermo公司)；色谱柱：CHIRALPAKAD-H手性柱(250mm×4.6mm，5μm)(Daicel公司)；流动相：正己烷:乙醇:三氟乙酸＝92:8:0.1(v/v/v)；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：254nm；进样体积：10μl。实施步骤：称取AHU08、Isomer1、Isomer2、Isomer3各2mg，置于20ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。取AHU0810mg，精密称定，置于20ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。分别量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，AHU08与其光学异构体的分离度应大于1.5。量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，采用面积归一化法计算4种成分的含量，要求除AHU08以外的3种异构体的含量不得大于1％，其结果如图1所示。由图1可知，AHU08的保留时间为12.493min，Isomer1的保留时间为13.810min，Isomer2和Isomer3的保留时间为17.025min，各峰之间的分离度均大于2.0。实施例2：AHU08及其光学异构体的分离检测。仪器与条件：高效液相色谱仪：ThermoU3000(Thermo公司)；色谱柱：CHIRALPAKAD-H手性柱(250mm×4.6mm，5μm)(Daicel公司)流动相：正己烷:乙醇:三氟乙酸＝92:8:0.3(v/v/v)；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：254nm；进样体积：10μl。实施步骤：称取AHU08、Isomer1、Isomer2、Isomer3各2mg，置于20ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。取AHU0810mg，精密称定，置于20ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。分别量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，AHU08与其光学异构体的分离度应大于1.5。量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，采用面积归一化法计算4种成分的含量，要求除AHU08以外的3种异构体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于高效液相色谱法的沙库必曲中间体及其光学异构体的分离检测方法，其特征在于：采用以涂敷有直链淀粉衍生物的硅胶作为固定相的手性柱，并且以非极性混合溶剂作为流动相；其中：所述沙库必曲中间体的结构式如下所示：

【技术特征摘要】
1.一种基于高效液相色谱法的沙库必曲中间体及其光学异构体的分离检测方法，其特征在于：采用以涂敷有直链淀粉衍生物的硅胶作为固定相的手性柱，并且以非极性混合溶剂作为流动相；其中：所述沙库必曲中间体的结构式如下所示：2.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述直链淀粉衍生物为直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。3.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述以涂敷有直链淀粉衍生物的硅胶作为固定相的手性柱为CHIRALPAKAD-H手性柱。4.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述非极性混合溶剂由低级烷烃和低级脂肪醇组成，所述低级烷烃选自正戊烷、正己烷、正庚烷、正辛烷中的任意一种，所述低级脂肪醇选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇中的任意一种。5.根据权利要求4所述的分离检测方法，其特征在于：所述非极性混合溶剂中的低级烷烃的体积百分比为90％～95％，低级脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：燕立波，王燕，金永华，
申请(专利权)人：江苏开元医药化工有限公司，江苏开元药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32