建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱的方法及其质量检测方法技术

本发明专利技术提供了建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱的方法，该方法采用超高效液相色谱法建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱，包括以下步骤：1)制备仙灵骨葆胶囊的供试品溶液；2)制备朝藿定C对照品溶液：3)采用超高效液相色谱仪进行色谱分析，记录色谱图；4)以朝藿定C的色谱保留时间为1计算得到的各色谱峰的相对保留时间，得到指纹图谱，并限定了所述超高效液相色谱仪的色谱条件。本发明专利技术还提供了上述技术UPLC来检测该产品质量的方法，利用了在不同时间段采用不同的检测波长以更好地实现仙灵骨葆胶囊中化学成分的检测；与现有仙灵骨葆胶囊指纹图谱研究相比，能检出更多的特征成分；同时，缩减了分析时间，减少了溶剂的消耗。

【技术实现步骤摘要】
建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱的方法及其质量检测方法
本专利技术涉及中药质量的检测领域，具体涉及建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱的方法，本专利技术还涉及所述仙灵骨葆胶囊的质量检测方法。
技术介绍
中药复方制剂“仙灵骨葆”胶囊是由著名骨伤科专家时光达教授依据中医学“肾主骨”的骨代谢平衡理论，在苗族民间验方的基础上，结合多年临床验证筛选后研制而成。它是由淫羊藿、续断、丹参、补骨脂、知母、地黄六味中药组成的复方中成药制剂。淫羊藿，别名仙灵脾，其性温，味辛、甘，归肾、肝经，补肾精，强筋骨。续断，其性微温，味辛、甘、苦，归肾、肝经，补肝肾，行血脉，续筋骨。补骨脂，其性大温，味辛、苦，归肾、脾经，补肾壮阳，固精缩尿。地黄，其性微温，味甘，归肾、肝经，养血滋阴，补精益髓。丹参，其性微寒，味苦，益气养血，活血化瘀。知母，其性寒，味苦、甘，活血化瘀，滋阴润燥。方中以淫羊藿、续断、补骨脂、地黄补精填髓，强精壮骨；由于有瘀血阻滞脉络不通，不通则痛，气血失去滋养，则以丹参、知母益气活血，化瘀，瘀去则新生，通则不痛。全方以补肾壮骨为主，兼以活血化瘀，以达到标本兼治之效。通过现代循证医学原则——“随机分组、双盲对照，多中心观察”进行的临床实验，确认了“仙灵骨葆”胶囊抗骨质疏松的临床疗效及其安全性。2007年，美国药品评价机构信纳克医学研究中心按照循证医学原理，对仙灵骨葆的临床药效进行了确认，随后，又启动了仙灵骨葆在美国的FDA认证程序。这是我国第一个按照国际通行药品验证标准和美国食品药品监督管理局(FDA)标准评定的中药相关实验。仙灵骨葆胶囊已入选《国家基本药物目录》(2009版)。在临床上，仙灵骨葆主要用于骨质疏松症的预防和治疗。但是，到目前为止，对于仙灵骨葆的质量标准较低，现行国家食品药品监督管理局药品标准(试行)(WS-10269(ZD-0269)-2002)，仅对其中单个成分淫羊藿苷的含量进行了规定，即“每克仙灵骨葆胶囊粉末中淫羊藿苷的含量不低于3毫克”。根据2010年药典编制大纲提出中成药及中药材应“逐步由单一指标性成分定性定量测定，向活性、有效成分及生物测定的综合检测过渡，向多成分和指纹或特征图谱整体质量控制模式转化”。其中，在对鉴定的技术要求中指出，所采用的色谱特征图谱，“应至少指认其中3个以上的有效成分、特征成分或主成分并对其比例作出规定，而指认峰的峰面积之和应大于总峰面积的50％。”(参见2010年版《中华人民共和国药典》一部提取物质量标准起草技术要求)。为此，有必要建立一种稳定、精密度高的多成分和特征指纹图谱，用以科学、有效地检测中药复方制剂仙灵骨葆胶囊的质量。该指纹图谱应具有以下几个特点：1、至少应指认出指纹图谱中3个以上的色谱峰，指认色谱峰的峰面积之和应大于总峰面积的50％；2、指认的色谱峰应能覆盖复方中的组成中药；3、指认的色谱峰应当覆盖与组方(复方)功效大体相应的活性成分。
技术实现思路
为解决现有技术存在的问题与不足，本专利技术的主要目的在于为包含淫羊藿、续断、补骨脂、丹参、知母、地黄六味中药的复方仙灵骨葆胶囊提供一种基于指纹图谱技术的简便、稳定、精密度高的整体质量检测方法。本专利技术的再一目的是提供建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱及其标准指纹图谱的方法。本专利技术的主要目的通过下列技术方案实现：本专利技术提供了建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱的方法，该方法采用超高效液相色谱法建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱，包括以下步骤：1)制备仙灵骨葆胶囊的供试品溶液；2)制备朝藿定C对照品溶液：3)采用超高效液相色谱仪进行色谱分析，记录色谱图；4)以朝藿定C的色谱保留时间为1计算得到的各色谱峰的相对保留时间，得到指纹图谱；所述超高效液相色谱仪的色谱条件是：采用AcquityUPLCBEHShieldRP18色谱柱(2.1×50mm,1.7μm)；以乙腈(D)-水(C)(各含体积分数为0.1％的甲酸)作为流动相，梯度洗脱：0-2min2％-9％D，2-3min9％-12.5％D，3-3.5min12.5％-15.5％D，3.5-5min15.5％-20.5％D，5-5.5min20.5％-22.5％D，5.5-6min22.5％-23.5％D，6-7.5min23.5％-28％D，7.5-8min28％-28％D，8-9min28％-37％D，9-10min37％-38％D，10-12min38％-50％D，12-12.8min50％-65％D，12.8-14.3min65％-65％D，14.3-15min65％-100％D，15-16min100％-100％D，16-16.5min100％-2％D，16.5-18min2％-2％D；流速为0.5mL/min；检测波长：0～7.6min，254nm；7.6min～18min，270nm；色谱柱温度为30℃；进样量：2μL；以朝藿定C计算，理论塔板数在5000-8000范围之内。优选的，所述制备仙灵骨葆胶囊的供试品溶液的步骤还包括将仙灵骨葆胶囊内容物加入到体积分数为60％甲醇中，使得仙灵骨葆胶囊内容物的浓度为0.02g/mL，充分混合，离心，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液即得仙灵骨葆胶囊的供试品溶液。进一步地，本专利技术提供了建立仙灵骨葆胶囊的标准指纹图谱的方法，该方法采用超高效液相色谱法建立仙灵骨葆胶囊的标准指纹图谱，其中所述标准指纹图谱含有28个色谱峰，峰面积总和占总峰面积80％以上；所述方法包括以下步骤：1)制备仙灵骨葆胶囊的供试品溶液；2)制备朝藿定C对照品溶液：3)采用超高效液相色谱仪进行色谱分析，记录色谱图；4)以朝藿定C的色谱保留时间为1计算得到的各色谱峰的相对保留时间，得到指纹图谱；所述超高效液相色谱仪的色谱条件是：采用AcquityUPLCBEHShieldRP18色谱柱(2.1×50mm,1.7μm)；以乙腈(D)-水(C)(各含体积分数为0.1％的甲酸)作为流动相，梯度洗脱：0-2min2％-9％D，2-3min9％-12.5％D，3-3.5min12.5％-15.5％D，3.5-5min15.5％-20.5％D，5-5.5min20.5％-22.5％D，5.5-6min22.5％-23.5％D，6-7.5min23.5％-28％D，7.5-8min28％-28％D，8-9min28％-37％D，9-10min37％-38％D，10-12min38％-50％D，12-12.8min50％-65％D，12.8-14.3min65％-65％D，14.3-15min65％-100％D，15-16min100％-100％D，16-16.5min100％-2％D，16.5-18min2％-2％D；流速为0.5mL/min；检测波长：0～7.6min，254nm；7.6min～18min，270nm；色谱柱温度为30℃；进样量：2μL；以朝藿定C计算，理论塔板数在5000-8000范围之内。优选的，所述制备仙灵骨葆胶囊的供试品溶液的步骤还包括将仙灵骨葆胶囊内容物加入到体积分数为60％甲醇中，使得仙灵骨葆胶囊内容物的浓度为0.02g/mL，充分混合，离心，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液即得仙灵骨葆胶囊的供试品溶液。优选的，所述方法还包括确定所述标准指纹图谱的重现性的步骤。通过对6份仙灵骨葆胶囊内容本文档来自技高网...

【技术保护点】
建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱的方法，其特征在于，采用超高效液相色谱法建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱，包括以下步骤：1)制备仙灵骨葆胶囊的供试品溶液；2)制备朝藿定C对照品溶液：3)采用超高效液相色谱仪进行色谱分析，记录色谱图；4)以朝藿定C的色谱保留时间为1计算得到的各色谱峰的相对保留时间，得到指纹图谱；所述超高效液相色谱仪的色谱条件是：采用Acquity UPLC BEH Shield RP18色谱柱(2.1×50mm,1.7μm)；以乙腈(D)‑水(C)(各含体积分数为0.1％的甲酸)作为流动相，梯度洗脱：0‑2min 2％‑9％D，2‑3min 9％‑12.5％D，3‑3.5min 12.5％‑15.5％D，3.5‑5min 15.5％‑20.5％D，5‑5.5min 20.5％‑22.5％D，5.5‑6min 22.5％‑23.5％D，6‑7.5min 23.5％‑28％D，7.5‑8min 28％‑28％D，8‑9min28％‑37％D，9‑10min 37％‑38％D，10‑12min 38％‑50％D，12‑12.8min50％‑65％D，12.8‑14.3min 65％‑65％D，14.3‑15min 65％‑100％D，15‑16min100％‑100％D，16‑16.5min 100％‑2％D，16.5‑18min 2％‑2％D；流速为0.5mL/min；检测波长：0～7.6min，254nm；7.6min～18min，270nm；色谱柱温度为30℃；进样量：2μL；以朝藿定C计算，理论塔板数在5000‑8000范围之内。...

【技术特征摘要】
1.建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱的方法，其特征在于，采用超高效液相色谱法建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱，包括以下步骤：1)制备仙灵骨葆胶囊的供试品溶液；2)制备朝藿定C对照品溶液：3)采用超高效液相色谱仪进行色谱分析，记录色谱图；4)以朝藿定C的色谱保留时间为1计算得到的各色谱峰的相对保留时间，得到指纹图谱；所述超高效液相色谱仪的色谱条件是：采用规格为2.1×50mm,1.7μm的AcquityUPLCBEHShieldRP18色谱柱；以含体积分数0.1％的甲酸的乙腈D和含体积分数0.1％的甲酸的水C作为流动相，梯度洗脱：0-2min2％-9％D，2-3min9％-12.5％D，3-3.5min12.5％-15.5％D，3.5-5min15.5％-20.5％D，5-5.5min20.5％-22.5％D，5.5-6min22.5％-23.5％D，6-7.5min23.5％-28％D，7.5-8min28％-28％D，8-9min28％-37％D，9-10min37％-38％D，10-12min38％-50％D，12-12.8min50％-65％D，12.8-14.3min65％-65％D，14.3-15min65％-100％D，15-16min100％-100％D，16-16.5min100％-2％D，16.5-18min2％-2％D；流速为0.5mL/min；检测波长：0～7.6min，254nm；7.6min～18min，270nm；色谱柱温度为30℃；进样量：2μL；以朝藿定C计算，理论塔板数在5000-8000范围之内。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制备仙灵骨葆胶囊的供试品溶液的步骤还包括将仙灵骨葆胶囊内容物加入到体积分数为60％甲醇中，使得仙灵骨葆胶囊内容物的浓度为0.02g/mL，充分混合，离心，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液即得仙灵骨葆胶囊的供试品溶液。3.建立仙灵骨葆胶囊的标准指纹图谱的方法，其特征在于，采用超高效液相色谱法建立仙灵骨葆胶囊的标准指纹图谱，其中所述标准指纹图谱含有28个色谱峰，峰面积总和占总峰面积80％以上；所述方法包括以下步骤：1)制备仙灵骨葆胶囊的供试品溶液；2)制备朝藿定C对照品溶液：3)采用超高效液相色谱仪进行色谱分析，记录色谱图；4)以朝藿定C的色谱保留时间为1计算得到的各色谱峰的相对保留时间，得到指纹图谱；所述超高效液相色谱仪的色谱条件是：采用规格为2.1×50mm,1.7μm的AcquityUPLCBEHShieldRP18...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚志红，戴毅，吴肖蒙，周先强，姚新生，周宁，
申请(专利权)人：国药集团同济堂贵州制药有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52