一种检测麦冬中黄酮含量的高效液相色谱方法技术

本发明专利技术公开了一种检测麦冬中黄酮含量的高效液相色谱方法，包括以下步骤：a、取麦冬黄酮的对照品，制备对照品溶液，用高效液相色谱方法进行检测，得到标准曲线；b、取待检的麦冬样品，制备供试品溶液，用高效液相色谱方法进行检测；c、计算麦冬样品中的黄酮含量；步骤a和b所用高效液相色谱方法的色谱条件为：C18色谱柱；流动相为乙腈-水溶液，乙腈与水的体积比为35：65～65：35。本发明专利技术高效液相色谱方法，采用等度洗脱，便于操作，检测方法简单，且具有良好的线性关系、精密度、稳定性和重复性，加样回收率高，检测结果准确、可靠。

【技术实现步骤摘要】
一种检测麦冬中黄酮含量的高效液相色谱方法
本专利技术涉及一种检测麦冬中黄酮含量的高效液相色谱方法。
技术介绍
中药材成分复杂，功效众多，其质量评价正向快速、高效、样品前处理简单、高重复性、低成本、容易操作的方向发展。HPLC同时测定多种成分的检测方法已成为当前分析研究中药材、中成药质量的最有效方法之一。特别是对于一些多基源、多产地品种，多种成分评价更能真实的反应不同来源药材质量的差异性，为临床用药提供更为可靠的参考依据。麦冬，来源于百合科沿阶草属植物Ophiopogonjaponicus(L.f)Ker-Gawl.的干燥块根，是常用中药材之一，主要用于治疗肺燥干咳，阴虚痨嗽，喉痹咽痛，津伤口渴，内热消渴等疾病，已收录在《中国药典2010年版》一部中，其产地主要分布在四川、浙江、湖北、山东、安徽等。麦冬的有效成分中，包括甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B、6-醛基异麦冬黄烷酮A、麦冬甲基黄烷酮A、甲基麦冬二氢高异黄酮B等多种黄酮成分。为了有效的监控麦冬药材的产品质量，需要对麦冬中的多种黄酮成分一一进行含量测定。中国专利CN102445502A、CN102759582A测定了甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B、6-醛基异麦冬黄烷酮A这3种黄酮成分的含量，其高效液相色谱检测方法需要采用特定的梯度洗脱条件，才能实现较好的检测效果，存在操作复杂、出峰时间长等缺陷。为了解决现有检测方法中存在的问题，同时为了更有效的监控麦冬药材的产品质量，我们寻求建立一种检测麦冬药材的新方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测麦冬中黄酮含量的高效液相色谱方法。本专利技术提供的一种检测麦冬中黄酮含量的高效液相色谱方法，包括以下步骤：a、取麦冬黄酮的对照品，制备对照品溶液，用高效液相色谱方法进行检测，得到标准曲线；b、取待检的麦冬样品，制备供试品溶液，用高效液相色谱方法进行检测；c、计算麦冬样品中的黄酮含量；步骤a和b所用高效液相色谱方法的色谱条件为：C18色谱柱；流动相为乙腈-水溶液，乙腈与水的体积比为35：65～65：35。进一步的，步骤a中，麦冬黄酮的对照品选自甲基麦冬高黄酮A、麦冬甲基黄烷酮A、甲基麦冬二氢高异黄酮B中的任意一种或两种以上。进一步的，步骤a中，制备对照品溶液的溶剂为甲醇。进一步的，步骤a中，所述标准曲线是对照品色谱峰的峰面积与对照品浓度之间的线性关系方程。进一步的，步骤b中，制备供试品溶液的方法为：取麦冬粉末，过筛，加入甲醇A，静置12h～48h后，超声提取30min～90min，过滤，滤渣加入甲醇B，超声提取15min～60min，过滤，合并滤液，过0.45μm滤膜，所得滤液即为供试品溶液；麦冬粉末与甲醇A的重量体积比为1：6～1.5：100g/ml；麦冬粉末与甲醇B的重量体积比为1：4～1.5：60g/ml。进一步的，所述的色谱条件中，C18色谱柱为ComatexC18柱或Kromasil100-5C18柱；长度为250mm，内径为4.6mm，填充剂粒径为3.5μm。进一步的，所述的色谱条件中，乙腈与水的体积比为58：42。进一步的，所述的色谱条件中，体积流量为0.8mL/min～1.5mL/min；优选的，体积流量为1.0mL/min。进一步的，所述的色谱条件中，检测波长为200nm～400nm；优选的，检测波长为278nm～296nm。进一步的，所述的色谱条件中，柱温为25℃～35℃；进样量为10μL～30μL。本专利技术高效液相色谱方法，采用等度洗脱，便于操作，检测方法简单，且具有良好的线性关系、精密度、稳定性和重复性，加样回收率高，检测结果准确、可靠，为麦冬药材的质量评价提供了一种行之有效的检测方法，非常有利于麦冬药材的质量评价和质量控制标准建立。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为本专利技术对混合对照品和供试品溶液的高效液相色谱检测结果：混合对照品(a)和供试品溶液(b)的HPLC色谱图：1是指甲基麦冬高黄酮A的色谱峰；2是指麦冬甲基黄烷酮A的色谱峰；3是指甲基麦冬二氢高异黄酮B的色谱峰。具体实施方式本专利技术具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。Agilent1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司，包括二元泵，自动进样器，DAD检测器)，BP121S十万分之一电子天平(德国赛多利斯公司)，KQ-500DB数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，Milli-QAdvantageA10超纯水仪(法国默克密理博)。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；甲基麦冬高黄酮A(批号：MUST-14080709)和麦冬甲基黄烷酮A(批号：MUST-14052901)对照品由成都曼思特生物科技有限公司提供，甲基麦冬二氢高异黄酮B(批号:140525)对照品由四川维克奇生物科技有限公司提供，质量分数均≥98％；检测样品为2015年4月在三台地区收集麦冬药材，共10个批次，经成都中医药大学李敏教授鉴定为Ophiopogonjaponicus(L.f)Ker-Gawl.的干燥块根。实施例1、本专利技术高效液相色谱方法检测麦冬样品中黄酮含量1、溶液制备1.1制备混合对照品溶液精密称定甲基麦冬高黄酮A、麦冬甲基黄烷酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B3种对照品9.98、10.02、9.86mg，加甲醇超声溶解并定容至25mL，制成浓度分别为0.3992、0.4008、0.3955mg/mL的对照品供试溶液。1.2制备供试品溶液取待检的麦冬粉末(过4号筛)3.0g，精密称定，加甲醇50mL，静置24h，超声提取45min，过滤，滤渣加甲醇30mL，超声提取30min，过滤，合并滤液，回收溶剂至1～2ml，转入5ml容量瓶中，洗涤3～4次，洗涤液一并转入容量瓶中，定容至刻度，0.45μm滤膜滤过，得滤液即为供试品溶液。2、色谱条件色谱柱为ComatexC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈:水(58:42)，体积流量1.0mL/min；柱温30℃，检测波长296nm，进样量20μL。采用上述色谱条件的高效液相色谱方法分别检测对照品溶液、供试品溶液；按外标法以峰面积计算得到麦冬中甲基麦冬高黄酮A、麦冬甲基黄烷酮A、甲基麦冬二氢高异黄酮B的含量。混合对照品和供试品溶液的高效液相色谱检测结果，如图1所示。结果表明，本专利技术方法可以使得麦冬中甲基麦冬高黄酮A、麦冬甲基黄烷酮A、甲基麦冬二氢高异黄酮B等组分的色谱峰之间完全分离开，从而实现对麦冬药材的定性和定量检测。实施例2、本专利技术高效液相色谱方法检测麦冬样品中黄酮含量色谱条件为：色谱柱为ComatexC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈:水(35:65)，体积流量1.2mL/min；柱温35℃，检测波长278nm，进样量15μL。其他条件参考实施例1。实施例3、本专利技术高效液相色谱方法检测麦冬样品中黄酮含量色谱条件为：色谱柱为K本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测麦冬中黄酮含量的高效液相色谱方法，其特征在于：包括以下步骤：a、取麦冬黄酮的对照品，制备对照品溶液，用高效液相色谱方法进行检测，得到标准曲线；b、取待检的麦冬样品，制备供试品溶液，用高效液相色谱方法进行检测；c、计算麦冬样品中的黄酮含量；步骤a和b所用高效液相色谱方法的色谱条件为：C18色谱柱；流动相为乙腈‑水溶液，乙腈与水的体积比为35：65～65：35。

【技术特征摘要】
1.一种检测麦冬中黄酮含量的高效液相色谱方法，其特征在于：包括以下步骤：a、取麦冬黄酮的对照品，制备对照品溶液，用高效液相色谱方法进行检测，得到标准曲线；b、取待检的麦冬样品，制备供试品溶液，用高效液相色谱方法进行检测；制备供试品溶液的方法为：取麦冬粉末，过筛，加入甲醇A，静置12h～48h后，超声提取30min～90min，过滤，滤渣加入甲醇B，超声提取15min～60min，过滤，合并滤液，过0.45μm滤膜，所得滤液即为供试品溶液；麦冬粉末与甲醇A的重量体积比为1：6～1.5：100g/ml；麦冬粉末与甲醇B的重量体积比为1：4～1.5：60g/ml；c、计算麦冬样品中的黄酮含量；步骤a和b所用高效液相色谱方法的色谱条件为：C18色谱柱；流动相为乙腈-水溶液，乙腈与水的体积比为58：42；检测波长为278nm～296nm；柱温为25℃～35℃；体积...

【专利技术属性】
技术研发人员：李敏，吴发明，杨瑞山，曾俊，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：四川;51