一种风寒感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法技术

一种风寒感冒颗粒HPLC 特征图谱的构建方法，包括下述步骤：（1）参照物溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，（2）供试品溶液的制备：取风寒感冒颗粒研细，取约2~5g，精密称定，（3）色谱条件：采用ZORBAX SB‑C18色谱柱，流动相为以乙腈‑0.1％磷酸溶液为3~70：97~30的混合溶液；体积流量0.5～1.5ml /min；DAD检测器，波长为190～250nm；柱温25 ～45℃，理论板数均不低于10000，（4）测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到风寒感冒颗粒的HPLC 特征图谱；本发明专利技术的优点是能有效的监控不同批次间风寒感冒颗粒的质量，方法具有精密度高、重现性好等特点，有利于全面监控产品的质量。

Construction method of HPLC characteristic Atlas of wind cold cold granule

A construction method of fenghanganmao granules HPLC fingerprint, which comprises the following steps of: (1) the reference solution preparation of Puerarin: take control amount of goods, precision said, (2) for sample preparation: fenghanganmao granules porphyrized, about 2~5g, precision said, (3): the ZORBAX SB chromatographic conditions C18 column, the mobile phase was acetonitrile 0.1% phosphoric acid mixed solution of 3~70:97~30; volume flow rate of 0.5 ~ 1.5ml /min; DAD detector, the wavelength of 190 to 250nm; 25 column temperature to 45 DEG C, the number of theoretical plates were not less than 10000 (4) determination: precision draw reference solution and the test solution 5 ~ 20 L, injected into the liquid chromatograph, as determined by high performance liquid chromatography, HPLC fingerprint of fenghanganmao granules; the invention has the advantages of effectively monitoring the different batches The quality of the cold cold granules is characterized by its high precision and good reproducibility, which is beneficial to the overall monitoring of the quality of products.

【技术实现步骤摘要】
一种风寒感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法
本专利技术属于医药领域，具体涉及中成药风寒感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法。
技术介绍
风寒感冒颗粒是由麻黄、葛根、紫苏叶、防风、桂枝、白芷、陈皮、苦杏仁、桔梗、甘草、干姜等十一味中草药组成。主要功能为解表发汗，疏风散寒。用于感冒身热，头痛，咳嗽，鼻塞，流涕等症。现执行质量标准收载于中成药部颁标准，标准号为WS3-B-0045-89，标准中未收载薄层色谱鉴别及含量测定等质量控制方法。由于没有对产品的中间体、成口进行质量监控的有效手段，产品质量不能得到科学的监控，不同厂家生产出的样品间及批间质量差异较大，导致临床应用疗效差异也较大。为了提高风寒感冒颗粒药品的质量，已经对全方进行了质量检测方法研究，但因中药复方制剂中药味较多成分复杂不易分离鉴定等特点，仅能建立起几种专属性强的定性定量检测方法对方中个别成分进行监控，虽然现有技术风寒感冒颗粒的检测方法(专利号：CN103267824B)中对方中麻黄、桔梗进行了定性和定量检测，但只能反映出制剂中麻黄、桔梗所含成分的质量情况，并不能体现药品的整体质量情况。到本专利技术中我们对风寒感冒颗粒进行了HPLC特征图谱试验研究，建立了特征图谱的质量检测方法，并对所建立方法进行了精密度、重复性等方法学验证试验，结果表明本专利技术中检测方法稳定可行。本专利技术克服了风寒感冒颗粒现在执行标准中缺少质量检测方法的不足，以及现有技术中检测方法只能反映极少药物成分质量情况的片面性，建立的特征图谱测定方法是风寒感冒颗粒质量控制方法的有效补充，能反映出所含化学成分的种类和数量，能有效表征其质量，有利于全面控制产品的质量。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供中成药风寒感冒颗粒的HPLC特征图谱的构建方法，该方法包括以下步骤：(1)参照物溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加30～100％甲醇制成每1ml含40～60μg的溶液。(2)供试品溶液的制备:取风寒感冒颗粒研细，取约2～5g，精密称定，精密加入30～100％甲醇50～100ml，称定重量，超声处理30～60分钟，待溶液冷却至室温，用30～100％甲醇补重，摇匀，用0.22～0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。(3)色谱条件：采用ZORBAXSB-C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；流动相为以乙腈-0.1％磷酸溶液为3～70：97～30的混合溶液；体积流量0.5～1.5ml/min；DAD检测器，波长为190～250nm；柱温25～45℃，理论板数均不低于10000。(4)测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到风寒感冒颗粒的HPLC特征图谱。本专利技术的HPLC特征图谱的最佳构建方法如下：(一下技术方案中记载的各物质的用量或用量范围，旨在表明各物质间的用量比例关系，并不限定在记载的具体数量上)优选地，步骤(1)所述参照物溶液浓度为每1ml50％甲醇含50μg葛根素对照品。优选地，步骤(2)所述供试品溶液的制备步骤如下：取风寒感冒颗粒研细，取约2g，精密称定，精密加入50％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。优选地，步骤(3)所述流动相为以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱。梯度洗脱的时间及流动相比例为：0～20min，A相：3％、B相：97％；20～35min，A相：3～9％、B相：97～91％；35～60min，A相：9～19％、B相：91～81％；60～85min，A相：19～50％、B相：81～50％；85～90min，A相：50～70％、B相：50～30％；90～100min，A相：70～3％、B相：30～97％；100～110min，A相：3％、B相：97％。按照前述方法构建15批中成药风寒感冒颗粒的HPLC特征图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件生成由8个共有峰构成的对照特征图谱，所述共有峰中峰2为盐酸麻黄碱峰，峰3为盐酸伪麻黄碱峰，峰4为葛根素峰，峰7为升麻素苷峰，峰8为橙皮苷峰。在对照特征图谱中，以葛根素为参照峰S，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所述相对保留时间在第一规定值的±5％之内，所述第一规定值为：0.37-峰1、0.53-峰2、0.58-峰3、1.00-峰S、1.03-峰5、1.05-峰6、1.11-峰7、1.39-峰8；取风寒感冒颗粒，按上述方法操作，得到风寒感冒颗粒样品特征图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对样品图谱与对照特征图谱进行分析，相似度大于0.90为合格产品。本专利技术的有益效果如下：(1)用本专利技术所提供的方法能有效的监控不同批次间风寒感冒颗粒的质量，方法具有精密度高、重现性好等特点，有利于全面监控产品的质量。(2)本专利技术的质量检测方法以盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素、升麻苷、橙皮苷为对照，建立的风寒感冒颗粒特征图谱注重各个特征峰的顺序和关系，能全面监控产品的整体质量面貌特征，方法科学可靠。(3)本专利技术的最佳紫外吸收波长为210nm。采用本专利技术中方法用DAD检测器对风寒感冒颗粒进行测定，根据三维扫描图中所有色谱峰出现最大吸收的检测波长结果分别调取各波长下色谱图，当检测波长为210nm时，特征峰数目较多，各峰面积较高且各特征峰之间分离效果也最好。附图说明图1是风寒感冒颗粒HPLC特征图谱图2是风寒感冒颗粒15批次HPLC特征图谱叠加图图3是风寒感冒颗粒对照特征图谱附图解释：图1中峰2为盐酸麻黄碱峰，峰3为盐酸伪麻黄碱峰，峰4为葛根素峰，峰7为升麻素苷峰，峰8为橙皮苷峰。具体实施方式实施例1建立风寒感冒颗粒HPLC特征图谱测定方法1仪器：UltiMate3000DGLC高效液相色谱仪，紫外DAD检测器；MettlerAE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。2试剂与试药2.1试剂：甲醇等为分析纯，磷酸、乙腈为色谱纯，水为超纯水。2.2试药：盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素、升麻苷、橙皮苷(均来自中国食品药品鉴定研究院)。3方法与结果3.1参照物溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液。3.2供试品溶液的制备:取风寒感冒颗粒研细，取约2g，精密称定，精密加取50％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。3.3色谱条件：采用ZORBAXSB-C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；流动相为以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱；体积流量1.0mL/min；DAD检测器，波长为210nm；柱温35℃；进样量10μL。理论板数均不低于10000。梯度洗脱的时间及流动相比例为：0～20min，A相：3％、B相：97％；20～35min，A相：3～9％、B相：97～91％；35～60min，A相：9～19％、B相：91～81％；60～85min，A相：19～50％、B相：81～50％；85～90min，A相本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种风寒感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法，其特征是：包括下述步骤：(1)参照物溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加30～100％甲醇制成每1ml含40～60μg的溶液；(2)供试品溶液的制备：取风寒感冒颗粒研细，取约2～5g，精密称定，精密加入30～100％甲醇50～100ml，称定重量，超声处理30～60分钟，放冷，用30～100％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22～0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；(3)色谱条件：采用ZORBAX SB‑C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；流动相为以乙腈‑0.1％磷酸溶液为3～70：97～30的混合溶液；体积流量0.5～1.5ml/min；DAD检测器，波长为190～250nm；柱温25～45℃，理论板数均不低于10000；(4)测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到风寒感冒颗粒的HPLC特征图谱。

【技术特征摘要】
1.一种风寒感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法，其特征是：包括下述步骤：(1)参照物溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加30～100％甲醇制成每1ml含40～60μg的溶液；(2)供试品溶液的制备：取风寒感冒颗粒研细，取约2～5g，精密称定，精密加入30～100％甲醇50～100ml，称定重量，超声处理30～60分钟，放冷，用30～100％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22～0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；(3)色谱条件：采用ZORBAXSB-C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；流动相为以乙腈-0.1％磷酸溶液为3～70：97～30的混合溶液；体积流量0.5～1.5ml/min；DAD检测器，波长为190～250nm；柱温25～45℃，理论板数均不低于10000；(4)测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到风寒感冒颗粒的HPLC特征图谱。2.根据权利要求1所述的一种风寒感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法，其特征是：包括下述步骤：步骤(1)所述参照物溶液浓度为每1ml50％甲醇含50μg葛根素对照品；步骤(2)所述供试品溶液的制备步骤如下：取风寒感冒颗粒研细，取约2g，精密称定，精密加入50％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴萍，李双，白冰，徐建，高嵩，
申请(专利权)人：吉林修正药业新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22