一种尪痹片指纹图谱的建立方法以及利用指纹图谱法鉴定尪痹片的方法技术

本发明专利技术涉及一种尪痹片指纹图谱的建立方法，该方法采用高效液相色谱法获得不同生产批次尪痹片的色谱图，选择各批次尪痹片色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰，用平均值计算法生成尪痹片的指纹图谱；其中，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相的有机相为乙腈，水相为磷酸水溶液。本发明专利技术还涉及利用指纹图谱法鉴定尪痹片的方法。本发明专利技术提供的方法有利于全面监控药物的质量，注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征，既避免了因测定个别化学成分而判定尪痹片质量的片面性，又减少了为质量达标而人为处理的可能性，可应用于尪痹片产品的真伪鉴别、生产过程控制和质量评价，具有简便、精密度高、稳定性好、重现性好的优点。

To establish a method of Wangbi tablet fingerprint and fingerprint identification method by Wang Bi

The invention relates to a method for establishing the fingerprint of Wangbi tablet, the method using high performance liquid chromatogram of different production batches of Wangbi tablets obtained chromatography, selection of chromatographic peaks existed in various batches of Wangbi tablet in the chromatogram as the common peaks of fingerprint, calculation method to generate the average values of Wangbi tablet among them, eighteen; stationary phase C18; the organic phase of the mobile phase was acetonitrile, water for phosphoric acid solution. The invention also relates to a method for using the fingerprint identification method of Wang bi. The present invention provides a method for the quality control of the drug to pay attention to, each composition sequence of fingerprint and the relationship between the holistic features, not only avoid the determination of individual chemical constituents and determine one sidedness of Wangbi Pian quality, and reduce the possibility of quality standards and artificial processing, identification, can be used in the production of Wangbi tablet product process control and quality evaluation, has the advantages of simple, high precision, good stability and good reproducibility.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药质量控制领域，具体涉及尪痹片指纹图谱的建立方法以及利用指纹图谱法鉴定尪痹片的方法。
技术介绍
尪痹片是由地黄、熟地黄、续断、附子(制)、独活、骨碎补、桂枝、淫羊藿、防风、威灵仙、皂刺、羊骨、白芍、狗脊(制)、知母、伸筋草、红花十七味药材组成，具有补肝肾、强筋骨、祛风湿、通经络的功效，用于肝肾不足、久痹体虚、关节疼痛、局部肿大、僵硬畸形、去伸不利及类风湿性关节炎见有上述症候者。该制剂现执行标准(2015版《中国药典》)对成分进行定量分析，但其有效化学成分复杂，单个化学成分的定量分析不能全面反映该药品的整体信息，中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。\整体性\和\模糊性\为其显著特点。为了更好地对尪痹片的质量进行控制，亟需提供精确有效地尪痹片指纹图谱。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种尪痹片指纹图谱的建立方法以及一种利用指纹图谱法鉴定尪痹片的方法。本专利技术所述的尪痹片由地黄、熟地黄、续断、附子(制)、独活、骨碎补、桂枝、淫羊藿、防风、威灵仙、皂刺、羊骨、白芍、狗脊(制)、知母、伸筋草、红花17味药物组方，经多次水提，醇沉，浓缩至稠膏后，加适量辅料混匀，制成颗粒、干燥，压制成片，而得。优选地，所述尪痹制剂的处方具体为：地黄20份、熟地黄20份、续断15份、附片或黑顺片15份、独活10份、骨碎补15份、桂枝10份、淫羊藿15份、白芍12份、防风10份、威灵仙15份、皂角刺10份、羊骨20份、制狗脊15份、知母15份、伸筋草10份、红花10份。本专利技术提供的尪痹片指纹图谱的建立方法，采用高效液相色谱法获得多个生产批次尪痹片的色谱图，选择各批次尪痹片色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰，用平均值计算法生成尪痹片的指纹图谱。所述生产批次优选为10个。所述高效液相色谱法中：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相由有机相和水相组成，所述有机相为乙腈，所述水相为浓度0.05～0.15％的磷酸水溶液。为了获得分离效果好的色谱图，所述流动相的洗脱方式为梯度洗脱；具体为：0～40min，所述有机相的体积百分比由5％增加至18％；40～60min，所述有机相的体积百分比由18％增加至25％；60～80min，所述有机相的体积百分比由25％增加至40％；80～90min，所述有机相的体积百分比由40％增加至80％；90～95min，所述有机相的体积百分比维持在80％。所述方法中，进样体积为5～15μl，优选为10μl。所述方法中，流动相流速为0.8～1.2ml/min，优选为1.0ml/min。所述方法中，采用紫外检测器进行检测，检测波长为230～240nm，优选为235nm。本专利技术所述方法还包括样品溶液的配制，具体为：取尪痹片样品，研磨成粉末状，以1g：20～30ml溶于乙醇，经超声处理后静置放冷，过滤后收集滤液，用乙醇定容，即得。其中，所述尪痹片样品粉末与乙醇的比例优选为1g：25ml。为了确保所述尪痹片样品中的主要成分有效溶出且减少破坏和损失，所述超声处理的频率优选为35～45kHz。本专利技术所述方法获得的色谱图中，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000。作为本专利技术的一种优选方案，所述尪痹片指纹图谱的建立方法包括以下步骤：(1)取尪痹片样品，取包衣后研磨成粉末，精密称定1.0g，置具塞锥形瓶中精密加入稀乙醇溶液25ml，称定重量，以频率40kHz超声处理60min，取出放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得样品溶液；按照上述方法分别配制多个生产批次尪痹片的样品溶液；(2)将所述样品溶液以10μl进样，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈和0.1％磷酸水溶液组成流动相，在流动相流速1ml/min、柱温30℃条件下按以下方式进行梯度洗脱，并在波长235nm条件下进行检测，获得色谱图：0～40min，所述乙腈的体积百分比由5％增加至18％；40～60min，所述乙腈的体积百分比由18％增加至25％；60～80min，所述乙腈的体积百分比由25％增加至40％；80～90min，所述乙腈的体积百分比由40％增加至80％；90～95min，所述乙腈的体积百分比维持在80％；(3)分别获得各个生产批次尪痹片色谱图，选择各批次尪痹片色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰，用平均值计算法生成尪痹片的指纹图谱。采用本专利技术优选方案获得的尪痹片指纹图谱中，包括以下特征峰(相对保留时间)：1(0.10)，2(0.13)，3(0.14)，4(0.19)，5(0.21)，6(0.22)，7(0.26)，8(0.32)，9(0.35)，10(0.41)，11(0.42)，12(0.43)，13(0.48)，14(0.49)，15(0.51)，16(0.66)，17(0.70)，18(0.74)，19(0.79)，20(0.98)，21(S峰)(1.00)，22(1.08)，23(1.09)，24(1.24)。其中，第1～4、8～12、17、19～24号峰均为单峰，基本达到基线分离，5～6、13～14、16、18号峰不是单峰，未达到基线分离；且1～2、7～8、10、12、17～21号峰峰高较高，其余号峰较低。本专利技术同时保护所述方法建立的尪痹片指纹图谱。本专利技术进一步提供一种利用指纹图谱法鉴定尪痹片的方法，该方法采用高效液相色谱法获得待测样品的色谱图，将所述色谱图与尪痹片的指纹图谱进行比较。本专利技术所述鉴定包括针对尪痹片的真伪鉴别、生产过程控制和成品质量评价。所述尪痹片的指纹图谱优选采用本专利技术提供的方法建立。所述获得待测样品的色谱图的高效液相色谱法中：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相由有机相和水相组成，所述有机相为乙腈，所述水相为浓度0.05～0.15％的磷酸水溶液。所述流动相的洗脱方式为梯度洗脱；具体为：0～40min，所述有机相的体积百分比由5％增加至18％；40～60min，所述有机相的体积百分比由18％增加至25％；60～80min，所述有机相的体积百分比由25％增加至40％；80～90min，所述有机相的体积百分比由40％增加至80％；90～95min，所述有机相的体积百分比维持在80％。所述方法中，进样体积为5～15μl，优选为10μl。所述方法中，流动相流速为0.8～1.2ml/min，优选为1.0ml/min。所述方法中，采用紫外检测器进行检测，检测波长为230～240nm，优选为235nm。本专利技术所述方法还包括待测样品溶液的配制，具体为：取待测样品，研磨成粉末状，以1g：20～30ml溶于乙醇，经超声处理后静置放冷，过滤后收集滤液，用乙醇定容，即得。其中，所述待测样品粉末与乙醇的比例优选为1g：25ml。为了确保所述待测样品中的主要成分有效溶出且减少破坏和损失，所述超声处理的频率优选为35～45kHz。作为本专利技术的一种优选方案，所述利用指纹图谱法鉴定尪痹片的方法包括以下步骤：(1)取待测样品，取包衣后研磨成粉末，精密称定1.0g，置具塞锥形瓶中精本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种尪痹片指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用高效液相色谱法获得不同生产批次尪痹片的色谱图，选择各批次尪痹片色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰，用平均值计算法生成尪痹片的指纹图谱；所述高效液相色谱法中：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相由有机相和水相组成，所述有机相为乙腈，所述水相为浓度0.05～0.15％的磷酸水溶液。

【技术特征摘要】
1.一种尪痹片指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用高效液相色谱法获得不同生产批次尪痹片的色谱图，选择各批次尪痹片色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰，用平均值计算法生成尪痹片的指纹图谱；所述高效液相色谱法中：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相由有机相和水相组成，所述有机相为乙腈，所述水相为浓度0.05～0.15％的磷酸水溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的洗脱方式为梯度洗脱；具体为：0～40min，所述有机相的体积百分比由5％增加至18％；40～60min，所述有机相的体积百分比由18％增加至25％；60～80min，所述有机相的体积百分比由25％增加至40％；80～90min，所述有机相的体积百分比由40％增加至80％；90～95min，所述有机相的体积百分比维持在80％。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法中，进样体积为5～15μl；和/或，流动相流速为0.8～1.2ml/min。和/或，采用紫外检测器进行检测，检测波长为230～240nm。4.根据权利要求1～3任意一项所述方法，其特征在于，所述方法还包括样品溶液的配制，具体为：取尪痹片样品，研磨成粉末状，以1g：20～30ml溶于乙醇，经超声处理后静置放冷，过滤后收集滤液，用乙醇定容，即得。5.采用权利要求1～4任意一项所述方法建立的尪痹片指纹图谱。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：屠鹏飞，张文涛，高云佳，周书繁，郭艳，李为理，郑继宇，孙云超，秦培红，王艳敏，
申请(专利权)人：辽宁上药好护士药业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21