草木犀药材指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱技术

本发明专利技术公开了一种草木犀药材指纹图谱的构建方法及其指纹图谱。该方法，包括如下步骤：1)称取草木犀药材粉末，加入30～70％的甲醇水溶液，超声震荡提取，将提取液过滤得到滤液，即得到待测溶液；2)将步骤1)获得的待测溶液进行高效液相色谱分析，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量百分浓度为0.05～0.2％磷酸水溶液为流动相B，进行线性梯度洗脱，流速0.8～1.2ml/min；检测波长275nm；得到草木犀药材的指纹图谱。本发明专利技术方法药材前处理比较简单，并且获得的指纹图谱出峰数目多，各峰分离度较好，在线分析时间短，构成了草木犀药材的指纹特征，可作为草木犀药材的标准指纹图谱。

Construction of melilotic fingerprint and standard fingerprint method

The invention discloses a construction of sweet clover medicine fingerprint and fingerprint. The method comprises the following steps: 1) the melilotic medicinal powder, adding 30 ~ 70% methanol water solution, ultrasonic extraction, the extraction liquid is filtered to obtain filtrate, the test solution is obtained; 2) step 1) solution to be measured by HPLC analysis, with eighteen alkyl silane bond with the silica gel; with acetonitrile as mobile phase A, the mass percent concentration is 0.05 ~ 0.2% phosphoric acid water solution as mobile phase B, linear gradient elution, flow rate of 0.8 ~ 1.2ml/min; the detection wavelength of 275nm; get the fingerprint melilotic medicine. The Chinese medicinal pretreatment method is relatively simple, and the obtained fingerprint peak number, each peak well separated online short analysis time, a fingerprint melilotic medicine, can be used as the standard fingerprint of melilotic medicinal materials.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及本专利技术涉及中药材指纹图谱的构建方法，尤其是草木犀药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。本专利技术属于药物分析

技术介绍
中药指纹图谱特指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体特征的图谱或图像。中药指纹图谱作为一种综合的、可量化的质量控制手段，可提供比单一指标成分更全面的信息。目前，美国FDA、英国草药典、印度草药典、德国药用植物学会、加拿大药用植物协会等均接受指纹图谱的指控方法，中国药品监督管理局也颁发了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》。中药材、中成药指纹图谱技术已经成为牵动行业全面进步、带动中药现代化、推动中药走向世界的关键技术之一。草木犀，又写作草木樨，为豆科植物草木犀属(MelilotusMill.)一年生或二年生草本。以全草入药，生于沙丘、山坡、草原、海边，分布于我国大部分省区，又名辟汉草、省头草、野苜蓿及铁扫把，目前栽培的多为白花草木犀和黄花草木犀。黄花草木犀由于其自身的生长优势和化学成分适宜，在中国被用作很好的香料原料。民间以叶、花制成软膏，用作外用药，或煎服用于治疗浮肿、腹痛、疟疾等证。本专利中提供了一种草木犀药材指纹图谱的构建方法，该方法简单、快速、有效。
技术实现思路
本专利技术提供一种草木犀药材指纹图谱的构建方法，以及由此方法得到的草木犀标准指纹图谱。所述方法前处理比较简单，并且获得的指纹图谱出峰数目多，各峰分离度较好，在线分析时间短，构成了草木犀药材的指纹特征，可作为草木犀药材的标准指纹图谱。本专利技术的草木犀药材高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：1)称取草木犀药材粉末，加入体积百分浓度为30～70％的甲醇水溶液，超声震荡提取，将提取液过滤得到滤液，即得到待测溶液；2)将步骤1)获得的待测溶液进行高效液相色谱分析，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量百分浓度为0.05～0.2％磷酸水溶液为流动相B，进行线性梯度洗脱得到草木犀药材的指纹图谱，其中，流速为0.8～1.2ml/min；检测波长为275nm。所述方法中，所述步骤2)中梯度洗脱程序以如下体积比浓度配置进行：，即所述步骤2)中梯度洗脱程序如下:梯度1：第0-5min进行等度洗脱，流动相A的体积百分浓度为3～10％，流动相B的体积百分浓度为97～90％；梯度2：第5-45min进行线性梯度洗脱，流动相A的体积百分浓度由3～10％线性增至22～25％，流动相B的体积百分浓度由97～90％线性降至78～75％；梯度3：第45-60min进行线性梯度洗脱，流动相A的体积百分浓度由22～25％线性降至3～10％，流动相B的体积百分浓度由78～75％线性升至97～90％。在本专利技术一个技术方案中，所述步骤2)中梯度洗脱程序以如下体积比浓度配置进行：，即所述步骤2)中梯度洗脱程序如下:梯度1：第0-5min进行等度洗脱，流动相A的体积百分浓度为3％，流动相B的体积百分浓度为97％；梯度2：第5-45min进行线性梯度洗脱，流动相A的体积百分浓度由3％线性增至22％，流动相B的体积百分浓度由97％线性降至78％；梯度3：第45-60min进行线性梯度洗脱，流动相A的体积百分浓度由22％线性降至3％，流动相B的体积百分浓度由78％线性升至97％。所述方法中，所述步骤2)中十八烷基硅烷键合硅胶为YMCJ'sphereODS-M80、YMC-PackODS-A或AgilentEclipsePlusC18；流动相B为质量百分浓度为0.1％的磷酸水溶液；流速为1.0ml/min。在本专利技术一个技术方案中，所述步骤2)中所述高效液相色谱分析的柱温25～45℃，优选为30℃。在本专利技术一个技术方案中，所述方法还包括配制香豆素对照品溶液，并将其进行高效液相色谱分析，然后以香豆素对照品溶液的指纹图谱为参照，以香豆素峰为参照，根据相对保留时间标定供试品溶液的指纹特征的步骤。在本专利技术一个技术方案中，所述步骤1)中，所述超声振荡的时间为30～40min，优选为30min。在本专利技术一个技术方案中，所述步骤1)中，还包括将滤渣重复添加体积百分浓度为30～70％的甲醇水溶液，超声震荡提取，过滤，将滤液合并，并定容至250ml，作为待测溶液；其中，所述草木樨药材粉末或者滤渣与体积百分浓度为30～70％的甲醇水溶液的添加比例为2g：80～100ml。在本专利技术一个技术方案中，所述步骤1)中，所述甲醇水溶液的体积百分浓度为50％，所述草木樨药材粉末或者滤渣与甲醇水溶液的添加比例为2g：90ml。在本专利技术一个技术方案中，所述步骤1)中，所述过滤为用孔径为0.45um的滤膜过滤。在本专利技术的一个技术方案中，所述步骤2)中，高效液相色谱的进样量为20μl。通过上述方法，本专利技术获得了草木樨药材的高效液相色谱指纹图谱。在本专利技术的中，所述HPLC指纹图谱，可以为下述指纹图谱：由29个共有特征峰组成，特征峰的保留时间分别为：峰1：3.2min、峰2：3.5min、峰3：4.9min、峰4：6.2min、峰5：6.6min、峰6：13.1min、峰7：13.7min、峰8：15.1min、峰9：15.6min、峰10：20.7min、峰11：24.0min、峰12：30.3min、峰13：31.1min、峰14：32.4min、峰15：32.8min、峰16：33.7min、峰17:34.3min、峰18：34.8min、峰19：35.8min、峰20：36.8min、峰21：37.7min、峰22：38.6min、峰23：39.4min、峰24：40.0min、峰25：41.9min、峰26：44.0min、峰27：46.4min、峰28：48.1min、峰29：50.3min。以29号峰香豆素为参照峰，特征峰的相对保留时间分别为:峰1：0.063(±5％)、峰2：0.069(±5％)、峰3：0.097(±5％)、峰4：0.122(±5％)、峰5：0.131(±5％)、峰6：0.261(±5％)、峰7：0.273(±5％)、峰8：0.300(±5％)、峰9：0.311(±5％)、峰10：0.411(±5％)、峰11：0.476(±5％)、峰12：0.602(±5％)、峰13：0.618(±5％)、峰14：0.644(±5％)、峰15：0.652(±5％)、峰16：0.671(±5％)、峰17：0.681(±5％)、峰本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种草木犀药材高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：1)称取草木犀药材粉末，加入体积百分浓度为30～70％的甲醇水溶液，超声震荡提取，将提取液过滤得到滤液，即得到待测溶液；2)将步骤1)获得的待测溶液进行高效液相色谱分析，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量百分浓度为0.05～0.2％磷酸水溶液为流动相B，进行线性梯度洗脱，得到草木犀药材的指纹图谱，其中，流速为0.8～1.2ml/min；检测波长为275nm。

【技术特征摘要】
1.一种草木犀药材高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
1)称取草木犀药材粉末，加入体积百分浓度为30～70％的甲醇水溶液，
超声震荡提取，将提取液过滤得到滤液，即得到待测溶液；
2)将步骤1)获得的待测溶液进行高效液相色谱分析，用十八烷基硅烷键
合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量百分浓度为0.05～0.2％磷酸水溶
液为流动相B，进行线性梯度洗脱，得到草木犀药材的指纹图谱，其中，流速
为0.8～1.2ml/min；检测波长为275nm。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中梯度洗脱程
序以如下体积比浓度配置进行：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中梯度洗脱程
序以如下体积比浓度配置进行：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中十八烷基硅
烷键合硅胶为YMCJ'sphereODS-M80、YMC-PackODS-A或AgilentEclipse
PlusC18；流动相B为质量百分浓度为0.1％的磷酸水溶液；流速为1.0ml/min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述高效
液相色谱分析的柱温25～45℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法还包括配制香豆
素对照品溶液，并将其进行高效液相色谱分析，然后以香豆素对照品溶液的指
纹图谱为参照，根据相对保留时间标定供试品溶液的指纹特征的步骤。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述超声
振荡的时间为30～40min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，还包括将
滤渣重复添加体积百分浓度为30～70％的甲醇水溶液，超声震荡提取，过滤，
将滤液合并，并定容至250ml，作为待测溶液；其中，所述草木樨药材粉末或
者滤渣与体积百分浓度为30～70％的甲醇水溶液的添加比例为2g：80～100ml。
9.根据权利要求1或8所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述
甲醇水溶液的体积百分浓度为50％，所述草木樨药材粉末或者滤渣与甲醇水溶
液的添加比例为2g：90ml。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述过
滤为用孔径为0.45um的滤膜过滤。
11.一种草木樨药材的高效液相色谱指纹图谱，由权利要求1-10中任意一
项所述的方法获得。
12.根据权利要求11所述的高效液相色谱指纹图谱，其特征在于，所述
高效液相色谱指纹图谱为：
由29个共有特征峰组成，以29号峰香豆素为参照峰，特征峰的相对保留
时间分别为:峰1：0.063(±5％)、峰2：0.069(±5％)、峰3：0.097(±5％)、
峰4：0.122(±5％)、峰5：0.131(±5％)、峰6：0.261(±5％)、峰7：0.273
(±5％)、峰8：0.300(±5％)、峰9：0.311(±5％)、峰10：0.411(±5％)、
峰11：0.476(±5％)、峰12：0.602(±5％)、峰13：0.618(±5％)、峰14：
0.644(±5％)、峰15：0.652(±5％)、峰16：0.671(±5％)、峰17：0.681
(±5％)、峰18：0.691(±5％)、峰19：0.713(±5％)、峰20：0.732(±5％)、
峰21：0.749(±5％)、峰22：0.768(±5％)、峰23：0.783(±5％)、峰24：
0.7...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丹，冯彩丽，徐江平，
申请(专利权)人：舒泰神北京生物制药股份有限公司，北京舒泰神新药研究有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11