一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将人参叶粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；步骤2：将萃取液在石墨碳SPE柱存在的条件下离心，对离心后的液体过滤得到滤液；步骤3：将滤液采用液相色谱法分析；本发明专利技术提供了一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，该方法操作简单，测定精度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及实验室检测领域，特别是一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法。
技术介绍
2015年药典记载：取本品粉末约0.2g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷30ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇30ml，加热回流3小时，提取液低温蒸干，加水10ml使溶解，加石油醚(30～60℃)提取2次，每次10ml，弃去醚液，水液通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱长为15cm)，以水50ml洗脱，弃去水液。再用20％乙醇50ml洗脱，弃去20％乙醇洗脱液，继用80％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液70ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。LC测试的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05％磷酸溶液(20：80)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于1500。药典的方法操作过程复杂，洗脱次数多，对操作人员的操作技能要求高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，该方法操作简单，测定精度高。本专利技术提供的技术方案为：一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将人参叶粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；步骤2：将萃取液在石墨碳SPE柱存在的条件下离心，对离心后的液体过滤得到滤液；步骤3：将滤液采用液相色谱法分析；液相色谱分析条件为：a)仪器：双三元液相色谱仪b)色谱柱：50×2.1mm1.7μmc)柱温：40℃d)流速：0.3mL/mine)流动相：乙腈-水；梯度洗脱；其中梯度洗脱具体为在0-1min时流动相为乙腈：水，其体积比为60:40；1-3min时流动相为乙腈：水，其体积比为70:30；3-8min时流动相为乙腈：水，其体积比为80:20；f)检测波长：203nm。在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的步骤1具体为：S11：将人参叶粉碎后，过筛；S12：称取0.2重量份罗汉果粉，与1重量份硅藻土混合均匀待用；S13：在预先放好过滤膜的萃取池中加入步骤2所得到的混合物，加入适量的硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度110℃；静态萃取时间7min；冲洗体积80％；静态循环次数3次。在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的萃取池的体积为10ml。在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的静态萃取的压力为1500psi。在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的静态萃取的吹扫时间为60s。在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的步骤2具体为将萃取液稀释后加入到离心管中净化，然后过滤后得到滤液，所述的离心管中加有石墨碳SPE柱。在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的双三元液相色谱仪为ThermoU3000UHPLC液相色谱仪。在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的色谱柱为ThermoSyncronisDim.(mm)AQ色谱柱。在上述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法中，所述的ASE萃取法采用的是ASE350快速溶剂萃取仪。本专利技术在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：本专利技术的萃取方法操作简单，精度与药典方法的精度一致，重复性好。附图说明图1为本专利技术的色谱分析人参皂苷Rg1有效性验证的直角坐标图；图2为本专利技术的色谱分析人参皂苷Re有效性验证的直角坐标图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制。实施例1：将人参叶样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约0.2g，精密称定，与1g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好过滤膜的ASE10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移至蒸发皿中蒸干后用甲醇溶解并定容至10mL容量瓶，吸取1ml样品液加入装有100mgGCB的2ml离心管进行净化，溶液过0.22微米滤膜后进入HPLC测定。萃取条件(见表1)为：表1与药典接近萃取池体积(ml)10萃取溶剂甲醇压力(psi)1500温度(℃)110静态萃取时间(min)7静态循环次数3冲洗体积(％)80吹扫时间(s)60分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：a)仪器：Thermo双三元液相(U-3000)b)色谱柱：ThermoSyncronisDim.(mm)AQ1.7μm50×2.1mmc)柱温：40℃d)流速：0.3mL/mine)流动相：乙腈-水梯度洗脱(1min乙腈：水的体积比为60:40；1-3min乙腈：水的体积比为70:30；3-8min乙腈：水的体积比为80:20)f)检测波长：203nm色谱分析有效性验证：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg10.2mg、人参皂苷Re0.2mg的溶液。取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml约含0.2mg的混合溶液，即得，然后分别精密吸取该溶液0.5μl、1μl、1.5μl、2μl、3μl进入LC测定，并依照上述方法测定。以浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归，求得回归方程：人参皂苷Rg1y＝1264.2x+7.6763，R2＝0.99979,人参皂苷Rg1y＝1148.8x-0.96132，R2＝0.99998,人参皂苷Rg1在0.0911～0.5466mg/ml,人参皂苷Rg1在0.1013～0.6078mg/ml范围内呈良好的线性关系。表2和图1为人参皂苷Rg1线性试验结果；表3和图2为人参皂苷Re线性试验结果；其中，图1和2的横坐标表示浓度，纵坐标表示峰面积。表2人参皂苷Rg1线性试验结果表3人参皂苷Re线性试验结果1.1实施例1的萃取方法的重现性验证：取相同批号的样品(批号：15071601)0.2g，共3份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品人参皂苷Rg1和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将人参叶粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；步骤2：将萃取液在石墨碳SPE柱存在的条件下离心，对离心后的液体过滤得到滤液；步骤3：将滤液采用液相色谱法分析；液相色谱分析条件为：a)仪器：双三元液相色谱仪b)色谱柱：50×2.1mm1.7μmc)柱温：40℃d)流速：0.3mL/mine)流动相：乙腈‑水；梯度洗脱；其中梯度洗脱具体为在0‑1min时流动相为乙腈：水，其体积比为60:40；1‑3min时流动相为乙腈：水，其体积比为70:30；3‑8min时流动相为乙腈：水，其体积比为80:20；f)检测波长：203nm。

【技术特征摘要】
1.一种人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将人参叶粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；
步骤2：将萃取液在石墨碳SPE柱存在的条件下离心，对离心后的液体过滤得到滤液；
步骤3：将滤液采用液相色谱法分析；
液相色谱分析条件为：
a)仪器：双三元液相色谱仪
b)色谱柱：50×2.1mm1.7μm
c)柱温：40℃
d)流速：0.3mL/min
e)流动相：乙腈-水；梯度洗脱；
其中梯度洗脱具体为在0-1min时流动相为乙腈：水，其体积比为60:40；1-3min时流动
相为乙腈：水，其体积比为70:30；3-8min时流动相为乙腈：水，其体积比为80:20；
f)检测波长：203nm。
2.根据权利要求1所述的人参叶中人参皂苷Rg1和Re的测定方法，其特征在于，所述
的步骤1具体为：
S11：将人参叶粉碎后，过筛；
S12：称取0.2重量份罗汉果粉，与1重量份硅藻土混合均匀待用；
S13：在预先放好过滤膜的萃取池中加入步骤2所得到的混合物，加入适量的硅藻土至达
到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；
萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈学松，廖强，韦日伟，陈佳丽，姚泳成，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西;45