一种植物乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种植物乳杆菌及其应用，具体涉及一种新的植物乳杆菌LP45（YMC1005），CGMCC?NO.8072；还涉及植物乳杆菌LP45在降低胆固醇、提高免疫力，抑制肠道有害菌方面的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种植物乳杆菌及其应用
本专利技术涉及一种乳杆菌属的新菌株，更准确地说，本专利技术描述了植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）的一个新菌株LP45，属于生物

技术介绍
益生菌对人类的健康有很大帮助，科学家们已对其进行了几十年的研究，现已证明在肠胃调节、抗氧化、降胆固醇、预防胃肠道癌症、免疫调节等方面均起到很好的作用。但是，益生菌的菌株种属范围非常广，即便同一种属的不同菌株之间个体差异都非常大，所以筛选工作非常困难，现在益生菌的应用中普遍存在摄入人体后生存率不高，对胃肠的吸附能力不强，在增强人体免疫力和抑制致病菌能力方面的表现不理想。因此，是否研究筛选到益生功能最优越的菌株作为益生菌应用就成为了如今益生菌研究的关键所在。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种商业编号为LP45，保藏编号为YMC1005的植物乳杆菌，它具备在人体胃肠中具有很高的生存率、较强的胃肠粘附力，提高人体免疫力的功能，能显著抑制胃、肠道致病菌，具备降低胆固醇的潜力，另一方面提供上述新菌株的用途。为实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案为：一种植物乳杆菌LP45，该植物乳杆菌已经于2013年8月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏号为：CGMCCNo.8072。植物乳杆菌LP45具有胃肠道吸附能力。植物乳杆菌LP45具有抑制胃肠道致病菌的功能。植物乳杆菌LP45具有降低胆固醇的功能。植物乳杆菌LP45具有提高免疫力的功能。植物乳杆菌LP45用于制备抑制胃肠道致病菌的药品或食品。植物乳杆菌LP45用于制备降低动物或人类体内胆固醇浓度的药品或食品。植物乳杆菌LP45用于制备提高免疫力的药品或食品。上述食品主要包括普通食品、减肥食品、保健食品。在专利技术所提供的体外试验证实，植物乳杆菌LP45（YMC1005或L45）具备良好的耐酸性及耐胆盐性，在胃肠道中生存率较高，并具备较强的胃肠道吸附能力，具备提高免疫力的功能，可有效抑制有害菌的繁殖，本专利技术所提供的菌株可显著降低胆固醇含量，在对心血管疾病的预防或治疗中具备较大潜力。附图说明图1为本专利技术植物乳杆菌LP45（YMC1005或L45）的基因指纹图谱。在图1中：M为Maker、1为植物乳杆菌LP45（YMC1005或L45）、2为植物乳杆菌ATCC14917。菌种保存本专利技术菌种命名为植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）LP45，于2013年8月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号为：CGMCCNo.8072。保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。具体实施方式下面将结合附图和实施例对本专利技术进行进一步详细的说明。实施例1菌株的筛选和保藏本专利技术的植物乳杆菌LP45（YMC1005或L45）是自内蒙古乌兰察布市四子王旗乌兰哈达苏木站乌兰哈达嘎查的传统酸奶酪中分离筛选获得，具体分离鉴定步骤如下：将内蒙古四子王旗酸奶酪样品溶解于灭菌生理盐水试管中，充分震荡混匀，混匀后使用接菌环蘸取混合液体并于MRS平板上划线培养（37℃72h），分离菌株。用接菌环从第一代平板挑取单菌落，在新MRS平板上划线培养（37℃72h），进行纯化。同样方法再纯化2次，使最终平板上为同一形态菌落为止。挑取单菌落接菌于MRS液体培养基中37℃培养18h，以备保藏和鉴定使用。将液体培养基菌悬液收集至灭菌离心管中，清洗离心2次，进行基因组DNA的提取，提取完毕后，利用通用引物27f：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，1495r：5-'CTACGGCTACCTTGTTACGA-3'进行16SrDNA的PCR实验，完成PCR后将最终PCR产物进行测序，并将测序结果与GeneBank中相关序列进行比较，比较结果显示LP45（YMC1005或L45）属于植物乳杆菌。将LP45（YMC1005或L45）及ATCC14917(植物乳杆菌)菌株的纯培养液进行清洗离心，将获得的菌体进行基因组DNA的提取，提取完毕后，利用随机引物5'-GACGGATCAG-3'进行RAPD实验，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，并进行凝胶成像，对比两株植物乳杆菌的电泳条带，结果显示，植物乳杆菌LP45（YMC1005或L45）与植物乳杆菌ATCC14917属于同一种属的不同菌株，结果见附图1。将植物乳杆菌LP45（YMC1005或L45）于2013年8月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号为：CGMCCNo.8072。实施例2胃肠道生存率试验采用人工消化液实验（胃酸抵抗性以及胆汁酸抵抗性）来研究植物乳杆菌LP45（YMC1005）在人的肠道环境下的生存性。1、耐酸性试验植物乳杆菌LP45（YMC1005或L45）由冻存管活化，经3次活化（第一次活化24h，第二次活化14h，第三次活化18h）后3%接种于4支pH3.0（使用盐酸调pH）的液体MRS培养基试管，每支试管装有10ml的液体MRS培养基。取1支pH3.0的液体MRS培养基试管3%接种后用于测0h的活菌数；另三支pH3.0的液体MRS培养基试管3%接种后用于测4h的OD600，取其中两支测活菌数。存活率=4h活菌数/0h活菌数*100%2、耐胆盐试验植物乳杆菌LP45（YMC1005或L45）由冻存管活化，经3次活化（第一次活化24h，第二次活化14h，第三次活化18h）后3%接种于4支0.3%胆盐（sigma胆盐）的液体MRS培养基试管，每支试管装有10ml的液体MRS培养基。取1支0.3%胆盐的液体MRS培养基试管3%接种后用于测0h的活菌数；另三支0.3%胆盐的液体MRS培养基试管3%接种后用于测4h的OD600，取其中两支测活菌数。存活率=4h活菌数/0h活菌数*100%结果和结论：经试验得到LP45（YMC1005或L45）在pH3.0的液体培养基中，4小时后的存活率达到了122.4%，高于竞品鼠李糖乳杆菌LGG（98.9%）及嗜酸乳杆菌NCFM（51.2%）；在0.3%胆汁酸的液体培养基中，4小时后生存率达到了47.8%。高于竞品菌株LGG（1.3%）及NCFM（2.1%）。众所周知，益生菌在被摄取后需经受消化液的考验才能到达肠道，本实验结果证明了LP45（YMC1005或L45）具备较高的胃肠道生存率，也显示了菌株作为益生菌开发的潜力。实施例3胃肠道吸附能力试验采用LP45（YMC1005或L45）菌株吸附Caco-2细胞来研究LP45（YMC1005或L45）菌株对胃肠道上皮细胞的吸附能力，发现LP45（YMC1005或L45）粘附力为72。具体的操作步骤为：1、将人体肠道细胞株Caco-2以1ml0.05%胰岛素处理5min后，将细胞轻轻拍下，分装于96孔的培养盘中，每个孔洞中加入10000cells，每天换200μl新鲜的DMEM培养基。2、植物乳酸杆菌LP45（YMC1005或L45）分别以MRS活化两次后，接种至5mlMRSbroth进行培养，于24小时后取1ml以6000rpm离心10分钟后，以PBS（pH7.2）清洗两次得到乳酸菌菌液。加入20μl乳酸菌菌液于步骤1的细胞中，接着培养1小时使乳酸菌附着，3、乳酸菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物乳杆菌LP45，该植物乳杆菌已经于2013年8月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏号为：CGMCC?No.8072。

【技术特征摘要】
1.一种植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）LP45，该植物乳杆菌已经于2013年8月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏号为：CGMCCNo.8072。2.一种如权利要求1所述的植物乳杆菌LP45的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵林森，龄南，葛春美，马新颖，齐世华，
申请(专利权)人：河北一然生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：