用于调节MIR-21活性的微RNA化合物以及方法技术

本文描述了用于抑制miR-21活性的组合物和方法。这些组合物具有某些产生miR-21活性的有效抑制剂的核苷修饰型态。这些组合物可用于抑制miR-21，以及治疗与miR-21的异常表达相关的疾病，诸如纤维化及癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调节MIR-21活性的微RNA化合物以及方法本申请要求2011年4月25日提交的美国临时申请案61/478，767号以及2011年12月I日提交的美国临时申请案61/565，779号的优先权益，这些申请案出于任何目的通过引用以其全文结合在此。专利
本文提供用于调节miR-21活性的方法和组合物。相关技术说明微RNA (microRNA)亦称为“成熟微RNA”，是在植物及动物的基因组中编码的小型(长约18-24个核苷酸)非编码RNA分子。在某些情况下，高度保守的内源性表达的微RNA通过结合至特定mRNA的3’ -非翻译区(3’ -UTR)来调控基因的表达。已在植物和动物中鉴别出超过1000种不同的微RNA。某些成熟微RNA似乎来源于长度通常为数百个核苷酸的长内源性初级微RNA转录物(亦称为初级微RNA、初级mir、初级miR或初级微RNA前体)(Lee等人，EMBO J.，2002，21 (17)，4663-4670)。对微RNA的功能性分析揭示，这些小型非编码RNA促进动物的不同生理过程，包括发育时序、器官发生、分化、成型(patterning)、胚胎发生、生长控制及渐进式细胞死亡。微RNA参与的特定过程的实例包括干细胞分化、神经生成、血管生成、造血作用及胞吐作用(由 Alvarez-Garcia 及 Miska, Development (《发育》),2005, 132, 4653-4662 评述)。专利技术概述 本文提供包含经修饰寡核苷酸的化合物，其中经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21互补且经修饰寡核苷酸具有本文所述的核苷型态。本文提供抑制miR-21活性的方法，包括使细胞与本文所述的化合物接触。在某些实施例中，细胞在活体内。在某些实施例中，细胞在活体外。本文提供治疗与miR-21相关的疾病的方法，包括向患有与miR-21相关的疾病的受试者给予本文所述的化合物。在某些实施例中，动物是人类。本文所述的化合物被提供用于疗法中。本文提供包含由8至22个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态I的至少8个连续核苷:(R) x-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Nq_Nz其中每个R独立地是非双环核苷；X是I至4 ;每个Nb独立地是双环核苷；每个Nq独立地是非双环核苷；并且每个Nz独立地是经修饰的核苷。本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态II的至少8个连续核苷:Nm-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Nq_Nz其中Nm独立地是不为双环核苷的经修饰核苷；每个Nb独立地是双环核苷；每个Nq独立地是非双环核苷；且Nz独立地是经修饰的核苷。本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态III的至少8个连续核苷:(R) x-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Ny_Nz其中每个R是非双环核苷；X是I至4 ;每个Nb是双环核苷；每个Nq是非双环核苷；Ny是经修饰的核苷或未经修饰的核苷；且每个Nz是经修饰的核苷。 本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态IV的至少8个连续核苷:Nm-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Ny_Nz其中Nm是不为双环核苷的经修饰核苷；每个Nb是双环核苷；每个Nq是非双环核苷；NY是经修饰的核苷或未经修饰的核苷；且Nz是经修饰的核苷。本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态V的至少8个连续核苷:Nm-Nb- (Nq-Nq-Nb-Nb) 4_Nz其中Nm是不为双环核苷的经修饰核苷；每个Nb是双环核苷；每个Nq是非双环核苷；且Nz是经修饰的核苷。在核苷型态I或III的某些实施例中，X是1，X是2，X是3，或X是4。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，经修饰的寡核苷酸包含核苷型态1、I1、II1、IV或V的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个或22个连续核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，经修饰的寡核苷酸由核苷型态1、I1、II1、IV 或 V 之 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21 或 22 个连接的核苷组成。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21的核苷碱基序列(SEQ ID NO:1)至少90%互补、至少95%互补或100%互补。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，miR-21位置I上的核苷碱基与经修饰寡核苷酸的3’端上的第一核苷碱基配对。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个双环核苷独立地选自LNA核苷、cEt核苷及ENA核苷。[0031 ] 在本文提供的任何化合物的某些实施例中，至少两个非双环核苷包含彼此不同的糖部分。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个非双环核苷具有相同类型的糖部分。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个双环核苷为cEt核苷。在某些实施例中，cEt核苷是S-cEt核苷。在某些实施例中，cEt核苷是R-cEt核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个双环核苷是LNA核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个非双环核苷独立地选自β -D-脱氧核糖核苷、β -D-核糖核苷、2’ -O-甲基核苷、2’ -O-甲氧基乙基核苷及2’ -氟核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个非双环核苷独立地选自β -D-脱氧核糖核苷及2’ -O-甲氧基乙基核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个非双环核苷是β-D-脱氧核糖核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个非双环核苷是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个双环核苷包含非甲基化核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，不超过2个非双环核苷是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在某些此类实施例中，每个其他非双环核苷是β-D-脱氧核糖核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，5’最末端非双环核苷及3’最末端非双环核苷是2’-0-甲氧基乙基核苷且其他每个非双环核苷是β-D-脱氧核糖核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，两个非双环核苷是2’ -MOE核苷且每个其他非双环核苷是β -D-脱氧核糖核苷。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化合物，包含由8至22个连接的核苷组成的一种经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR?21(SEQ?ID?NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态I的至少8个连续核苷：(R)X?NB?NQ?NQ?NB?(NQ?NQ?NQ?NB)3?NQ?NZ其中每个R独立地是一种非双环核苷；X是1至4；每个NB独立地是一种双环核苷；每个NQ独立地是一种非双环核苷；并且每个NZ独立地是一种经修饰的核苷。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.04.25 US 61/478,767;2011.12.01 US 61/565,7791.一种化合物，包含由8至22个连接的核苷组成的一种经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21(SEQ ID NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态I的至少8个连续核苷: (R) X-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Nq_Nz 其中每个R独立地是一种非双环核苷；X是I至4 ; 每个Nb独立地是一种双环核苷； 每个Nq独立地是一种非双环核苷；并且 每个Nz独立地是一种经修饰的核苷。2.一种化合物，包含由8至19个连接的核苷组成的一种经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21(SEQ ID NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态II的至少8个连续核苷:Nm-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Nq_Nz 其中Nm独立地是一种不为双环核苷的经修饰核苷； 每个Nb独立地是一种双环核苷； 每个Nq独立地是一种非双环核苷；并且 Nz独立地是一种经修饰的核苷。3.一种化合物，包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21(SEQ ID NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态III的至少8个连续核苷:` (R) X-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Ny_Nz 其中每个R是一种非双环核苷；X是I至4 ; 每个Nb是一种双环核苷； 每个Nq是一种非双环核苷； Ny是一种经修饰的核苷或一种未经修饰的核苷；并且 每个Nz是一种经修饰的核苷。4.一种化合物，包含由8至19个连接的核苷组成的一种经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21(SEQ ID NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态IV的至少8个连续核苷:Nm-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Ny_Nz其中Nm是一种不为双环核苷的经修饰核苷； 每个Nb是一种双环核苷； 每个Nq是一种非双环核苷； Ny是一种经修饰的核苷或一种未经修饰的核苷；并且 Nz是一种经修饰的核苷。5.一种化合物，包含由8至19个连接的核苷组成的一种经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21(SEQ ID NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态V的至少8个连续核苷: Nm-Nb- (Nq-Nq-Nb-Nb) 4-Nz 其中Nm是一种不为双环核苷的经修饰核苷；每个Nb是一种双环核苷； 每个Nq是一种非双环核苷；并且 Nz是一种经修饰的核苷。6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中该经修饰寡核苷酸包含核苷型态1、I1、II1、IV或V的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个或22个连续核苷。7.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21的核苷碱基序列(SEQ ID NO:1)至少90%互补、至少95%互补或100%互补。8.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中每个双环核苷独立地选自LNA核苷、cEt核苷以及ENA核苷。9.如权利要求1至7中任一项所述的化合物,其中每个双环核苷是一种S-cEt核苷。10.如权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中每个双环核苷是一种LNA核苷。11.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中每个非双环核苷独立地选自β -D-脱氧核糖核苷以及2’ -O-甲氧基乙基核苷。12.如权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中每个非双环核苷是一种β-D-脱氧核糖核苷。13.如权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中每个非双环核苷是一种2’-0_甲氧基乙基核苷。14.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中该经修饰寡核苷酸由核苷型态1、I1、II1、IV 或 V 的 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21 或 22 个连接的核苷组成。15.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中至少一个核苷间键是一种经修饰核苷间键，或其中每个核苷间键是一种经修饰核苷间键，并且其中该经修饰核苷间键可任选地为一种硫代磷酸酯核苷间键。16.如权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中至少一个胞嘧啶是一种5-甲基胞嘧啶，或其中每个胞嘧啶是一种5-甲基胞嘧啶。17.如权利要求1所述的化合物，其中: a.R由四个连接的核苷Nk1-Nk2-Nk3-Nk4组成，其中Nki是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷，并且的每一个是一种β _D-脱氧核糖核苷； 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且 Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷； b.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核苷；X是I ; 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且 Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷； c.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核苷；Χ是I ; 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；并且Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；d.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核昔；X是1 ;每个Nb是一种S-cEt核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种S-cEt核苷；e.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核昔；X是1 ;每个Nb是一种LNA核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；或f.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核昔；X是1 ;每个Nb是一种LNA核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种LNA核苷。18.如权利要求2所 述的化合物，其中:a.Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是一种S-cEt核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；b.Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是一种S-cEt核苷；每个Nq是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；并且Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：B巴特，
申请(专利权)人：莱古路斯治疗法股份有限公司，
类型：
国别省市：