本发明专利技术公开了一种布劳特菌AUH-JLD56及其在牛蒡苷元转化中的应用，属于细菌技术领域。布劳特菌（Blautiasp.）AUH-JLD56，保藏号为CGMCCNo.8032。其应用包括下述步骤：（1）菌株AUH-JLD56的培养；（2）底物牛蒡苷元粗品与菌株AUH-JLD56共培养及代谢产物的分离纯化。本发明专利技术的菌株能将中药牛蒡子中的牛蒡苷元粗品高效转化为3′-去甲基-牛蒡苷元，解决了3′-去甲基-牛蒡苷元资源缺乏的问题，为牛蒡子中药理活性物质微生物代谢产物的研究和开发奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种布劳特菌AUH-JLD56及其在牛蒡苷元转化中的应用，属于细菌
。布劳特菌（Blautiasp.）AUH-JLD56，保藏号为CGMCCNo.8032。其应用包括下述步骤：（1）菌株AUH-JLD56的培养；（2）底物牛蒡苷元粗品与菌株AUH-JLD56共培养及代谢产物的分离纯化。本专利技术的菌株能将中药牛蒡子中的牛蒡苷元粗品高效转化为3′-去甲基-牛蒡苷元，解决了3′-去甲基-牛蒡苷元资源缺乏的问题，为牛蒡子中药理活性物质微生物代谢产物的研究和开发奠定了基础。【专利说明】布劳特菌AUH-JLD56及其在牛蒡苷元转化中的应用
本专利技术涉及细菌
。
技术介绍
牛赛予(Actium为菊科草本植物牛蒡的干燥成熟果实,在我国古代医药典籍中多有记载，具有疏散风热、宣肺透疹、消肿解毒等功效，临床上则主要用于治疗急性咽喉肿痛、风热感冒、喉源性咳嗽和出疹性疾病等，迄今已有几千年的使用史。由于牛蒡子毒副作用低，临床应用中尚未见有不良反应的报告，因此，对牛蒡子中药理活性物质的研究和挖掘已成为国内外研究热点。木质素和挥发油是牛蒡子中的标志性化合物，目前已从牛蒡子中分离得到17种木质素类化合物，其中牛蒡苷(Arctiin，简称AT)是含量最高的木质素成分之一。研究表明，AT在酸性条件下或在人肠道微生物菌群产生的葡萄糖苷酶作用下，可被水解为牛蒡苷元(Arctigenin，简称AG)，AG具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒以及免疫调节活性，对肝细胞等具有保护作用(中襄麥，39 (3):467-470, 2008)。牛蒡苷元被人体或其他动物摄入体内后可被寄居在肠道的微生物菌群转化为不同代谢产物。早在1992年，日本学者Mitsuhiko Nose等{Planta Medicine,58(6):520-523, 1992)利用小鼠肠道菌群转化牛蒡苷元时曾检测到:V -位脱去甲基的牛蒡苷元代谢产物，即3'-去甲基-牛蒡苷元(3' -desmethylarctigenin,简称3' -DMAG),由于代谢产物3' -DMAG从未在天然牛蒡子提取物被检出报道，故推测是小鼠肠道菌群将AG转化为Y -DMAG。2007年，日本学者Masao Hattori等从人新鲜粪样中分离了一株能将底物AG同时代谢为7种不同代谢产物的真细菌属菌株及/hcteri?Sp.ARC-2{Biological and Pharmaceutical Bulletin, 30 (5): 904-911，2007),仅从高效液相色谱所出峰的峰面积来看，产物4 (即4' -O-methyl-dihydroxyenterolactone)和产物7 (即31 1 -desmethylarctig`enin)最高，产物 I (即 dihydroxyenterolactone)的峰面积也较高，产物3' -DMAG为高效液相色谱图Fig.2中的峰6。但从通过硅胶柱后获得物质质量来看，产物I (63毫克)和产物4 (63.5毫克)的量最多。因此，代谢产物:V -DMAG因合成量较低，根本无法通过菌株ARC-2转化底物牛蒡苷元来大量获得。对于产物3' -DMAG而言，迄今国内外尚未见能将底物牛蒡苷元只转化为3, -DMAG的报道；有关化合物3, -DMAG的化学合成虽在2011年有过报道，但反应需要有恶臭和强刺激性的物质吡啶来合成OT浐沪医药大学学报，13 (4):30-33, 2011)，合成过程对人体健康危害较大，且化学合成所需成本较高，基于此原因，目前国内外市场尚无3' -DMAG销售。由于化合物3' -DMAG资源匮乏，有关其生理活性方面研究报道较少，目前仅一篇文献报道3' -DMAG除具有与AG相似的抗炎活性外，还表现出不同于AG的一些生理功能，如相同浓度下3' -DMAG对雌激素受体的亲和力明显强于AG {Molecules, 18: 1122-1127，2013)。随着3' -DMAG生理功能研究的不断深入，今后极有可能将3' -DMAG开发为不同于目前牛蒡子药效的其他新药。
技术实现思路
本专利技术提供一种布劳特菌iBlautia sp.) AUH-JLD56及其在牛蒡苷元转化中的应用，此菌株能将中药牛蒡子中的牛蒡苷元(AG)粗品高效转化为3' -DMAG，解决了 3' -DMAG资源缺乏的问题，对3' -DMAG药理活性及新药研发具有极大的推动作用。本专利技术所采取的技术方案是: 一种布劳特菌(财拙iia sp.) AUH-JLD56，保藏号为CGMCC N0.8032。布劳特菌财aWia sp.AUH-JLD56 (KF374935)是从人粪样中分离得到的一株革兰氏阳性严格厌氧细菌菌株，该菌株在厌氧工作站内能将中药牛蒡子提取物的酸水解物粗品(即牛蒡苷元粗品)高效转化为3' -DMAG。有关3' -DMAG微生物生物合成途径如下所示:【权利要求】1.一种布劳特菌(财awiia sp.) AUH-JLD56，保藏号为 CGMCC N0.8032。2.根据权利要求1所述的布劳特菌AUH-JLD56在牛蒡苷元转化中的应用，其特征在于包括下述步骤: Cl)菌株AUH-JLD56的培养； (2)底物牛蒡苷元粗品与菌株AUH-JLD56共培养； (3)代谢产物的分离纯化。3.根据权利要求2所述的布劳特菌AUH-JLD56在牛蒡苷元转化中的应用，其特征在于所述菌株AUH-JLD56的培养方法为:将低温冷冻保存的菌株AUH-JLD56融化并按15-20%接种量接种到盛有新鲜BHI液体培养基的试管中，在厌氧工作站内37°C下培养18-24小时；再以10-15%接种量将试管中的菌株AUH-JLD56重新转接到盛有新鲜BHI液体培养基中，继续在厌氧工作站内培养18-24小时作为种子液。4.根据权利要求2所述的布劳特菌AUH-JLD56在牛蒡苷元转化中的应用，其特征在于所述底物牛蒡苷元粗品与菌株AUH-JLD56共培养方法为:将菌株AUH-JLD56的种子液按10-15%接种量转接到BHI液体培养基中培养，然后加入牛蒡苷元粗品，使得牛蒡苷元在培养基中的浓度不超过3.0毫摩尔/升，在厌氧工作站内培养2~3天，即可将底物牛蒡苷元粗品高效转化为3,-去甲基-牛蒡苷元。5.根据权利要求4所述的布劳特菌AUH-JLD56在牛蒡苷元转化中的应用，其特征在于所述牛蒡苷元粗品中底物牛蒡苷元浓度为150-250毫摩尔/升。6.根据权利要求2所述的布劳特菌AUH-JLD56在牛蒡苷元转化中的应用，其特征在于所述代谢产物的分离纯化方法为:用等体`积的乙酸乙酯将三角瓶内培养物萃取2次，萃取液过滤后蒸干，加入100%甲醇溶液，用制备柱在HPLC上进行分离制备3'-去甲基-牛蒡苷元。【文档编号】C12R1/01GK103509741SQ201310368975【公开日】2014年1月15日 申请日期:2013年8月22日 优先权日:2013年8月22日【专利技术者】王秀伶, 刘明月, 于秀梅 申请人:河北农业大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种布劳特菌（Blautia?sp.）AUH?JLD56，保藏号为CGMCC?No.8032。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王秀伶，刘明月，于秀梅，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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